LRP16基因过表达对卵巢癌细胞HO8910生长及E-钙黏着素的影响

目的:探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株HO8910生长的影响。方法:将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3.1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株HO8910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Western blot方法检测E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白的表达。结果:LRP16基因过表达对HO8910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的HO8910细胞的E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白表达水平明显下降。结论:LRP16基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的增殖无影响,但使E-钙黏着素(E-cadherin)表达明显下降。

大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910生长的抑制作用

目的 :观察大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制作用。方法 :用不同时间不同剂量大蒜素作用于HO8910 ,通过肿瘤细胞药敏试验 ,观察肿瘤细胞存活率 ,并通过透射电镜观察一定剂量的大蒜素作用于HO8910一定时间后 ,肿瘤细胞形态的改变。结果 :5 0～ 10 0 μg/ml大蒜素可显著抑制肿瘤细胞的生长 ,且在作用 2h时即出现显著的抑制 ,随着作用时间的延长 ,抑制作用愈明显 ,72h达到高峰。透射电镜结果显示 :5 0 μg/ml的大蒜素作用HO8910 2 4h ,细胞肿胀 ,细胞膜破碎 ,胞浆脱落 ,细胞核裸露 ;小剂量 (2 5 μg/ml)则HO8910呈现细胞凋亡样改变 :细胞胞浆呈空泡 ,染色质边集 ,核仁固缩 ,胞质呈片状脱落。结论 :大蒜素可显著抑制HO8910的生长 ,且有明显的时间及剂量效应。大剂量的大蒜素对HO8910细胞呈直接杀伤作用 。

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO8910PM细胞周期的影响;Westernblot法分析NFκB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平。结果不同浓度的5F分别处理细胞24h后,对HO8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NFκB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平。结论5F对HO8910PM细胞周期的影响与NFκB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关。

HE4基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞HO8910生长侵袭的影响

目的探讨卵巢癌基因HE4对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法构建针对HE4基因的PcDNA3.1/HE4载体,脂质体法介导PcDNA3.1/HE4载体转染人浆液性卵巢癌细胞系HO8910,WESTERN-BLOT检测转染前后细胞内HE4蛋白的表达效果。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆形成实验观察HE4基因对细胞增殖能力的影响,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果Western-blot结果显示PcDNA3.1/HE4载体成功转染HO8910细胞并显著提高该细胞HE4基因的表达,细胞增殖能力较前无明显变化,侵袭能力明显下降。结论通过增强HE4基因表达,可降低其侵袭能力,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因。

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

逆转录酶抑制剂(AZT)对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞超微结构和增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂(AZT)对卵巢癌细胞系HO-8910细胞超微结构及增殖的影响。方法应用透射电镜观察AZT作用前后肿瘤细胞超微结构的变化,用MTT分析法对不同浓度AZT作用的卵巢癌HO-8910细胞进行药物敏感实验,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果 AZT作用后的HO-8910细胞生长明显受抑制,并有时间依赖关系和剂量依赖关系。形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块。细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少,并且可测到凋亡峰含量为14.2％。结论 AZT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,因而可为卵巢癌和其它肿瘤的治疗尝试一条新的有效的方法。

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

紫杉醇对HO8910卵巢癌细胞增殖及其基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)表达的影响

目的:研究紫杉醇对肿瘤细胞增殖及基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)表达的影响。方法:半定量RT-PCR法检测紫杉醇对体外培养的HO8910卵巢癌细胞MMP-2和MMP-9基因mRNA表达的作用。结果:(1)MTT法检测提示紫杉醇在浓度达100 nmol·L^(-1)以上时,对HO8910细胞生长抑制率>30％(P<0.001),并随浓度增加而升高(r=0.6574,P<0.01);(2)紫杉醇浓度在10 nmol·L^(-1)时MMP-2和MMP-9 mRNA表达降低(P<0.01),其改变呈剂量依赖性下降。结论:紫杉醇在抑制HO8910细胞增殖时,也抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9mRNA的表达,因而,可能产生抑制肿瘤增殖和侵袭转移的作用。

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。

核桃楸提取物抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的实验研究

目的研究中药核桃楸提取物对人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖能力的影响。方法采用层流分离法提取出核桃楸6种有效成分,分别以10^-8 mg/mL、10^-7 mg/mL、10^-6 mg/mL、10^-5 mg/mL浓度作用于卵巢癌细胞HO-8910PM,并设立空白对照组,以噻唑蓝比色法和形态学观察法检测核桃楸提取物对癌细胞生长的抑制作用。结果核桃楸提取物的6种有效成分结构鉴定分别为a-羟基-四氢萘醌(Y1)、胡桃醌(Y2)、4,8-二羟基萘酚-1-0-β-D-[6′-0-(3″,5″-二甲氧基-4″-羟基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y3)、4,8-二羟基萘酚-β-D-(6′-乙酰氧基葡萄糖苷)(Y4)、4,8-二羟基萘酚-β-D-葡萄糖苷(Y5)、4,5,8-二羟基-ɑ-四氢萘醌-5-0-β-D-[6′-0-(4″-羟基-3″,5″-二甲氧基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y6)。Y1、Y3、Y6这3种药物随着药物浓度的增高和作用时间的延长,对HO-8910PM细胞增殖的抑制率也相应增高,并且Y1、Y3的浓度依赖性明显,Y6的时间依赖性明显且在短时间低浓度组(10^-8 mg/mL)表现出了明显的肿瘤抑制作用;其他药物无规律变化。电镜下观察各药物组HO-8910 PM细胞随着药物浓度的增高和作用时间的延长,细胞出现程序性死亡。结论核桃楸提取物的6种有效成分中,有3种能够抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖,且抑制作用存在剂量、时间依赖性。

骨桥蛋白反义寡核苷酸对卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的实验研究

卵巢癌是死亡率较高的妇科恶性肿瘤之一,因易转移而广泛播散,70%的患者就诊时已属晚期,因此卵巢癌的早期诊断和治疗尤其重要。许多研究提示骨桥蛋白（osteopontin,OPN）很有希望作为卵巢癌新的肿瘤标志物,进而用于卵巢癌的早期诊断和病情预测。骨桥蛋白（OPN）是一种磷酸化糖蛋白,首先由骨骼组织中分离而来,

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移及Ras表达的影响

目的：研究辛伐他汀（SIM）通过抑制法尼基化途径对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移相关能力及Ras信号转导作用的影响。方法：以MTT法、流式细胞技术分析检测SIM对HO-8910PM细胞生长增殖和细胞周期的影响；用Transwell小室法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测SIM对HO-8910PM细胞侵袭粘附能力的影响；RT-PCR、Western blot法检测SIM对HO-8910PM细胞Ras、ERK2表达水平的影响；采用7-32P掺人法检测MAPK活性。结果：（1）4～64μmol／L的SIM处理24～72h后，HO-8910PM细胞的生长增殖受到一定的抑制；各给药组内G1期细胞明显增多，G2、S期细胞减少，用药浓度高时有指示细胞凋亡的亚G1期“凋亡峰”出现。以上作用均有浓度一效应和时间依赖关系。（2）SIM能够明显地抑制HO-8910PM细胞的体外趋化运动、侵袭和粘附能力（P〈O．05）。（3）随用药浓度的增高，K-RasmRNA的表达没有明显的变化，细胞膜上Ras蛋白水平逐渐降低，胞浆中Ras蛋白水平逐渐增加，总Ras蛋白的表达变化不大；SIM能明显下调HO-8910PM细胞的ERK2蛋白表达。（4）激酶活性检测结果显示，SIM能明显抑制MAPK活性（P〈O．01）。结论：SIM能抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭、运动和粘附能力。SIM抗肿瘤转移的作用机制与它们抑制某些蛋白（如Ras蛋白）的法尼基化反应有关。SIM能抑制Ras蛋白的法尼基化即抑制它锚定于细胞膜上，抑制了其生物活性，从而影响Ras-MAPK信号转导作用和其下游靶蛋白。

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。

筛选自人卵巢癌细胞系HO8910的干细胞生物学特性分析

目的探讨筛选自人卵巢癌细胞系HO8910干细胞的生物学特性。方法将前期筛选卵巢癌细胞系HO8910的干细胞在无血清培养基中进行传代培养,以HO8910细胞作为对照。体外观察两种细胞的球体形成能力;将两种细胞接种于含血清培养基,观察其分化能力,并检测干细胞相关标记物;采用药敏试验检测两种细胞对顺铂、多柔比星及米托蒽醌的敏感性;将无血清培养基中进行传代培养的两种细胞接种于NOD/SCID裸鼠,观察其体内成瘤情况。结果 HO8910细胞在无血清培养基中的球体形成能力明显低于卵巢癌细胞(P<0.05)。卵巢癌干细胞分化前CD133、CD117阳性表达率明显高于分化后(P均<0.05)。卵巢癌干细胞分化后ABCG2、Nanog、Oct4、BCRP、E-cadherin表达均低于分化前(P均<0.05),与HO8910细胞分化前后上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。0.25、0.5μg/m L顺铂,0.5、1.5μmol/L多柔比星,0.05、0.25μg/m L米托蒽醌作用于卵巢癌干细胞、HO8910细胞48 h时,卵巢癌干细胞的相对活性均高于HO8910细胞(P均<0.05)。裸鼠接种1×103个卵巢癌干细胞即可成瘤;随着干细胞接种数量的增加,成瘤比率逐渐增加,成瘤时间逐渐缩短(P均<0.05)。结论筛选自人卵巢癌细胞系HO8910的卵巢癌干细胞具有自我更新和分化、体内成瘤、高表达干细胞基因以及对化疗耐药等特性,符合肿瘤干细胞的理论标准。

抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞细胞活力及MMP-2、MMP-9mRNA表达的影响

目的:观察抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞增殖及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响,从而为其抑制卵巢癌进展提供依据。方法:在体外用不同浓度(0%、5%、15%、20%)抑瘤一号方含药血清处理HO-8910人卵巢癌细胞后,检测细胞活力及细胞内MMP-2、MMP-9m RNA表达。结果:空白组HO-8910人卵巢癌细胞胞体相对光滑,核膜尚完整,细胞器正常,染色质呈现均匀;抑瘤一号方含药血清处理后的HO-8910人卵巢癌细胞胞体发生皱缩,胞质可见多发空泡形成,核染色质出现固缩,形成多个团块状,或边界较分明的类似新月形小体,凋亡特征明显。作用12、24h后,5%、10%组细胞活力与同期空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05);作用48h后,5%组与空白组、5%组与10%组细胞活力比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组,且15%、20%组均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);作用72h后,5%组与空白组细胞活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组、5%组,且15%、20%组细胞活力均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5%组、空白组MMP-2mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组MMP-2mRNA表达水平均低于空白组,且15%、20%组均低于5%组,20%组低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);空白组、5%组、10%组MMP-9mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);15%、20%组MMP-9mRNA表达水平均低于空白组和5%组,20%组低于10%、15%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑瘤一号方在体外能明显降低HO-8910人卵巢癌细胞活力,抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达。

下调CTNNB1表达对人卵巢癌HO8910细胞内质网应激和凋亡的影响

目的:探讨下调CTNNB1表达对人卵巢癌HO8910细胞内质网应激和凋亡的影响。方法:通过脂质体转染法将CTNNB1 siRNA转染至HO8910细胞,记为CTNNB1 siRNA组,同时设置正常对照组(未转染)和阴性对照组(转染非特异性siRNA)。转染48 h后采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CTNNB1 mRNA和蛋白表达水平,AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,分光光度计法检测细胞中Caspase-3活性,qRT-PCR法检测XBP1和ATF4 mRNA表达水平。结果:CTNNB1 siRNA组HO8910细胞CTNNB1 mRNA和蛋白相对表达量低于正常对照组和阴性对照组;细胞凋亡率、Caspase-3活性及XBP1、ATF4 mRNA相对表达量高于正常对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论:下调CTNNB1表达可诱导人卵巢癌HO8910细胞凋亡,其作用机制可能是通过内质网应激上调Caspase-3活性实现的。

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的初步研究

目的 :观察苦参素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法 :用苦参素处理HO8910细胞 ,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用 ,倒置显微镜观察细胞形态学改变 ;琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解 ,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果 :在苦参素作用下 ,HO8910细胞呈凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时 ,细胞周期发生特定的改变。结论 :苦参素能抑制卵巢癌细胞增殖 ,诱导卵巢癌细胞凋亡。

顺铂、紫杉醇对人卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性表达的影响

目的 探讨顺铂和紫杉醇对卵巢癌细胞端粒酶活性表达的影响。方法 用TRAP ELISA法分别检测顺铂 (5 μg/ml)和紫杉醇 (10 6M )作用不同时间后卵巢癌HO 8910细胞端粒酶活性改变 ,并以TUNEL法同步检测细胞凋亡。结果 随着药物作用时间的延长 ,HO 8910细胞株的凋亡率逐渐增加 ,而端粒酶活性逐渐降低。在紫杉醇作用 6 0h后 ,细胞凋亡达 (88 30± 1 0 0 ) %时 ,端粒酶才完全丧失活性 ;而顺铂作用 12h后 ,该细胞株的端粒酶活性完全消失时细胞凋亡率仅有(11 4 3± 0 2 3) %。结论 端粒酶活性抑制可能是顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的机制之一 ,临床监测端粒酶活性表达有助于对抗卵巢癌化疗药物的疗效进行客观评价。

白英乙醇提取物对人卵巢癌HO8910细胞体外生长的抑制作用

目的:观察中药白英提取物对体外培养卵巢癌HO8910细胞的作用。方法:体外培养卵巢癌HO8910细胞,实验分正常对照组、顺铂组及白英乙醇提取物组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察HO8910细胞凋亡及形态变化。结果:与正常对照组比较,白英提取物组对HO8910细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),且呈明显的时效和量效关系;低剂量STE可增强顺铂(DDP)对HO8910细胞的抑制作用并使细胞凋亡显著增多,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。结论:白英提取物能剂量依赖性地抑制HO8910细胞增殖和诱导细胞凋亡。