二氢黄腐酚通过调控HK2表达对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性影响

目的 目前二氢黄腐酚通过调控HK2表达对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性影响及其机制研究较少。文中旨在研究黄腐酚衍生物二氢黄腐酚(DXN)对人卵巢癌顺铂耐药(DDP)细胞株SKOV3/DDP耐药影响和机制。方法 SKOV3/DDP细胞分成对照组、DXN组(4μmol/L DXN)、DDP组(4 mg/L DDP)、DXN+DDP组(4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、DXN+DDP+Vector组(转染空载质粒+4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、DXN+DDP+HK2组(转染HK2过表达载体+4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、si-NC组(转染siRNA control)、si-HK2组(转染HK siRNA)。MTT方法检测其增殖,计算IC50及其逆转倍数,Western blot检测HK2蛋白表达,测定葡萄糖摄取、乳酸产量。结果 DDP单独处理的IC50为16.17mg/L,联合DXN处理的IC50为9.72 mg/L,逆转倍数为1.66。与对照组和DDP组比较,DXN+DDP组的DDPSKOV3/DDP细胞HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显降低(P<0.05)。si-NC组、si-HK2组细胞与DDP处理后,IC50分别为17.92、11.17 mg/L,逆转倍数为1.60。与si-NC组比较,si-HK2组SKOV3/DDP细胞HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显降低(P<0.05)。与对照组和DXN+DDP+Vector组比较,DXN+DDP+HK2组SKOV3/DDP细胞中HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显升高(P<0.05)。计算DXN(0μmol/L)、DXN(4μmol/L)+Vector、DXN(4μmol/L)+HK2细胞与DDP处理后IC50分别为16.59、9.66、13.10 mg/L,DXN对SKOV3/DDP细胞DDP耐药的逆转倍数为1.72,过表达HK2和DXN联合处理对SKOV3/DDP细胞DDP耐药的逆转倍数为1.27。结论 DXN通过抑制HK2进而抑制有氧糖酵解逆转SKOV3/DDP耐药,为研究DXN在卵巢癌耐药中的作用机制奠定了基础。

SAS诱导氧化应激时人卵巢癌顺铂敏感细胞与耐药细胞死亡方式的差异

目的利用柳氮磺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)诱导氧化应激,探讨卵巢癌非耐药细胞与耐药细胞死亡方式的差异。方法选用人卵巢癌顺铂敏感细胞SKOV3和顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,实验分组为对照组(Con),SAS各剂量组。应用铁死亡抑制剂Fer-1,实验分组为对照组,SAS组,Fer-1组,Fer-1与SAS联合作用组。应用程序性坏死抑制剂Nec-1,实验分组为对照组,SAS组,Nec-1组,Nec-1与SAS联合作用组。MTT法检测细胞生存率,实时无标记细胞功能分析法(Real time cell analysis,RTCA)实时连续分析细胞生存率。结果在SAS诱导卵巢癌细胞死亡过程中,耐药与非耐药卵巢癌细胞对SAS的敏感性不同,与非耐药细胞比较,耐药细胞对SAS更耐受。应用铁死亡抑制剂Fer-1,MTT、RTCA法结果显示,与SAS组比较,SAS与Fer-1联合作用组,SKOV3细胞生存率没有变化(P>0.05);Fer-1与SAS联合作用仅在24h前,SKOV3/DDP细胞生存率增加(P<0.05),其生存率曲线高于SAS组。应用程序性坏死(necroptosis)抑制剂Nec-1,RTCA结果显示,Nec-1与SAS联合作用持续至36hSKOV3细胞生存率曲线低于SAS作用组的生存率曲线(P>0.05);而Nec-1与SAS联合作用SKOV3/DDP细胞生存率曲线高于SAS作用组的生存率曲线(P<0.05)。Western blotting结果显示与SAS作用0h比较,SAS作用不同时间点,SKOV3细胞磷酸化MLKL蛋白表达没有变化(P>0.05),而SKOV3/DDP细胞中SAS作用12h、24h时磷酸化MLKL蛋白表达增强(P<0.05)。结论两种细胞对SAS的敏感性不同,可能与敏感细胞和耐药细胞在SAS作用时发生的细胞死亡途径差异有关。耐药细胞在氧化应激持续不同时间时发生程序性坏死和铁死亡途径。

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法:将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、核糖体蛋白(rpS6)、磷酸化rpS6(p-rpS6)以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果:PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论:PI-103抑制PI3K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。