GnRH激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3生长的抑制作用及对GnRHⅠ受体、GnRHⅡ受体表达的影响

目的观察促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞生长的抑制作用并探讨其对GnRHⅠ受体、GnRHⅡ受体表达的影响。方法选用不同浓度曲普瑞林刺激卵巢癌细胞OVCAR3后,采用MTT方法检测其对细胞的增殖活性的影响,并运用RT-PCR方法,检测曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3 GnRHⅠ受体、GnRHⅡ受体表达的影响。结果 10-7mol/L浓度的曲普瑞林作用细胞24 h后,其增殖抑制率为(41.07±0.43)%,随着浓度的增加(10-6 mol/L,10-5 mol/L,10-4 mol/L,10-3 mol/L,10-2 mol/L),抑制率逐渐增加,分别为(50.56±0.76)%、(69.86±1.05)%、(65.43±0.87)%、(62.09±1.24)%、(58.69±0.87)%;以10-5 mol/L浓度的曲普瑞林抑制率最高,有统计学意义(P<0.05);以10-5mol/L浓度的曲普瑞林作用于细胞24 h、48 h、72 h后,增殖抑制率分别是(69.86±1.08)%、(58.69±0.98)%、(48.56±1.02)%,最终是作用时间在24 h时抑制率最高,有统计学意义(P<0.05)。GnRHⅠ受体、GnRHⅡ受体的表达:在曲普瑞林10-5mol/L浓度作用于细胞24 h后最高。结论曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3生长有抑制作用,GnRHⅠ受体、GnRHⅡ受体表达变化与GnRH激动剂的作用机制有关。

自噬在拓扑替康诱导卵巢癌细胞OVCAR3死亡中的作用

目的研究自噬在拓扑替康诱导卵巢癌OVCAR3细胞死亡中的作用。方法采用不同浓度的拓扑替康处理卵巢癌OVCAR3细胞,MTT法测定拓扑替康对OVCAR3细胞增殖的抑制作用,单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察给药后OVCAR3细胞的自噬征象,LDH漏出率法检测拓扑替康联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对拓扑替康诱导OVCAR3细胞毒性的影响,MTT法测定拓扑替康联合自噬诱导剂雷帕霉素对OVCAR3细胞增殖抑制的影响,金氏公式分析联合作用效果。结果拓扑替康对OVCAR3细胞的生长有显著的抑制作用,呈明显的剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为0.057μg/ml。MDC荧光染色显示拓扑替康可诱导OVCAR3细胞产生自噬囊泡,3-MA可以抑制拓扑替康诱导的自噬产生,雷帕霉素可以增强拓扑替康诱导的细胞自噬。细胞培养24h后,拓扑替康组LDH漏出率为22.5%,3-MA+拓扑替康组为16.8%;48h后拓扑替康组LDH漏出率为47.4%,3-MA+拓扑替康组为32.6%。雷帕霉素联合各浓度拓扑替康用药组的抑制率较拓扑替康单药组增加,按金氏公式计算,除最高浓度组(拓扑替康0.2μg/ml)外,其他各组q值均>1.15。结论拓扑替康对OVCAR3细胞有显著抑制作用并能够诱导其发生自噬,诱导自噬性细胞死亡可以提高拓扑替康对OVCAR3细胞的抗肿瘤作用。

半枝莲多糖通过Hippo通路介导人卵巢癌OVCAR3细胞铁死亡的作用机制

目的:研究半枝莲多糖对人卵巢癌OVCAR3细胞铁死亡的调控作用及其作用机制。方法:采用噻唑蓝法检测不同质量分数(0、10、20、40、80 mg/L)半枝莲多糖作用24、48和72 h对OVCAR3细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术和蛋白质印迹法检测其对细胞凋亡的影响,实时荧光定量法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,最后评估10μmol/L维替泊芬[Yes相关蛋白(yes associated protein,YAP)抑制剂]和80 mg/L半枝莲多糖两者单用或联用对铁死亡相关分子长链脂酰辅酶A合成酶4(long-chain acyl-CoA synthetase 4,ACSL4)和转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)、Hippo通路中磷酸化YAP(phosphorylation YAP,p-YAP)和YAP蛋白表达的影响。结果:半枝莲多糖可提高OVCAR3细胞增殖抑制率和凋亡率(P<0.05);可上调Bax、下调Bcl-2的蛋白表达水平(P<0.05);可上调OVCAR3细胞中E-cadherin mRNA的表达,下调N-cadherin和Vimentin mRNA的表达(P<0.05);可抑制ACSL4和TFRC mRNA的表达(P<0.05),降低p-YAP/YAP比值(P<0.05)。结论:半枝莲多糖可抑制OVCAR3细胞的增殖和上皮细胞-间充质转化,促进细胞凋亡和铁死亡,这可能与半枝莲多糖对Hippo通路的抑制有关。

CIRBP对人卵巢癌细胞SKOV3的促癌功能研究

目的探索冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)对人卵巢癌细胞SKOV3的促癌作用。方法采用生物信息学分析CIRBP在卵巢癌中的表达情况,建立CIRBP基因沉默和过表达的慢病毒稳转SKOV3细胞株,采用CCK-8法、流式细胞法、细胞划痕法分别检测细胞的增殖、凋亡、周期和迁移,采用细胞免疫荧光法检测β-catenin核转位,采用RT-qPCR检测CIRBP mRNA表达水平,采用Western blot检测CIRBP、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)的表达水平。结果CIRBP在卵巢癌中的表达下调(P<0.05),成功构建CIRBP沉默和过表达细胞模型,CIRBP沉默导致细胞增殖、迁移能力下降(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期比例上升(P<0.05),β-catenin蛋白核转位水平下降(P<0.05),β-catenin蛋白水平下调(P<0.05),而p-β-catenin蛋白水平上调(P<0.05),CIRBP的过表达则相反。结论CIRBP促进β-catenin的表达和核转位,从而影响卵巢癌的进展。

miR-325-3p通过靶向HE4抑制卵巢癌细胞SKOV3化疗耐药性的研究

目的探讨miR-325-3p通过靶向人附睾蛋白4(HE4)基因对卵巢癌细胞SKOV3顺铂(CDDP)耐药的影响。方法采用浓度梯度递增法构建对CDDP耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/DDP。CCK-8检测经不同浓度梯度的CDDP处理后亲代细胞SKOV3和耐药细胞SKOV3/DDP对CDDP的耐药性。随后,将SKOV3/DDP细胞随机分为空白对照组,阴性对照组和miR-325-3p组。其中,空白对照组不做任何处理,阴性对照组细胞转染阴性对照miR-NC,miR-325-3p组转染miR-325-3pmimic。采用CCK-8检测细胞半数抑制浓度(IC50)。流式细胞术检测细胞凋亡率。TargetScan数据库预测miR-325-3p与HE4 mRNA 3’UTR的结合位点。双荧光素酶报告基因实验验证miR-325-3p与HE4 mRNA 3’UTR的靶向性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-325-3p和HE4 mRNA表达。Westernblotting实验检测HE4蛋白表达。结果亲代细胞SKOV3对CDDP的IC50为14.15μM,耐药细胞SKOV3/DDP对CDDP的IC50为45.29μM,且耐药倍数(RI)为3.20。与亲代细胞SKOV3比较,耐药细胞株SKOV3/DDP中miR-325-3p表达明显降低(P<0.05),而HE4 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。另外,与空白对照组比较,阴性对照组中miR-325-3p表达、HE4 mRNA和蛋白表达、对CDDP的IC50以及细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。与阴性对照组比较,miR-325-3p组中miR-325-3p表达、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),而对CDDP的IC50、HE4 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论miR-325-3p通过靶向HE4抑制卵巢癌细胞SKOV3对CDDP的耐药性。

miR-381-3p调控PD-L1对卵巢癌细胞卡铂化疗耐药的影响

目的:探讨miR-381-3p调控PD-L1对卵巢癌细胞卡铂化疗耐药的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测比较SKOV3细胞及SKOV3/CBP细胞中PD-L1、miR-381-3p的表达情况。细胞转染miR-381-3p模拟物和抑制物,分组如下:SKOV3/CBP miR-381-3p阴性对照组,SKOV3/CBP miR-381-3p模拟物组,SKOV3 miR-381-3p阴性对照组,SKOV3 miR-381-3p抑制物组,实时荧光定量PCR检测卵巢癌卡铂耐药细胞中miR-381-3p对PD-L1表达的影响。细胞转染miR-381-3p模拟物和PD-L1过表达质粒卡铂干预处理,分组如下:miR-381-3p阴性干预组,miR-381-3p模拟物干预组,共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组,共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组,流式细胞术检测miR-381-3p调控PD-L1表达对细胞周期和凋亡变化,蛋白质印迹法检测miR-381-3p调控PD-L1表达对MDR1、Cyclin D1和cleaved-caspase-3的表达变化。结果:卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞组中PD-L1表达水平高于卵巢癌SKOV3组,而miR-381-3p表达水平低于卵巢癌SKOV3组(P<0.05);SKOV3 miR-381-3p抑制物组中PD-L1的表达高于SKOV3 miR-381-3p阴性对照组,SKOV3/CBP miR-381-3p模拟物组中PD-L1的表达低于SKOV3/CBP miR-381-3p阴性对照组(P<0.05);共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组的G1期细胞比例高于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组,而S期细胞比例低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。miR-381-3p模拟物干预组细胞凋亡率高于miR-381-3p阴性干预组,共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组细胞凋亡率低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。miR-381-3p模拟物干预组中PD-L1、MDR1、Cyclin D1蛋白表达低于miR-381-3p阴性干预组,而其cleaved-caspase-3蛋白表达高于miR-381-3p阴性干预组(P<0.05)。共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组中cleaved-caspase-3蛋白表达低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。结论:miR-381-3p通过调控PD-L1参与对卵巢癌细胞的卡铂耐药,为卵巢癌耐药治疗提供参考依据。

青藤碱调节CXCR4-STAT3轴对卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine)对卵巢癌细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响及作用机制。方法:使用不同浓度(0、0.25、0.50、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)的青藤碱分别处理A2780细胞24、48 h, CCK-8法检测细胞存活率。将A2780细胞随机分为对照(Control)组、CXCR4激活剂基质细胞衍生因子-1(SDF-1)(SDF-1,100 ng/mL)组、CXCR4抑制剂普乐沙福(Plerixafor, 500 ng/mL)组、青藤碱(Sinomenine, 1.0 mmol/L)组、Sinomenine+SDF-1(1.0 mmol/L Sinomenine+100 ng/mL SDF-1)组,分别检测A2780细胞增殖、迁移与侵袭,体外血管生成拟态形成实验检测青藤碱对血管生成拟态的影响,Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮细胞激酶(EphA2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-2、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果:青藤碱可有效抑制A2780细胞增殖,且呈浓度依赖性;青藤碱可显著抑制A2780细胞迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并下调血管生成拟态标志蛋白VEGF、EphA2、MMP-9、MMP-2表达,抑制CXCR4、p-STAT3表达(P<0.05),青藤碱的这一抑制作用可被CXCR4激活剂减弱。结论:青藤碱可能通过抑制CXCR4-STAT3轴,抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成。

lncRNA HAGLR促卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化的机制研究

目的研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用。方法培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组)。然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组)。qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达。CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性。Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力。细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力。TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡。结果与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05)。与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05)。与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05)。结论lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT。

红毛五加提取物诱导卵巢癌细胞系OVCAR3凋亡

目的研究红毛五加提取物的抗肿瘤活性。方法分别采用MTT法、形态学、流式细胞术方法检测纯氯仿洗脱部分对肿瘤细胞OVCAR3的生长抑制及促凋亡。结果 MTT法可见氯仿洗脱部分对体外培养的卵巢上皮癌细胞OVCAR3的生长有抑制作用,高、低剂量组抑制率分别为20.6%、11.4%;形态学以及流式细胞术都可见氯仿洗脱部分可以促进OVCAR3凋亡。结论红毛五加纯氯仿洗脱部分对肿瘤细胞株OVCAR3细胞有促凋亡的作用。

锌指蛋白A20表达沉默促进OVCAR3卵巢癌细胞凋亡的实验研究

肿瘤坏死因子（TNF）-α具有选择性杀伤肿瘤细胞的特性,是肿瘤治疗的基本途径之一。锌指蛋白A20是一种最早发现于人脐静脉内皮细胞的TNF诱导性基因产物,是一种立即早期反应基因。在包括脂多糖（LPS）、TNF-α、白细胞介素（IL）-1或CD40-CD40L结合在内的多种刺激下，锌指蛋白A20表达于包括肿瘤细胞在内的各类细胞。

TRIM19泛素化IGF2BP3对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨三方基序蛋白(TRIM)19对胰岛样生长因子-2 mRNA结合蛋白(IGF2BP)3的影响及对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、过表达TRIM19组(转染TRIM19)、敲减TRIM19组(转染TRIM19-inhibitor),通过Western印迹对IGF2BP3的表达进行检测,通过免疫共沉淀对TRIM19的泛素化情况进行检测,以确定TRIM19与IGF2BP3之间的相互关系,以噻唑蓝(MTT)实验对细胞的增殖情况进行检测,Transwell对VSMC细胞的迁移情况进行测定。结果与对照组及敲减TRIM19组相比,过表达TRIM19组的细胞活力、迁移能力显著下降(P<0.05),内源IGF2BP3的表达量显著减少(P<0.05),与对照组相比,敲减TRIM19组的细胞活力、迁移能力显著上升(P<0.05)。TRIM19与IGF2BP3之间存在一定的相互作用,过表达TRIM19可增加IGF2BP3的泛素化程度。结论TRIM19可增加IGF2BP3的泛素化程度,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移。

癌相关成纤维细胞来源的外泌体miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌的外泌体(exos)miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法选取2021年5月至12月于衡水市人民医院接受手术的卵巢癌患者的癌组织和邻近的非癌组织(5对)。从卵巢癌组织和相邻的正常组织中分离出CAFs和正常成纤维细胞(NFs)。采用Western blot评估NFs和CAFs中α-SMA和vimentin的蛋白表达,利用外泌体提取试剂盒从NFs和CAFs培养基中获得NFs-/CAFs-exos。通过透射电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot评估NFs-/CAFs-exos的形状、粒径以及表面marker表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测CFAs、CAFs-exos和SKOV3中miR-625-3p和癌细胞侵袭抑制因子(SCAI)的表达。Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验确定miR-625-3p和SCAI的相互作用。最后,通过功能挽救实验确定SCAI对SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果Western blot结果显示,α-SMA和vimentin在NFs和CFAs中阳性表达。TEM观察下,NFs-/CAFs-exos均呈杯状形态,粒径大约100 nm,且CD63、HSP70、CD81在NFs-/CAFs-exos中阳性表达。与NFs相比,CAFs中α-SMA高表达(P<0.05)。与NFs-exo相比,CAFs-exo能够上调SKOV3细胞中miR-625-3p表达并且在功能上促进细胞迁移和侵袭(P<0.05)。然而,抑制CAFs-exos miR-625-3p表达能够显著降低SKOV3细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。报告基因显示,miR-625-3p能够直接靶向SCAI mRNA的3′-UTR区。挽救实验显示,过表达SCAI可有效逆转CAFs-exo miR-625-3p对卵巢癌细胞迁移能力的影响。结论CAF-exos miR-625-3p能够通过抑制SCAI表达促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

FANCF-shRNA质粒构建及其对卵巢癌细胞OVCAR3沉默效应的观察

目的:构建针对人FANCF基因的特异性shRNA真核表达载体,体外观察siRNA对卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因的沉默效应。方法:采用基因克隆技术,将设计合成的能表达短发夹RNA的寡核苷酸序列插入真核表达质粒载体pSilencerTM4.1-CMV-neo,构建能表达FANCF-shRNA的真核表达载体;转染人卵巢癌OVCAR3细胞,提取总RNA和蛋白,RT-PCR验证mRNA表达的变化,蛋白质印迹法验证蛋白表达的变化。结果:质粒酶切和测序证实成功构建了FANCF-shRNA的真核表达载体。与野生型OVCAR3相比,脂质体法转染卵巢癌OVCAR3细胞后,FANCFmRNA 24、48和72 h的表达水平与阴性控制组比较均下调,抑制率分别为(23.91±6.58)%(、51.23±5.86)%和(47.42±7.52)%;FANCF蛋白在244、8和72 h的表达水平与阴性控制组比较亦下调,抑制率分别为(16.28±5.46)%(、24.42±6.85)%和(36.05±8.26)%。证实FANCF-shRNA具有沉默OVCAR3细胞FANCF基因表达的效应。结论:siRNA-FANCF干扰可引起卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因沉默,可能为卵巢肿瘤基础和临床研究提供一种有效的方法。

山东肿足蕨对卵巢癌细胞CAOV-3增殖作用的影响

目的研究山东肿足蕨对卵巢癌细胞CAOV-3增殖作用的影响。方法采用不同浓度山东肿足蕨提取液作用于卵巢癌细胞CAOV-3,采用CCK-8法检测卵巢癌细胞的细胞活力,采用电子显微镜观察细胞形态变化及密度。结果用药24、48 h后,山东肿足蕨对卵巢癌细胞CAOV-3增殖活性呈现抑制作用,48 h抑制效果更显著,经显微镜观察大部分癌细胞形态发生皱缩并变长,部分细胞膜破裂坏死。结论山东肿足蕨提取液能抑制卵巢癌细胞CAOV-3的增殖,经显微镜观察用药后细胞形态受到明显影响,部分细胞破裂严重,增殖速度也受到影响。提示山东肿足蕨提取液对卵巢癌细胞CAOV-3的增殖抑制作用呈现出抗肿瘤活性,为进一步探索山东肿足蕨抗肿瘤提供了研究基础。

卵巢癌细胞系OVCAR3过表达SND1稳定株的构建

目的:通过慢病毒载体构建过表达SND1的OVCAR3稳定的表达株。方法:重组的pLVX-FLAG-SND1表达载体与包装质粒共同转染293T细胞,获得携带FLAG-SND1的重组慢病毒。病毒感染的OVCAR3细胞经Hygromycin B筛选出稳定表达株。用Western blot方法检测SND1蛋白表达。结果:用病毒感染OVCAR3细胞,药物筛选后获得的过表达稳定株中SND1蛋白表达水平明显增高。结论:利用慢病毒表达载体pLVX-FLAG-SND1成功感染并筛选出稳定表达SND1的OVCAR3细胞株,为进一步研究SND1在卵巢癌中的作用提供了体外细胞系模型。

SLC4A11通过JAK信号通路对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨溶质转运家族4成员11蛋白(SLC4A11)在卵巢癌增殖、迁移和侵袭中的生物学作用机制。方法:RT-qPCR检测卵巢癌细胞中SLC4A11表达。将SKOV3细胞分为对照组(转染siRNA-NC序列)、SLC4A11-siRNA组(干扰SLC4A11表达)和SLC4A11-siRNA+JAK组(干扰SLC4A11表达+激活JAK信号通路)。采用CCK-8、伤口愈合实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。RT-qPCR和Western blot检测Janus激酶2(JAK2)和信号传导及转录激活因子3(STAT3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达。结果:SLC4A11在卵巢癌组织中高表达(P<0.05)。SLC4A11-siRNA组SKOV3细胞中p-JAK2/JAK2(0.286±0.048)、p-STAT3/STAT3(0.571±0.042)、Bcl-2(0.335±0.040)均低于对照组(1.001±0.093、1.004±0.089、1.005±0.142),也低于SLC4A11-siRNA+JAK组[p-JAK2/JAK2(1.001±0.095)、p-STAT3/STAT3(1.003±0.092)和Bcl-2(1.006±0.145)];SKOV3细胞活力SLC4A11-siRNA组(1.112±0.113)、SLC4A11-siRNA+JAK组(1.612±0.113)、对照组(1.778±0.167)依次升高,SKOV3细胞划痕愈合率SLC4A11-siRNA组(21.927±3.279)、SLC4A11-siRNA+JAK组(54.763±6.794)、对照组(56.787±10.985)依次升高,侵袭细胞数量SLC4A11-siRNA组(68.000±5.568)、SLC4A11-siRNA+JAK组(172.667±4.041)、对照组(184.667±14.640)依次升高(均P<0.01)。结论:SLC4A11可能通过调控抑制JAK/STAT3信号通路参与卵巢癌进展,提示SLC4A11可能成为卵巢癌潜在治疗靶点。

Survivin shRNA增强人卵巢癌耐药细胞OVCAR3对泰素敏感性的研究

背景与目的:耐药是目前恶性肿瘤治疗急需解决的难题。最近研究显示,卵巢癌组织及细胞中均有Survivin高表达,可能与其抑癌耐药有关。本研究探讨Survivin的短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对人卵巢癌耐药细胞OVCAR3Survivin基因表达、凋亡及其对泰素、顺铂敏感性的影响。方法:脂质体介导SurvivinshRNA转染OVCAR3。转染空载体或脂质体的细胞及未转染细胞作为对照。逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测SurvivinmRNA的表达,流式细胞仪分析Survivin蛋白的表达及细胞凋亡率。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定SurvivinshRNA转染后OVCAR3细胞对泰素的敏感性。结果:与未转染组、空脂质体组、空载体组相比较,SurvivinshRNA处理24h后细胞SurvivinmRNA及蛋白表达水平均明显下调。SurvivinshRNA转染12、24、36、48h后的细胞凋亡率分别为20.7%、31.9%、39.0%、46.7%,呈时间依赖性。MTT结果显示,泰素对未转染组、空脂质体组、空载体组、转染组OVCAR3细胞的IC50分别为(0.305±0.032)μmol/L、(0.157±0.031)μmol/L、(0.175±0.010)μmol/L、(0.019±0.001)μmol/L;顺铂对4组OVCAR3细胞的IC50依次为(9.410±0.796)μmol/L、(6.675±1.739)μmol/L、(6.930±1.273)μmol/L、(7.862±0.081)μmol/L,SurvivinshRNA使OVCAR3对泰素的敏感性提高16倍(P<0.01),但是对顺铂的影响不大(P>0.05)。结论:靶向Survivin的序列特异性shRNA可有效抑制OVCAR3细胞中Survivin基因的表达,同时可以增强OVCAR3对泰素的敏感性,但不增加其对顺铂的敏感性。

蒺藜皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响

目的探讨蒺藜皂苷(STT)对体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及机制。方法选择对数生长的卵巢癌细胞株SKOV3分为空白对照组,实验组加STT。采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测SKOV3 Bcl-2和Bax蛋白表达变化。结果与对照组相比,实验组对卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05)。细胞周期分析显示,实验组使卵巢癌细胞的S期细胞比例减小,G1期细胞比例增大(P<0.05)。STT能够降低Bcl-2蛋白表达(P<0.05),增加Bax蛋白表达(P<0.01)。结论 STT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞有关,并通过影响细胞周期及下调Bcl-2蛋白和增加Bax蛋白的表达而诱导细胞凋亡。

艾迪注射液对SKOV_3人卵巢癌细胞作用的研究

目的探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用MTT法和RT-PCR法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响。结果艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGFmRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P<0.01)。结论艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用。

自分泌IL-6经Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路促进卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的研究

目的探讨内源性IL-6表达改变对卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的影响及相关信号转导通路。方法利用以往构建的内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌SKOV-3细胞,分别采用细胞体外黏附实验、Transwell小室体外侵袭实验、免疫印迹技术等观察IL-6对卵巢癌细胞黏附、侵袭能力的影响,并对其可能的信号通路进行研究。结果与对照组相比,内源性过表达IL-6可促进卵巢癌细胞的体外黏附和侵袭功能;抑制IL-6表达则可抑制卵巢癌细胞的上述功能。过表达或抑制表达IL-6可增加或减少卵巢癌细胞磷酸化ERK、Akt的表达水平,应用ERK或Akt特异性信号阻断剂可显著抑制高表达IL-6的卵巢癌细胞黏附和侵袭作用,提示可能与其活化Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路有关。结论卵巢癌细胞产生的IL-6可经Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt通路增强自身的黏附和侵袭能力,调节IL-6表达及相关信号转导通路可能是未来临床控制卵巢癌进展的一种良好策略。