聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780作用的实验研究

目的:观察聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780的抑制作用,以评价其作为抗肿瘤药物的价值。方法:MTT检测偶联物对卵巢癌细胞株A2780的抑制作用;形态学观察经作用后的细胞生长情况;流式细胞仪检测作用后细胞凋亡情况。结果:偶联物对卵巢癌细胞株A2780有显著抑制作用,并呈现量效关系,且其IC50有显著提高;形态学和流式细胞仪检测结果表明,聚轮烷-喜树碱偶联物能够抑制癌细胞生长。结论:聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780有显著的抑制作用,其机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。

CD59 RNAi逆转录病毒载体转染卵巢癌细胞株A2780的构建

目的获得携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780。方法设计能转录产生靶向CD59小发夹RNA(sh RNA)转染逆转录病毒载体p SUPER retro neo+gfp质粒,构建p SUPER-si CD59重组质粒,将重组质粒导入卵巢癌细胞株A2780内。鉴定转染后细胞株能形成稳定的扩增。结果重组质粒经PCR凝胶电泳、核苷酸测序证实与设计序列一致;重组质粒转染卵巢癌细胞株A2780,可稳定表达绿色荧光蛋白。结论携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780的建立为深入进行肿瘤细胞研究奠定了基础。

雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株A2780作用的实验研究

目的:观察雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株的A2780的抑制作用,以及与顺铂联合用药的协同作用,并与顺铂单独作用相比较,评价其作为抗肿瘤药物的价值。方法:MTT检测不同的用药方式对卵巢癌细胞A2780增殖的抑制作用;形态学观察经雷公藤内酯醇作用后细胞的生长情况;流式细胞仪检测雷公藤内酯醇作用后细胞的凋亡情况。结果:1)雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞A2780的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-效关系(P<0.05)。其在较小的浓度下即可产生很好的抑制效果(5 mg/L时,抑制率80%;0.5 mg/L时,抑制率60%;(0.005 mg/L)时,抑制率40%)。2)雷公藤内酯醇与顺铂相比较,在浓度<5 mg/L雷公藤内酯醇队卵巢癌细胞A2780的抑制作用优于顺铂(P<0.05),但在大于此浓度下则两者无明显差异(P>0.05);在24、48、72 h作用点时,雷公藤内酯醇IC50均小于顺铂IC50。3)在低浓度下,雷公藤与顺铂两者联合用药后的抑制率大于顺铂单用药抑制率,而小于雷公藤内酯醇单用药抑制率,其抑制率受作用时间影响更大,随作用时间的延长其抑制率明显增高,尤其在作用48 h以后,抑制率增加更为明显(P<0.05)。4)流式细胞检测经雷公藤内酯醇作用后A2780细胞有凋亡(P<0.05)。倒置相差显微镜下观察经雷公藤内酯醇作用后细胞生长明显受到抑制。结论:雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株A2780有明显的抑制作用,有量-效、时-效关系;在较低的浓度下,其抑制率明显高于顺铂;雷公藤内酯醇与顺铂联合用药的作用,随时间的延长抑制率增大。雷公藤内酯醇抑制肿瘤的作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。

COX-2在上皮性卵巢肿瘤的表达及塞来昔布对卵巢癌A2780细胞株凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在上皮性卵巢肿瘤的表达及环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)在体外对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法 (1)采用免疫组化SP法检测COX-2在65例上皮性卵巢癌,18例交界性、18例良性上皮性卵巢肿瘤,以及9例正常卵巢组织中的表达。(2)用流式细胞仪测定塞来昔布在体外对A2780细胞凋亡的影响。结果 (1)COX-2在上皮性卵巢癌组(73.8%)及交界性卵巢肿瘤组的表达(66.7%)显著高于良性卵巢肿瘤组(16.7%)及正常卵巢组(11.1%),P均<0.05。(2)流式细胞仪测定结果显示,塞来昔布呈剂量依赖方式诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡(P<0.05)。结论 (1)COX-2在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达明显增强,COX-2可能在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤的发生发展中起一定作用。(2)体外特异性COX-2抑制剂塞来昔布能够诱导人卵巢癌A2780细胞株凋亡,可能成为上皮性卵巢癌化疗的有效药物。

miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响

探究miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。方法 选取我院2021年5月到2023年5月收治的卵巢癌患者,总计40例,取其癌灶组织及癌旁组织。通过对miR-515-5p的靶基因进行检测,观察其在细胞系A2780细胞增殖和转移情况。结果 miR-515-5p经qRT-PCR检测验证发现,A2780与正常细胞系的IOSE-80的表达明显更低(P<0.05);经过CCK-8测试结果表示,miR-515-5p可抑制卵巢癌细胞增殖活性,且在72h时间点对比mimics NC组体现差异性(P<0.05);miR-515-5p对癌细胞迁移和转移方面,miR-515-5p mimics组可对癌细胞迁移转移能力明显抑制,对比mimics NC组有差异(P<0.05),且miR-515-5p inbitor组和inhibitor NC组对比,其具备较强的促迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-515-5p可有效抑制卵巢癌细胞的增殖转移,具备一定的抑癌效果。

大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910生长的抑制作用

目的 :观察大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制作用。方法 :用不同时间不同剂量大蒜素作用于HO8910 ,通过肿瘤细胞药敏试验 ,观察肿瘤细胞存活率 ,并通过透射电镜观察一定剂量的大蒜素作用于HO8910一定时间后 ,肿瘤细胞形态的改变。结果 :5 0～ 10 0 μg/ml大蒜素可显著抑制肿瘤细胞的生长 ,且在作用 2h时即出现显著的抑制 ,随着作用时间的延长 ,抑制作用愈明显 ,72h达到高峰。透射电镜结果显示 :5 0 μg/ml的大蒜素作用HO8910 2 4h ,细胞肿胀 ,细胞膜破碎 ,胞浆脱落 ,细胞核裸露 ;小剂量 (2 5 μg/ml)则HO8910呈现细胞凋亡样改变 :细胞胞浆呈空泡 ,染色质边集 ,核仁固缩 ,胞质呈片状脱落。结论 :大蒜素可显著抑制HO8910的生长 ,且有明显的时间及剂量效应。大剂量的大蒜素对HO8910细胞呈直接杀伤作用 。

姜黄素对人卵巢癌细胞株skov_3生长的影响

目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3体外生长的的影响。方法采用MTT法测定姜黄素不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株skov3生长的抑制作用,计算细胞生长抑制率;光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果姜黄素具有诱导人卵巢癌细胞株skov3细胞凋亡的作用,呈剂量和时间依赖性。部分细胞出现凋亡形态学改变。结论姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,能显著地抑制卵巢癌细胞sk-ov3的体外生长。

芹菜素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究

目的探讨芹菜素对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法运用细胞培养、光镜观察及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测芹菜素对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析芹菜素对SKOV3细胞增殖周期的影响。结果 10～80μmol/L芹菜素均能抑制SKOV3细胞的生长,且呈明显的时间、剂量依赖关系。细胞周期分析显示芹菜素组G2/M期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论芹菜素抑制SKOV3细胞增殖,可能通过使SKOV3细胞停滞在G2/M期而诱导其凋亡。

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨三氧化二砷对人卵巢癌细胞株 3AO细胞体外增殖和凋亡的影响作用。方法 人卵巢癌细胞株 3AO细胞体外培养。实验组三氧化二砷浓度分别为 0 5、1 0、2 0、4 0、8 0 μmol/L ,设加入空白培养液为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法 (MTT)及流式细胞技术 (FCM ) ,计算各组细胞的生长抑制率、细胞凋亡率 ,并进行细胞周期分析。结果 三氧化二砷有效地抑制 3AO细胞生长 ,具有时间及浓度依赖性 ,P <0 0 1;三氧化二砷作用后 ,3AO细胞凋亡率随时间及浓度升高而升高 ,P <0 0 1;三氧化二砷使 3AO细胞S期增加。结论 三氧化二砷抑制 3AO细胞生长 ,诱导其凋亡 ,并使其S期阻滞。

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用。方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异。结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Cytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点。结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响。人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的CoⅡ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系。

接合物蛋白Crk与CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用

目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用。方法采用免疫共沉淀法检测上皮性卵巢癌细胞株MACS中Crk和CrkL蛋白与已知的与肿瘤增殖相关的上下游结合蛋白的内源性结合;用可调节性siRNA敲低MACS细胞中内源性的Crk及CrkL,观察二者对细胞生长及存活能力的影响。结果免疫共沉淀显示卵巢癌细胞株MACS中,Crk与影响细胞生长增殖的上游蛋白p130Cas及下游蛋白Sos的结合明显强于CrkL,尽管Crk与CrkL表现出部分相同的免疫原性。免疫印迹显示在加入Dox后即Crk或CrkL表达沉默被启动。Crki/CrkLi细胞中加入Dox后Crk与CrkL表达明显降低[Dox+:Crk(0.021±0.001),CrkL(0.676±0.005);Dox-:Crk(0.544±0.003),CrkL(1.282±0.007),P<0.05]。对可调节性siRNA构建之可控性Crki/CrkLi细胞的连续动态观察发现,Crki细胞表现出细胞增殖力受限仍保存生存活力,而CrkLi细胞则表现出逐渐脱壁至死亡。结论 Crk及CrkL在卵巢癌细胞MCAS的恶性增殖中扮演着不同的作用,Crk蛋白的过度表达可能直接影响着卵巢癌细胞恶性增殖,而CrkL则可能更多地参与了细胞基本生存相关的生物行为。

高低转移卵巢癌细胞株差异表达基因在染色体定位及其功能(英文)

用基因芯片技术研究高(H)、低(L)转移卵巢癌细胞株(HO-8910PM和HO-8910)和正常卵巢上皮(C)基因表达谱差异,筛选与卵巢癌转移相关的基因,并利用生物信息学方法对检测结果进行差异基因在染色体定位和功能分析。结果:高、低转移卵巢癌细胞株比较表达差异2倍以上共有409个基因,其中表达上调(信号比的对数值[SLR]≥1)有271个,表达下调(SLR≤-1)有138个。从表达差异的基因在染色体定位分析,发现除1个基因未知其定位外,其余所有差异表达基因散在分布于各条染色体上,但以1号染色体最多有43个(占10．7％)。其次是6号染色体有39个(占9．6％),第三是2号染色体有29个(占7．1％)。第四是17号染色体有28个(占6．9％)。第五是3号染色体有25个(占6．2％)。第6是5号和11号染色体各有24个(各占5．9％)。而差异表达的基因发生在染色体短臂(q)的有264个(占64．7％),在13, 14,15,21和22号仅发现在q都有异常表达。从表达差异基因的分子功能分类看,属于酶和酶调控子基因为最多(104个,占25．4％),其次是信号传导基因(43个,占10．5％)。第3类是核酸结合基因(42个,占10．3％)。第4类是蛋白结合基因(34个,占8．3％)。以上4大类共占基因总数54．5％。还有功能未知的基因有76个,占18．6％。高、低转移卵巢癌细胞株差异表达基因散在分布在各条染色体上,但以1、6、2、17、3、5和11号染色体差异表达基因居多。肿瘤的转移是多基因共同作用的结果。4大类(酶和酶调控子、信号传导、核酸结合和蛋白结合)相关基因异常是我们今后研究卵巢癌转移的重要基因。

AM及其抑制剂对人卵巢癌细胞株(CAOV3)PKB活性的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenom edullin,AM)及AM受体阻断剂(AM22-52)对人卵巢癌细胞株CAOV3蛋白激酶B(PKB)活性的影响。方法以不同浓度的AM和AM22-52诱导CAOV3细胞,利用Western印迹方法,测定PKB活性的变化。结果AM和AM受体阻断剂AM22-52对t-PKB(total-PKB)的表达量均无明显影响;随着AM浓度(1×10-9～1×10-6mol/L)的增加,CAOV3细胞p-PKB活性随之升高,呈剂量依赖关系;AM受体阻断剂AM22-52(1×10-9～1×10-6mol/L)抑制CAOV3细胞内p-PKB活性,也呈剂量依赖效应。结论AM激活CAOV3细胞内的PKB信号通路,AM22-52可有效阻滞此传导途径,为卵巢癌的生物治疗提供新的思路。

米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的生长抑制作用。方法 采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮对HO8910 细胞的生长抑制作用 ,通过免疫组化染色 ,检测用药后细胞核增殖抗原Ki 67表达的变化。结果 3个浓度的米非司酮对上述细胞均有抑制作用 ,以 2 0 μmol/L浓度抑制最明显 ,抑制率达 50 .2 8% ;5μmol/L米非司酮可使HO8910 细胞Ki 67抗原表达显著减少 ,细胞增殖受到明显抑制。结论 米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株具有明显抑制作用 ,且通过降低核增殖抗原Ki

拓扑替康对人卵巢癌细胞株端粒酶活性表达的影响

目的 :探讨拓扑替康对卵巢癌细胞端粒酶活性表达的影响。方法 :用TRAP ELISA法检测浓度为 2 60 0 0 μg·L-1 的盐酸拓扑替康 (和美新 )作用于卵巢癌HO 8910细胞株不同时间后端粒酶活性的改变 ,并以流式细胞检测法同步检测细胞凋亡及细胞周期改变。结果 :随着拓扑替康作用时间的延长 ,HO -8910细胞株的凋亡率逐渐增加 ,而端粒酶活性逐渐降低。当作用达 60h后 ,细胞凋亡达 47.62 %时端粒酶活性呈阴性。结论 :端粒酶活性抑制不是拓扑替康诱导卵巢癌细胞凋亡的直接原因 ,但临床监测端粒酶活性表达有助于对盐酸拓扑替康抗卵巢癌的疗效进行客观评价。

双氢青蒿素对卵巢癌细胞株HO-8910生长及Ang-2表达的影响

目的观察双氢青蒿素对人卵巢癌细胞HO-8910裸鼠移植瘤生长及Ang-2表达的影响。方法建立人卵巢癌细胞株系HO-8910裸鼠皮下移植瘤模型。实验分为空白组、顺铂组、青蒿素高剂量组、青蒿素低剂量组、青蒿素高剂量+顺铂组(各组n=5),观测各组小鼠成瘤情况,肿瘤重量差异以及常规病理检查变化,并采用免疫组化法检测肿瘤组织内Ang-2表达情况。结果与给药组比较,对照组小鼠体重大、生长快(P<0.05)。与青蒿素低剂量组比较,高剂量组、顺铂组和联合组肿瘤生长较慢,重量减轻,其抑瘤率分别为49.24%,56.06%,75.00%,差异有统计学意义(P<0.01)。其中联合用药组效果最好(P<0.05),而高剂量组和顺铂组差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果提示给药组中Ang-2的含量明显低于对照组(P<0.05),高剂量组比低剂量组更少(P<0.05),而联合处理组几乎未见Ang-2的表达。结论双氢青蒿素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有抑制作用且成剂量依赖性,与化疗药联合应用效果更好,其机制可能是青蒿素下调Ang-2的表达,直接或间接影响肿瘤组织血管生成而发挥抗肿瘤作用。

阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV_3的抑制作用

[目的]研究非甾体类药物阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用及其相关机制。[方法]利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用;免疫组化法检测COX-2在SKOV3细胞中的表达情况以及3种药物对SKOV3细胞中Ki-67,C-erbB-2表达的影响;透射电镜观察3种药物作用SKOV3细胞后形态变化和凋亡情况;流式细胞术检测3种药物对SKOV3细胞周期的影响。[结果]阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3具有生长抑制作用,并呈时间-剂量依赖性。免疫组化发现COX-2在SKOV3细胞中呈阳性表达,阿司匹林使SKOV3细胞中C-erbB-2蛋白表达下降,尼美舒利使SKOV3细胞核中Ki-67蛋白表达下降,扑热息痛对C-erbB-2和Ki-67蛋白表达无影响。透射电镜可见阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利作用后的SKOV3细胞中有凋亡小体和坏死细胞的形成。流式细胞术发现400μmol/L尼美舒利和10-2mol/L阿司匹林使SKOV3细胞停滞在G0/G1期。[结论]非甾体类药物,特别是COX-2抑制剂尼美舒利可望作为预防性化疗药物应用于卵巢癌的治疗。