不同剂量的顺铂-紫杉醇对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响

目的:探讨不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法:培养细胞,加入不同剂量的紫杉醇和顺铂,采取四唑盐(MTT)比色法、倒置显微镜观察法、Annexin法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)检测不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞对细胞生长周期和凋亡的百分率的影响。结果:紫杉醇和顺铂显著抑制卵巢癌COC1/DDP细胞生长,能够显著阻滞细胞于S期,细胞核浓缩,DNA断裂片段增加,细胞凋亡明显。结论:通过对卵巢癌COC1/DDP细胞生长实验研究和形态学观察,证明紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响细胞具有毒性作用,可通过相关途径诱导DU145细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长。

CAFs促进ADH1B甲基化对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)分泌的IL-6对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 收取新鲜离体上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织,分离纯化获得CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs);蛋白质印迹和免疫荧光实验检测上皮细胞和成纤维细胞标志物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、上皮型钙黏附素(E-cadherin)表达;收集CAFs和NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系,细胞分为SKOV3单独培养(SKOV3)组、SKOV3与NFs上清液(NFs)组及SKOV3与CAFs上清液(CAFs)组;细胞免疫组化检测SKOV3细胞共CAFs及NFs上清液培养后乙醇脱氢酶1B(ADH1B)表达;甲基化特异性PCR (MSP)、逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白质印迹实验分别检测甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)干预前后各组细胞ADH1B mRNA表达及甲基化状态、信号转导和激活因子3(STAT3)蛋白磷酸化水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法及Transwell实验分别检测IL-6抑制剂LMT-286及重组IL-6 (rhIL-6)对细胞增殖及侵袭能力的影响。结果 肿瘤成纤维细胞中高表达α-SMA,极低表达E-cadherin;相比较SKOV3组及NFs组,CAFs组ADH1B mRNA及蛋白表达明显下调,同时CAFs组细胞上清液中IL-6水平较SKOV3组及NFs组明显升高;5-Aza-dC作用后,ADH1B甲基化部分逆转;三组细胞ADH1B mRNA和蛋白表达均增加,CAFs组STAT3磷酸化水平下降;LMT-286及rhIL-6干预均仅抑制或促进CAFs组细胞增殖和侵袭,而SKOV3组和NFs组无明显改变。结论 CAFs通过IL-6/STAT3信号通路增强ADH1B甲基化促进卵巢癌细胞增殖和侵袭。

转导蛋白β样1X连接受体1表达对卵巢癌A2780细胞增殖和迁移的影响

目的:研究转导蛋白β样1X连接受体1(transducin beta-like 1X-linked receptor,TBL1XR1)在卵巢癌患者组织中表达,及其对卵巢癌A2780细胞增殖和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测10对卵巢癌组织、癌旁组织中及人卵巢癌IOSE80、A2780、CP70、SKOV-3中TBL1XR1 mRNA表达,筛选TBL1XR1 mRNA高表达细胞株。选择4~6周龄雌性BALB/C裸鼠,建立卵巢癌人源肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenografts,PDTX)模型;将10只模型鼠均分为siR-NC组和si-TBL1XR1组,每组5只,分别给予siR-NC、si-TBL1XR1局部注射,10 mg/kg,每3 d注射1次,18 d后取各组瘤组织,计算其体积与重量。取卵巢癌A2780细胞,将其分为siR-NC组、si-TBL1XR1组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-TBL1XR1组,分别予以siR-NC、si-TBL1XR1、pcDNA3.1空载质粒和pcDNA3.1-TBL1XR1质粒处理;采用蛋白免疫印迹法检测各组卵巢癌细胞周期蛋白表达,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡细胞比例,以及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:卵巢癌组织中TBL1XR1 mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05);人卵巢癌A2780细胞系TBL1XR1 mRNA表达明显高于卵巢癌IOSE80、CP70、SKOV-3细胞系(P<0.05)。与siR-NC组相比,第18天si-TBL1XR1组瘤体积明显减小(P<0.05),重量明显降低(P<0.05)。与siR-NC组相比,si-TBL1XR1组促癌细胞周期蛋白表达明显降低(P<0.05),与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TBL1XR1组表达则明显升高(P<0.05);与siR-NC组相比,si-TBL1XR1组卵巢癌细胞迁移数明显降低(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TBL1XR1组卵巢癌细胞迁移数明显增多(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:TBL1XR1在卵巢癌组织中呈高表达,降低TBL1XR1 mRNA表达可抑制卵巢癌A2780细胞增殖和迁移。

基膜聚糖通过抑制1型辅助T细胞分化提高耐药性卵巢癌治疗效果

目的探讨基膜聚糖(LUM)在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制,并初步探索其对1型辅助T(Th1)细胞分化的影响。方法通过基因表达数据集(GEO)筛选卵巢癌顺铂耐药株及敏感株中差异表达的基因,通过实时定量PCR检测其表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)敲低人卵巢癌细胞中LUM表达,并用Western blot法验证敲低效率。通过流式细胞术检测敲低LUM对顺铂处理后的卵巢癌细胞系周期及凋亡的影响。通过蛋白质相互作用(PPI)网络筛选LUM潜在靶蛋白,并用分子对接验证其相互作用。肿瘤免疫评估资源数据库(TIMER)筛选LUM对卵巢癌系分泌细胞因子的影响,并利用ELISA与实时定量PCR验证。流式细胞术分析LUM对共培养的CD4^(+)T细胞分化的调控作用。结果GEO数据显示LUM在顺铂耐药株中显著上调,且其表达水平与患者预后相关。LUM在卵巢癌顺铂耐药细胞株中表达水平较高,且顺铂治疗能促进LUM的表达。敲低LUM增加顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡和细胞周期阻滞,提高药物敏感性。靶基因筛选表明,LUM可能通过与Src同源域磷酸酶2(SHP2)相互作用调控卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。另外,TIMER分析结果提示高表达LUM抑制Th1细胞分化,在卵巢癌耐药株中敲低LUM促进Th1细胞分化,通过调控γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)分泌影响免疫细胞的肿瘤杀伤力。结论LUM在卵巢癌顺铂耐药中表达上调,可能通过调控SHP2相关信号通路降低卵巢癌细胞顺铂敏感性。LUM还通过调控卵巢癌细胞细胞因子分泌,进而抑制Th1细胞分化,促进肿瘤耐药性产生,可能是卵巢癌治疗新的潜在靶点。

单细胞转录组数据揭示PHLDA1是卵巢癌T细胞耗竭的关键分子

目的通过绘制高级别浆液性卵巢癌(High-grade serous ovarian cancer,HGSOC)单细胞转录组图谱,筛选并验证与CD8^(+)T细胞耗竭相关的关键基因。方法利用实验室前期的单细胞测序数据(SRA数据库:PRJNA756768),并整合数据库中5例HGSOC测序数据,分析肿瘤微环境中T细胞的具体亚型,拟时序分析探究T细胞亚群分化轨迹,差异基因富集确定免疫抑制的CD8^(+)IL-2^(Low)和CD8^(+)IFN-γ^(Low)细胞亚群及差异基因,再结合患者预后筛选出与CD8^(+)T细胞耗竭密切相关的候选分子。流式分析人PBMC中的T细胞激活到耗竭过程中Pleckstrin同源样结构域家族A成员1(Pleckstrin homology-like domain,family A,member 1,PHLDA1)在CD8^(+)T、CD4^(+)T及Treg细胞上的表达,ELISA检测PHLDA1 High和PHLDA1 Low的CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平,最后流式数据分析PHLDA1与耗竭标志物PD-1、TIM-3的关联。结果将T细胞按三种方式分群:(1)IL-2 High和IL-2^(Low);(2)IFN-γ^(High)和IFN-γ^(Low);(3)耗竭和杀伤T细胞。随后取其差异基因的交集,最终筛选到关键基因PHLDA1。流式分析提示T细胞激活到耗竭的过程中,PHLDA1在CD8^(+)T、CD4^(+)T及Treg细胞上的表达持续升高;ELISA结果显示CD8^(+)PHLDA1^(High)的T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平显著低于CD8^(+)PHLDA1^(Low)T细胞。同时,CD8^(+)PHLDA1^(High)T细胞亚群可同时覆盖CD8^(+)TIM-3^(+)和CD8^(+)PD-1^(+)的耗竭T细胞类型。结论本研究基于单细胞测序数据筛选到PHLDA1是卵巢癌CD8^(+)T细胞耗竭的关键分子,该研究为卵巢癌的免疫治疗提供了新的思路。

卵巢癌患者外周血HDAC2、PD-L1蛋白及调节性T细胞水平与临床病理特征和预后的关系分析

目的探讨卵巢癌(OC)患者外周血组蛋白脱乙酰基酶(HDAC2)、程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白及调节性T细胞(Treg)水平与临床病理特征和预后的关系。方法选取2018年7月至2019年9月在张家口市第一医院确诊治疗的60例OC患者作为研究组,根据随访3年患者生存情况分为生存组(n=43)、死亡组(n=17);另选取同期同一医院确诊的60例卵巢良性肿瘤患者作为对照组。采用流式细胞术检测外周血Treg、辅助性T细胞17(Th17)和Th17/Treg水平,采用酶联免疫吸附试验法检测HDAC2和PD-L1蛋白水平。分析Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平与临床病理特征间的关系;治疗后随访3年,分析比较生存组和死亡组患者外周血Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平;采用Logistic回归分析OC患者预后的影响因素。结果研究组患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1水平均显著高于对照组(P<0.05);OCⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。临床分期、残存病灶大小、淋巴结转移、Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均为OC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白参与并影响OC的发展,与患者预后密切相关。

WARS1通过免疫相关基因STAT1调控卵巢癌细胞增殖与侵袭的作用机制研究

分析WARS1通过免疫相关基因STAT1调控在卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)当中的增殖与侵袭的作用机制。方法 将上海市奉贤区中心医院、江苏省常州市妇幼保健院以及金华市妇幼保健院在2012-2017年收治的174例患者,共收集108例浆液性卵巢癌样本。按照WARS1的表达情况分为高表达组与低表达组,分析不同组别在分类、年龄、病理级别、淋巴结转移以及临床分期上存在的差异。使用RT-PCR及WB技术在mRNA及蛋白水平检测上皮性卵巢癌性葆艾CAOV3、OV429、OVCAR3、OVCAR5、OVCAR8、A2780、SKOV3及ES2中的WARS1表达情况,选择表达量较高的细胞株进行稳转敲低,表达量较低的细胞株进行稳转过表达,对稳转敲低及过表达的效率进行验证。将干扰效率最佳的siRNA对上皮性卵巢细胞癌进行干扰,鉴定敲低及过表达的WARS1细胞功能,使用CCK及克隆实验检测其中的细胞增殖能力,使用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,使用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。借助TGGA数据库对基因集进行富集分析,明确WARS在卵巢癌生物学功能影响的分子机制。结果 分类、浆液性卵巢癌淋巴结转移、浆液性卵巢癌临床分期与其密切相关(P<0.05);通过CCK-8试验进行稳转敲低之后,增殖能力有明显的降低,经过克隆形成实验的稳转敲低之后,卵巢癌细胞增殖能力降低。经过Transwell实验敲低WARS1之后,卵巢癌细胞的迁移能力、侵袭能力降低。经过凋亡实验之后,发现卵巢癌细胞凋亡能力升高。通过富集分析发现,WARS1会对P13K/AKT/mTOR信号通路有促肿瘤的作用。结论 WARS1在卵巢癌当中为高表达,与患者的不良预后有密切关系,可能会在未来成为浆液性卵巢癌的潜在治疗靶点。

CCNE1表达水平与卵巢癌术后抗血管生成治疗反应性及预后的关系

目的探讨细胞周期蛋白E1(CCNE1)表达水平与卵巢癌术后抗血管生成治疗反应性及预后的关系。方法选取2019年6月至2021年6月该院收治的卵巢癌患者206例为研究对象,采用免疫组织化学染色分析术后(抗血管生成治疗前)CCNE1表达水平,根据组织学评分分为CCNE1高表达组和CCNE1低表达组,观察两组术后抗血管生成治疗反应,治疗2个疗程后比较两组客观缓解率(ORR)。同时随访2年,观察卵巢癌患者预后情况(以出现死亡为预后不佳),采用多因素Logistic回归分析筛选影响卵巢癌患者术后抗血管生成治疗反应性的相关因素,采用Cox回归分析影响卵巢癌患者预后的相关因素。结果治疗2个疗程后,CCNE1高表达组的ORR为65.63%,明显高于CCNE1低表达组的49.30%(P<0.05)。治疗反应患者肿瘤最大径、CA125水平低于无反应患者(P<0.05),CCNE1高表达比例高于无反应患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CCNE1高表达是卵巢癌患者抗血管生成治疗无反应的保护因素(P<0.05),CA125水平升高、肿瘤最大径增大均是卵巢癌患者抗血管生成治疗无反应的危险因素(P<0.05)。随访2年,6例失访(CCNE1高表达组2例,CCNE1低表达组4例),最终纳入200例,其中92例预后良好,108例预后不佳。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CCNE1高表达组的生存率低于CCNE1低表达组(Log-rankχ^(2)=7.554,P=0.006)。预后良好组肿瘤最大径、手术残余病灶最大径均小于预后不佳组(P<0.05),CCNE1高表达比例低于预后不佳组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,术后残余病灶最大径增大、CCNE1高表达、肿瘤最大径增大均是卵巢癌患者术后抗血管生成治疗预后不佳的独立危险因素(P<0.05)。结论术后CCNE1表达水平是卵巢癌患者术后抗血管生成治疗反应性的影响因素,同时也是卵巢癌患者预后的影响因素。

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的：探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1／DDP的增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法检测姜黄素对COC1／DDP细胞的增敏作用；用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1／DDP细胞48h后的细胞凋亡率；Westernblot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在15～35μmol／L以内时以一定的剂量一效应关系对COC1／DDP有明显的增殖抑制作用。顺铂的浓度在1．25～5mg／L时加入20μmol／L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05），尤以2．5mg／L顺铂和20μmol／L姜黄素联合作用时，耐药细胞生存率下降最明显；COC1／DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比，凋亡率明显增加（P〈0．05）；顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低（P〈0．05），Caspase-3蛋白的表达明显增高（P〈0．05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC-／DDP增殖，并能增强该细胞系对顺铂的敏感性，其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达，增加CasDase-3蛋白的表汰有关。

内凝集蛋白1在卵巢癌中的生物信息学分析及体外抗增殖作用研究

目的分析内凝集蛋白1(ITLN1)在卵巢癌中的生物信息学信息及其体外抗增殖作用。方法2021年3月至2022年3月,采用基因表达数据库(GEO)来分析筛选卵巢癌组织中的差异基因。利用基因表达谱交互分析工具(GEPIA)来分析ITLN1在卵巢癌肿瘤组织与正常组织中的表达水平。利用癌症基因组图谱-基因型组织表达(TCGA-GTEx)数据制作受试者操作特征曲线(ROC曲线),利用Kaplan Meier-plotter分析ITLN1低表达或高与卵巢癌病人总生存率的曲线关系。利用LinkedOmics筛选ITLN1在卵巢癌中的相关基因,然后采用京都基因与基因组数据库(KEGG)进行通路富集分析。细胞实验分组:空载体对照组(vector),TLN1过表达载体组(TLN1),ITLN1+740 Y-P组。通过蛋白质印迹法检测ITLN1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)以及磷酸化Akt(p-Akt)在卵巢癌细胞中蛋白表达水平。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法与细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖。结果ITLN1在卵巢癌组织(0.45±0.17)和人卵巢癌细胞株A2780(0.72±0.08)、CAOV3(0.57±0.05)、SKOV3(0.44±0.08)中的表达量均显著降低(P<0.05)。并且,ITLN1在卵巢癌中具有诊断价值(ROC曲线下面积为0.88),ITLN1高表达组的卵巢癌病人总生存率高于ITLN1低表达组(风险比0.74,P<0.05)。ITLN1通过抑制PI3K/Akt信号通路从而降低卵巢癌细胞的增殖能力(0.55±0.02)。结论ITLN1表达水平可以成为卵巢癌病人的预后判断标志物,是潜在的卵巢癌治疗的靶点。这为卵巢癌的分子靶向治疗提供了新的理论基础。

卵巢癌患者癌组织MMP-10、IL-17A、HMGB1表达与病情严重程度的相关性

目的:探究卵巢癌患者癌组织基质金属蛋白酶10(MMP-10)、白细胞介素17A(IL-17A)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与病情严重程度相关性。方法:将407例卵巢癌患者的临床资料作为观察组,以同期就诊的216例良性卵巢肿瘤患者为对照组。检测并比较两组患者血清MMP-10、IL-17A、HMGB1水平,分析不同参数下卵巢癌患者血清MMP-10、IL-17A、HMGB1水平,利用Spearman分析卵巢癌患者血清MMP-10、IL-17A、HMGB1与FIGO分期、分化程度的相关性。结果:入院时,观察组患者血清MMP-10、IL-17A、HMGB1水平均高于对照组(P<0.05)。不同FIGO分期、分化程度、淋巴结转移卵巢癌患者中血清MMP-10、IL-17A、HMGB1水平有统计学差异(P<0.05)。Spearman分析显示血清MMP-10、IL-17A、HMGB1与FIGO分期、分化程度均呈正相关关系(P<0.05)。结论:血清MMP-10、IL-17A、HMGB1与FIGO分期、分化程度呈正相关,可作为卵巢癌患者病情严重程度的诊断指标。

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用

为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,COC1/DDP和COC1的N GSLs表达有显著差异 ,COC1/DDP的CMH表达较COC1强 ;经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Westernblot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Westernblot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加。结论原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

基于免疫组化SP法检测AEG-1在不同分化程度和分期的卵巢癌患者中的阳性表达及病理特点

目的探讨基于免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)在不同分化程度和分期的卵巢癌患者中的阳性表达及病理特点。方法选取2018年10月至2023年1月哈尔滨医科大学附属第三医院收治的97例卵巢癌患者作为研究对象,所有患者均行手术切除治疗,并经过病理检查确诊。采用免疫组化SP法检测卵巢病变组织肿瘤中的AEG-1表达情况,分析AEG-1阳性表达情况、染色强度评分、病理特点。结果染色强度评分为(3.14±0.76)分。卵巢癌组织中AEG-1阳性表达率为83.51%,AEG-1阳性信号未出现在肿瘤周边正常卵巢组织。黏液性卵巢癌和卵巢浆液性囊腺癌患者卵巢癌组织中AEG-1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌患者国际妇产科联盟(FIGO)各分期、淋巴结有无转移的阳性表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者年龄、各分化程度阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论AEG-1会促进卵巢癌的发生、发展,其可用于判断卵巢癌的恶性程度、疾病进展情况。

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。

卵巢癌耐药细胞亚株(coc1/DDP)中DNA定量分析

卵巢癌的死亡率在女性生殖道恶性肿瘤中占首位，其５年生存率仅为３０％～４０％。其耐药性的产生是导致治疗失败的主要原因之一。本研究对卵巢癌耐药细胞株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ）进行ＤＮＡ相对定量分析，探讨ＤＮＡ含量与耐药性之间的关系。１材料与方法１．１材料亲代细...