miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响

探究miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。方法 选取我院2021年5月到2023年5月收治的卵巢癌患者,总计40例,取其癌灶组织及癌旁组织。通过对miR-515-5p的靶基因进行检测,观察其在细胞系A2780细胞增殖和转移情况。结果 miR-515-5p经qRT-PCR检测验证发现,A2780与正常细胞系的IOSE-80的表达明显更低(P<0.05);经过CCK-8测试结果表示,miR-515-5p可抑制卵巢癌细胞增殖活性,且在72h时间点对比mimics NC组体现差异性(P<0.05);miR-515-5p对癌细胞迁移和转移方面,miR-515-5p mimics组可对癌细胞迁移转移能力明显抑制,对比mimics NC组有差异(P<0.05),且miR-515-5p inbitor组和inhibitor NC组对比,其具备较强的促迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-515-5p可有效抑制卵巢癌细胞的增殖转移,具备一定的抑癌效果。

PDGF-C促进体外培养人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖和迁移

目的观察血小板衍生生长因子-C(PDGF-C)对体外培养的卵巢上皮癌细胞系A2780和人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3的影响。方法采用培养的人类上皮性卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,应用CCK8检测法评价细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期;利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果PDGF-C能明显刺激A2780和SKOV3增殖,增加两种细胞S期细胞的比例,对SKOV3的促增殖作用在20μg/L达高峰,A2780的促增殖作用在30μg/L达高峰。同时,PDGF-C促进A2780和SKOV3的迁移能力。结论 PDGF-C可促进培养的A2780和SKOV3的增殖与迁移能力。

Caspase-2与caspase-3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP凋亡中的表达

目的 探讨Caspase -2和caspase -3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP凋亡中的作用和对A2 780 /DDP细胞系顺铂耐药形成的可能影响。方法 用细胞培养方法 ,加入不同浓度 (分别为 0、5、10、2 0、40 μM)顺铂共同培养卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP 2 4h、48h和 72h ,原位末端标记法 (TUNEL)检测卵巢癌细胞系凋亡情况 ,用免疫组化SABC法观察此过程中Caspase -2和caspase -3蛋白表达。结果 随顺铂作用时间延长和剂量增加 ,卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP中凋亡逐渐增强(P <0 0 1) ,caspase -2和caspase -3蛋白表达呈现出对顺铂作用时间和剂量的依从性 (P <0 0 1) ,两种蛋白在A2 780细胞中表达明显强于A2 780 /DDP( P <0 0 1)。结论 Caspase -2和caspase -3蛋白活化促进顺铂诱导的卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP凋亡 ,其表达抑制可能是影响顺铂耐药的A2 780 /DDP细胞凋亡的原因。

全反式维甲酸对卵巢癌细胞系作用的研究

目的 :探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人卵巢癌细胞生长的抑制作用及可能机制。 方法 :应用MTT比色法、LDH检测及流式细胞仪周期分析对药物作用后的人卵巢癌腹水细胞系 (COC1、COC2 )、卵巢癌上皮细胞系(CAOV3 ) 3种卵巢癌细胞系进行检测。 结果 :ATRA能抑制卵巢癌细胞生长 ,当浓度达 10 μmol/L时 ,G0 、G1期细胞比例增加 ,G2 M、S期细胞比例下降 ,细胞增殖速度较对照组减缓。MTT及LDH检测提示在ATRA 30 μmol/L时 ,癌细胞抑制率最佳。 结论 :ATRA应用可有效抑制卵巢癌细胞增殖 ,促进细胞分化 ,从而达到抑瘤作用 ,并在ATRA 10～ 30 μmol/L时 。

体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析

目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物。方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系(OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D)与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞(OGE)的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,最后利用蛋白芯片阅读机(PBS-Ⅱ型)读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析。结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高。此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达。结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别。

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的 研究genistein对人卵巢癌细胞系 3AO抑制增殖和促进凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用的机制。方法 应用MTT法检测genistein对 3AO的生长抑制作用 ,电镜观察凋亡细胞及凋亡小体 ,FCM分析细胞周期及凋亡率 ,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达。结果 genistein可明显抑制 3AO的增殖 ,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。FCM分析发现 genistein阻断 3AO细胞生长于细胞周期的G2 /M期 ,且 2 4～ 72h可见明显亚G1峰。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。免疫细胞化学结果显示 ,2 0 μmol/L的genistein作用 4 8h后 ,PCNA、bcl 2及CyclinB1蛋白表达降低 ,而p2 1WAF1/CIP1和bax及CyclinB1蛋白表达增加。结论 genistein对卵巢癌细胞系 3AO的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用 ,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2 /M期 ,且这种生长抑制作用与 p2 1WAF1/CIP1蛋白水平表达增加及PCNAcylinB1蛋白表达降低有关 ,且可通过下调bcl 2蛋白表达 ,上调bax蛋白表达诱导卵巢癌细胞凋亡。

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。

NFκB家族蛋白对人卵巢癌细胞系生长及耐药性的影响

目的 :研究NFκB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。方法 :培养 13株卵巢癌细胞系 ,对其进行胞质、胞核蛋白质提取 ,Western印迹法观察NFκB家族蛋白及其抑制物的表达 ,并用MTT检测药敏、观察NFκB家族蛋白与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。结果 :①P6 5、P5 0及IKB在胞质内表达阳性率分别为 76 .9%、81.8%、84 .6 % ,P6 5、P5 0同时在胞核内表达 ,P5 0尤为明显 ,阳性率分别为 15 .3%、4 5 .5 %。②OV MZ 5和OV MZ 2 774两个卵巢癌细胞系P6 5表达阳性 ,MTT检测IC50 表现明显高值 ,显示耐药。结论 :P6 5、P5 0在卵巢癌细胞的发生、发展中发挥作用 ,P5 0更为明显 ;P6 5与卵巢癌细胞的耐药关系密切 。

转化生长因子-β对人卵巢癌细胞系SK-OV-3活性氧簇表达的影响及其机制

目的观察转化生长因子-β(TGF-β)对人卵巢癌细胞系SK-OV-3活性氧簇(ROS)表达的影响,并探讨其可能机制。方法取对数生长期SK-OV-3细胞,随机分为两组,观察组用2 mL培养液+2μL无血清DMEM配制的5μg/mL TGF-β培养(最终浓度为5 ng/mL),对照组直接加2 mL培养液。流式细胞仪检测细胞内总的活性氧簇(ROS)产生及线粒体来源的ROS,实时荧光定量PCR检测细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)变化各指标、线粒体呼吸链复合体Ⅲ组分mRNA。结果观察组及对照组总ROS产生量分别为3 159±42.92、1 062±24.41,两组比较,P<0.05。观察组及对照组细胞内线粒体来源ROS产生量分别为1 254±29.04、1 039±17.32,两组比较,P<0.05。观察组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1分别是对照组的0.200 0、6.739 8、4.487 9、1.639 5倍,P均<0.05。观察组CYC1、TTC19、UQCRC1、UQCRC2、UQCR10、UQCRB、UQCRFS1、UQCRH、UQCRQ mRNA表达水平较对照组改变倍数分别为0.89、1.04、1.09、0.87、1.17、1.18、0.92、1.09、1.07倍,P均>0.05。观察组CYC1、TTC19、UQCRC1、UQCRC2、UQCRFS1蛋白水平较对照组改变倍数分别为1.01、0.97、1.07、0.99、1.03倍,P均>0.05。结论TGF-β诱导细胞内总的ROS表达增加,但过量ROS并非来源于线粒体,机制可能是通过调控细胞内氧化-抗氧化平衡系统的关键酶从而改变细胞内的ROS水平。

地塞米松快速抑制卵巢癌细胞系ERK1/2活性

背景与目的:细胞外信号调节的激酶1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2,ERK1/2)的激活在多种细胞增殖的过程中发挥重要作用。作者曾经发现人工合成的糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,Dex)可显著抑制人卵巢癌细胞系HO-8910的增殖。本研究试图观察Dex对HO-8910细胞ERK1/2活性的影响,以探讨其抑制该细胞增殖的信号转导通路。方法:以Westernblot方法测定ERK1/2在HO-8910细胞中的活性,细胞计数方法检测细胞增殖的改变。结果:1×10-7mol/LDex作用于HO-8910细胞5min即出现ERK1和ERK2活性的同步降低,最大作用出现在30min,与对照相比,二者分别减少41%和54%(P均<0.001),4h恢复至对照水平。ERK1/2活性降低的程度随Dex浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)升高而增大。该作用不能被糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)拮抗剂RU486所阻断。ERK1/2上游激酶MEK1/2的抑制剂PD98059也具有抑制该细胞增殖作用,并能增强Dex对细胞增殖的抑制。结论:Dex能够以不依赖GR的方式快速抑制HO-8910细胞ERK1/2活性,这可能与其抑制细胞增殖过程有关。

人重组蛋白胸腺素B10促进卵巢癌细胞系SKOV3凋亡

β族胸腺素由于具有维持细胞骨架的动态平衡,促进血管生成、伤口愈合、心肌修复等多种生物学功能,并与肿瘤发生、转移具有密切关系而倍受关注.本文研究对象胸腺素B10（thymosinβ 10,Tβ10）定位于胞内,大量文献证实Tβ10与肿瘤的发生发展有关[1-2],但在不同类型的肿瘤中它的功能还存在争议,Tβ10在肿瘤细胞凋亡中所起的作用也鲜有报道.本实验将在卵巢癌细胞系SKOV3中探索Tβ10对其凋亡的影响及其分子机制.

Notch1信号蛋白在卵巢癌细胞系中的表达

目的:检测卵巢癌细胞系中Notch1信号蛋白的表达,为在卵巢癌细胞中对Noah1进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及Western blotting对卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notch1进行检测。结果:Notch1信号蛋白在4种卵巢癌细胞系中均有表达,其在HO-8910-PM中表现为高表达,在SKOV3和3AO中表现为中等表达,在HO-8910中表现为低表达。结论:HO-8910-PM适合作为靶细胞,进行Notch1信号蛋白的RNA干涉研究。

P65、P50及IκB-α蛋白表达水平与人卵巢癌细胞化疗耐药性关系研究

目的探讨P65、P50及IκB-α蛋白表达水平与人卵巢癌细胞化疗耐药性关系。方法培养10株卵巢癌细胞系,当各株卵巢癌细胞生长到对数生长期时,取细胞进行细胞质、细胞核P65、P50及IκB-α蛋白质提取。Western blot检测P65、P50及IκB-α蛋白质表达情况,采用MTT法对10株卵巢癌细胞系进行了IC50值检测、分析P65、P50蛋白与药物敏感性的关系。结果 P65、P50及IκB-α蛋白主要在细胞质中表达,P65、P50及IκB-α蛋白在细胞质中表达阳性率分别为80.00%、60.00%、70.00%;P65、P50蛋白也在细胞核中表达,P65、P50蛋白在细胞核中表达阳性率分别为20.00%、50.00%,IκB-α蛋白未见表达于细胞核中。OV-MZ-5细胞系具有最高的IC50值,为20.34μg/ml;OV-MZ-12b细胞系具有最低的IC50值,为4.23μg/mL。各组卵巢癌细胞系IC50值未显示出明显规律。P65胞核阳性者IC50平均值(17.23μg/mL)明显高于胞核阴性者IC50平均值(8.45μg/mL),且高出后者1倍以上;而P50胞核阳性IC50平均值(9.83μg/mL)与胞核阴性者IC50平均值(10.22μg/mL)相近。结论 P65和P50蛋白在卵巢癌细胞的发生、发展中具有重要作用,并且P65的表达水平与卵巢癌细胞的化疗耐药性息息相关,有望成为判断预后的生物标志物。

卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究

目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应。方法采用免疫磁珠分离法(magneticactivatedcellsorting,MACS)分离纯化正常人外周血CD+3T细胞,体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激。溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响;MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力;利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性。结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用,且存在时间依赖性,在24h时促进作用最强。SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68.38%,显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18.31%);而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61.02%和14.79%,有显著的抗原特异性(P=0.0001)。结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用。

聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780作用的实验研究

目的:观察聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780的抑制作用,以评价其作为抗肿瘤药物的价值。方法:MTT检测偶联物对卵巢癌细胞株A2780的抑制作用;形态学观察经作用后的细胞生长情况;流式细胞仪检测作用后细胞凋亡情况。结果:偶联物对卵巢癌细胞株A2780有显著抑制作用,并呈现量效关系,且其IC50有显著提高;形态学和流式细胞仪检测结果表明,聚轮烷-喜树碱偶联物能够抑制癌细胞生长。结论:聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780有显著的抑制作用,其机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。

拓扑替康与顺铂对bcl-2及fas在卵巢癌细胞系3AO及其耐药系3AO/cDDP表达的影响

目的:研究bcl鄄2及fas在体外培养的卵巢癌细胞系3AO及其耐药系3AO/cDDP的表达及化疗药物拓扑替康(topotecan熏TPT)与顺铂穴cisplatinum熏cDDP雪对两种基因表达的影响。方法:用人卵巢上皮癌细胞系3AO及其cDDP耐药细胞系3AO/cDDP进行体外培养实验,用流式细胞仪(flowcytometry熏FCM)检测两种细胞系在化疗药物顺铂(cDDP)与拓扑替康治疗前后的fas和bcl鄄2表达。结果:与3AO相比,fas与bcl鄄2在3AO/cDDP中的表达明显降低(P<0.01);cDDP和TPT可使fas在3AO中的表达明显升高(P<0.01),bcl鄄2明显降低(P<0.01);cDDP和TPT对fas表达影响较为显著(P<0.01)熏对bcl鄄2无显著影响(P>0.05)。结论:fas可能在卵巢癌的化疗耐药中起作用,但bcl鄄2的作用尚不明确;cDDP及TPT可能通过fas介导的细胞凋亡机制促进细胞死亡。

Genistein对人卵巢癌细胞系TC-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(genistein)对人卵巢癌细胞系TC-1细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT法检测不同浓度genistein对TC-1细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞超微结构的改变,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳法确定凋亡。结果:TC-1细胞经不同浓度genistein处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,5mg/L和10mg/L genistein作用72h后,抑制率分别达到89·84%和97·99%。genistein阻断TC-1细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型的亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带。结论:genistein对TC-1细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其发生凋亡。

CD59 RNAi逆转录病毒载体转染卵巢癌细胞株A2780的构建

目的获得携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780。方法设计能转录产生靶向CD59小发夹RNA(sh RNA)转染逆转录病毒载体p SUPER retro neo+gfp质粒,构建p SUPER-si CD59重组质粒,将重组质粒导入卵巢癌细胞株A2780内。鉴定转染后细胞株能形成稳定的扩增。结果重组质粒经PCR凝胶电泳、核苷酸测序证实与设计序列一致;重组质粒转染卵巢癌细胞株A2780,可稳定表达绿色荧光蛋白。结论携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780的建立为深入进行肿瘤细胞研究奠定了基础。