黏附性G蛋白偶联受体F1在胰腺导管腺癌中的表达及其促进癌症进展的机制研究

目的·分析黏附性G蛋白偶联受体F1(adhesion G protein-coupled receptor F1,ADGRF1)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发生及发展过程中的表达变化,探究ADGRF1对PDAC细胞增殖的影响以及促进PDAC进展的潜在分子机制。方法·基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析ADGRF1在正常胰腺组织及PDAC组织中的mRNA水平表达。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ADGRF1在正常胰腺导管上皮细胞hTERT-HPNE及多种PDAC细胞中的表达情况。利用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测PDAC患者的癌组织及癌旁组织中ADGRF1的表达差异。转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低ADGRF1后,通过CCK8和平板克隆形成实验检测PDAC细胞AsPC-1、SW1990增殖能力的变化。构建稳定过表达ADGRF1的Patu8988细胞,通过CCK8实验检测过表达ADGRF1引起的PDAC细胞增殖变化。利用RNA测序(RNA-sequence,RNA-seq)、基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)和免疫浸润分析预测与ADGRF1促进PDAC癌症进展相关的信号通路。结果·TCGA数据库和GEO数据库的分析结果显示ADGRF1 mRNA在PDAC组织中的表达高于正常胰腺组织(均P=0.000)。qPCR和Western blotting结果显示,与hTERT-HPNE细胞相比,多种PDAC细胞中ADGRF1的mRNA和蛋白水平均有所上调(均P<0.05)。IHC结果显示ADGRF1在PDAC患者癌组织中的表达也高于癌旁组织。此外,下调ADGRF1能够抑制PDAC细胞AsPC-1、SW1990的增殖能力;而过表达ADGRF1则促进Patu8988细胞的增殖能力(均P<0.05)。RNAseq、GSEA富集分析和免疫浸润的结果显示,ADGRF1的表达与干扰素α(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等信号通路有关。结论·ADGRF1在PDAC细胞和组织中高表达,促进PDAC细胞的增殖,其机制可能与多个免疫相关信号通路有关。

转导蛋白β样1X连接受体1表达对卵巢癌A2780细胞增殖和迁移的影响

目的:研究转导蛋白β样1X连接受体1(transducin beta-like 1X-linked receptor,TBL1XR1)在卵巢癌患者组织中表达,及其对卵巢癌A2780细胞增殖和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测10对卵巢癌组织、癌旁组织中及人卵巢癌IOSE80、A2780、CP70、SKOV-3中TBL1XR1 mRNA表达,筛选TBL1XR1 mRNA高表达细胞株。选择4~6周龄雌性BALB/C裸鼠,建立卵巢癌人源肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenografts,PDTX)模型;将10只模型鼠均分为siR-NC组和si-TBL1XR1组,每组5只,分别给予siR-NC、si-TBL1XR1局部注射,10 mg/kg,每3 d注射1次,18 d后取各组瘤组织,计算其体积与重量。取卵巢癌A2780细胞,将其分为siR-NC组、si-TBL1XR1组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-TBL1XR1组,分别予以siR-NC、si-TBL1XR1、pcDNA3.1空载质粒和pcDNA3.1-TBL1XR1质粒处理;采用蛋白免疫印迹法检测各组卵巢癌细胞周期蛋白表达,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡细胞比例,以及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:卵巢癌组织中TBL1XR1 mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05);人卵巢癌A2780细胞系TBL1XR1 mRNA表达明显高于卵巢癌IOSE80、CP70、SKOV-3细胞系(P<0.05)。与siR-NC组相比,第18天si-TBL1XR1组瘤体积明显减小(P<0.05),重量明显降低(P<0.05)。与siR-NC组相比,si-TBL1XR1组促癌细胞周期蛋白表达明显降低(P<0.05),与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TBL1XR1组表达则明显升高(P<0.05);与siR-NC组相比,si-TBL1XR1组卵巢癌细胞迁移数明显降低(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TBL1XR1组卵巢癌细胞迁移数明显增多(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:TBL1XR1在卵巢癌组织中呈高表达,降低TBL1XR1 mRNA表达可抑制卵巢癌A2780细胞增殖和迁移。

长链非编码RNA PVT1调控表皮生长因子受体/有丝分裂原活性蛋白激酶通路对卵巢癌细胞的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)调控表皮生长因子受体(EGFR)/有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)通路对卵巢癌细胞的影响。方法:将人卵巢癌细胞SKOV-3分为对照组(空白未处理)、si-NC组(转染携带空载体慢病毒)、si-lncRNA PVT1组(转染lncRNA PVT1 siRNA)。另选取人正常卵巢上皮细胞系HOSE为正常组。采用RT-qPCR检测细胞中lncRNA PVT1表达。采用Transwell实验、平板克隆实验分别检测SKOV-3细胞侵袭以及克隆形成能力。采用流式细胞术检测SKOV-3细胞凋亡情况。采用Western blot检测细胞中EGFR、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2蛋白表达。根据细胞分组,将BALB/c裸鼠也相应随机分为对照组、si-NC组、si-lncRNA PVT1组,每组8只。建立裸鼠皮下移植瘤模型。比较各组裸鼠不同时间皮下移植瘤体积及平均瘤体重量。结果:对照组SKOV-3细胞lncRNA PVT1表达水平高于si-lncRNA PVT1组,si-lncRNA PVT1组SKOV-3细胞lncRNA PVT1表达水平高于正常组人卵巢正常上皮细胞系HOSE(均P<0.05)。与对照组及si-NC组比较,si-lncRNA PVT1组SKOV-3细胞克隆形成率、侵袭细胞数、EGFR、p-ERK1/2蛋白表达水平降低,细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与对照组及si-NC组比较,si-lncRNA PVT1组裸鼠28 d时皮下移植瘤体积以及平均瘤体重量降低(均P<0.05)。结论:lncRNA PVT1在卵巢癌细胞中高表达,干扰其表达可抑制卵巢癌细胞侵袭、克隆、凋亡以及裸鼠皮下成瘤速度,作用机制可能与调控EGFR/MAPK信号通路有关。

血清肿瘤坏死因子受体相关蛋白1、三叶因子1表达水平对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值

目的 探讨化疗前血清指标肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)、三叶因子1(TFF1)表达水平在预测卵巢癌患者化疗疗效中的临床价值。方法 回顾性分析2022年2月—2023年5月本院收治的85例卵巢癌患者的临床资料,根据化疗疗效分为无效组(30例)和有效组(55例)两组。比较两组患者临床特征及血清指标TRAP1、TFF1表达水平;建立受试者工作特征(ROC)曲线分析化疗前血清TRAP1、TFF1表达水平对卵巢癌患者化疗疗效的联合预测价值,计算曲线下面积(AUC)并进行Z检验比较;采用多因素logistic回归分析进行卵巢癌患者化疗疗效的影响因素分析。结果 无效组化疗前、化疗后血清TRAP1和TFF1表达水平均高于有效组(P<0.05),有效组化疗前血清TRAP1和TFF1表达水平高于化疗后(P<0.05)。无效组卵巢癌患者的肿瘤直径≥5 cm比例和FIGO分期Ⅳ期比例高于有效组(P<0.05)。血清TRAP1、TFF1表达水平单独及联合预测卵巢癌患者化疗疗效的AUC分别为0.851(95%CI:0.784~0.918)、0.860(95%CI:0.790~0.920)、0.938(95%CI:0.883~0.984),敏感度分别为90.98%、66.76%、86.78%,特异度分别为69.11%、92.74%、81.89%。TRAP1、TFF1、FIGO分期是卵巢癌患者化疗无效的独立危险因素(P<0.05)。结论 血清TRAP1和TFF1表达水平联合检测在预测卵巢癌患者化疗疗效中有较高的应用价值,较高的TRAP1和TFF1水平提示卵巢癌患者化疗无效。

卵巢癌组织LGR4蛋白表达与临床病理特征、术后复发的关系研究

目的探究卵巢癌组织富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体4(LGR4)蛋白表达与临床病理特征、术后复发的关系。方法选取本院2020年8月~2022年1月份收治138例行手术治疗的卵巢癌患者,采用免疫组织化学法检测癌组织和切缘正常组织LGR4蛋白表达率并比较;比较不同临床病理特征患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率;随访1年,统计患者复发率,比较复发与未复发患者癌组织LGR4蛋白表达率;采用Cox比例风险回归模型分析卵巢癌患者术后复发的的危险因素,Pearson双变量法分析LGR4蛋白表达与术后复发的相关性。结果卵巢癌患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率高于切缘正常组织(P<0.05),且TNM分期Ⅲ期、未/低分化、最大肿瘤直径≥4 cm、有淋巴结转移患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率分别高于TNM分期I~II期、中/高分化、最大肿瘤直径<4 cm、无淋巴结转移患者(P<0.05);随访结束时有45例患者复发,复发率为36.59%,未进行靶向治疗、手术效果未达到R0、放化疗不敏感、术中肿瘤破裂、卵巢癌组织LGR4蛋白阳性表达均为卵巢癌患者术后复发的危险因素(RR=4.437、3.961、5.524、4.711、6.476,P<0.05);卵巢癌患者术后复发与LGR4蛋白表达呈正相关(r=0.416,P<0.05),LGR4蛋白阳性表达患者复发率高于LGR4蛋白阴性表达患者(=19.295,P<0.001)。结论卵巢癌患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率高于切缘正常组织,TNM分期Ⅲ期、未/低分化、有淋巴结转移及癌组织LGR4蛋白阳性表达均为卵巢癌术后复发的危险因素,且卵巢癌术后复发与LGR4蛋白表达呈正相关。

G蛋白耦联受体、CD44v6和E-cadherin在卵巢黏液性腺癌中的表达及意义

目的应用免疫组化方法检测卵巢黏液性腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5、白细胞分化抗原(CD)44v6和上皮型黏附素(E-cadherin)的表达特点。方法 114例卵巢黏液性腺癌术后组织蜡块及临床资料作为观察组,收集卵巢交界性黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块70例作为对照组,收集卵巢黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块70例作为正常对照组,应用免疫组化方法检测LGR5、CD44v6和E-cadherin的表达。结果 LGR5、CD44v6和E-cadherin 3组中表达阳性率的差别显著,观察组中LGR5、CD44v6和E-cadherin的表达与肿瘤的最大径、脉管浸润、TNM分期、腹水中是否有癌细胞密切相关。观察组中LGR5和E-cadherin、CD44v6和E-cadherin的表达呈负相关性。结论卵巢黏液性腺癌术后组织中LGR5、CD44v6和E-cadherin异常表达,三者对肿瘤癌变及肿瘤进展过程中可能起促进作用。LGR5和CD44v6可能通过抑制E-cadherin的表达发挥促进肿瘤进展的作用。

血清人附睾蛋白4、叶酸受体1水平与上皮性卵巢癌患者临床特征和预后的关系

目的 探讨血清人附睾蛋白4(HE4)、叶酸受体1(FOLR1)水平与上皮性卵巢癌患者临床特征和预后的关系。方法 选取120例上皮性卵巢癌患者,采用酶联免疫吸附试验检测血清HE4、FOLR1水平。收集患者的临床资料,比较不同临床特征上皮性卵巢癌患者的血清HE4、FOLR1水平。随访2年,采用Logistic回归模型分析上皮性卵巢癌患者预后的影响因素。结果 国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移上皮性卵巢癌患者的血清HE4、FOLR1水平均高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。随访2年,120例患者中,生存56例,死亡64例。单因素分析显示,FIGO分期、淋巴结转移情况、血清HE4水平、血清FOLR1水平均可能是上皮性卵巢癌患者预后的影响因素(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析显示,FIGO分期、淋巴结转移情况、血清HE4水平、血清FOLR1水平均是上皮性卵巢癌患者预后的独立影响因素(P﹤0.01)。结论 血清HE4、FOLR1水平与上皮性卵巢癌患者的FIGO分期、淋巴结转移情况有关,HE4、FOLR1可作为预测上皮性卵巢癌患者预后的生物标志物,具有重要的临床意义。

miR-767-5p通过调控TBL1XR1蛋白表达抑制人卵巢癌细胞系侵袭

目的探索miR-767-5p和转导素β1X连锁受体蛋白1(TBL1XR1)对卵巢癌进展的影响以及作用机制。方法数据库分析:使用GEO、miRPATH数据库和RStudio对miR-767-5p进行KEGG(京都百科全书)富集分析,并在GEO数据集低表达和高表达microRNA中各选择差异表达倍数TOP5的microRNAs,按照差异倍数由低到高排列;miRDB等数据库预测miR-767-5p可结合的靶基因并取交集,结合Open Target Platform、GEPIA等数据库筛选出目的基因;GEPIA、THPA数据库分析TBL1XR1在人体各器官表达量分析、免疫组化分析以及生存曲线分析。实验验证:双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和TBL1XR1存在结合靶点;Western blot检测卵巢癌细胞系(OC3、SKOV-3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中TBL1XR1的表达;在SKOV-3细胞中转入miR-767-5p过表达质粒与TBL1XR1过表达质粒后,Western blot检测TBL1XR1表达量,Tanswell小室法检测细胞侵袭。结果数据库分析:选择低表达差异倍数最高的miR-767-5p作为目的microRNA进行后续研究;miR-767-5p参与多种癌的相关通路,且miR-767-5p、TBL1XR1与乳腺癌、卵巢癌等联系密切;TBL1XR1在卵巢癌中呈现高表达,且与患者预后不良相关。实验验证:miR-767-5p和TBL1XR1可靶向结合(P<0.05);相对于IOSE80细胞,TBL1XR1在OC3、SKOV-3、HO-8910细胞中呈现明显高表达;转入miR-767-5p过表达质粒后,TBL1XR1表达量降低,卵巢癌细胞侵袭性降低(P<0.05),而同时转入TBL1XR1过表达质粒后可在一定程度上减弱这种影响。结论miR-767-5p通过调控TBL1XR1的表达抑制人卵巢癌细胞系的侵袭。

OLR1在卵巢癌中的表达及其与免疫细胞浸润、预后的相关性分析

目的应用生物信息学工具分析氧化低密度脂蛋白受体1(oxidized low density lipoprotein receptor 1,OLR1)基因在卵巢癌中的表达特征,并探讨其与免疫细胞浸润、患者预后的关联。方法采用GEPIA2、GeneMANIA、STRING、cBioPortal、LinkedOmics、TIMER 2.0、TISIDB数据库和Kaplan-Meier生存曲线探讨OLR1基因在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达差异及其与预后的相关性;分析OLR1的共表达基因和蛋白互作网络,分析OLR1基因在卵巢癌中的基因突变情况;分析OLR1表达与肿瘤免疫细胞浸润、免疫调节因子间的相关性。结果卵巢癌组织OLR1呈显著高表达,高表达的OLR1显著缩短卵巢癌患者的总生存期(overall survival,OS)、无进展生存期(progression-free survival,PFS)和疾病进展后生存期(post-progression survival,PPS)(P<0.05);OLR1表达与CD8^(+)T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞浸润呈正相关,与大多数免疫抑制剂、免疫刺激剂和主要组织相容性抗体相关分子呈正相关。结论OLR1基因可作为卵巢癌诊断、预后和免疫细胞浸润水平的标志物。

血清FOLR1、IL-1β及SMRP联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中的价值

目的分析血清叶酸受体-1(FOLR1)、白细胞介素-1(IL-1β)及可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中的价值。方法回顾性分析150例卵巢肿瘤患者的临床资料,以术后病理诊断结果为金标准,根据良恶性情况将其分为上皮性卵巢癌组(n=84)和非上皮性卵巢癌组(n=66)。比较2组入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平,采用ROC曲线分析入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP及联合检测对上皮性卵巢癌的早期诊断效能。根据上皮性卵巢癌组患者临床分期标准将其分为Ⅰ期组(n=12)、Ⅱ期组(n=27)、Ⅲ期组(n=31)、Ⅳ期组(n=14)4个亚组,比较不同临床分期的上皮性卵巢癌患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平差异。结果上皮性卵巢癌组患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平均高于非上皮性卵巢癌组(P<0.05)。入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP及其联合检测曲线均明显高于参考线(P<0.05),其cut off值分别为325.94 pg/ml、11.78 pg/ml、3.28 pg/ml。上皮性卵巢癌组患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平随临床分期升高而升高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论入院时患者血清FOLR1、IL-1β及SMRP联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中具有一定临床诊断价值,血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平越高,说明卵巢肿瘤癌变情况越严重。临床治疗可根据血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平提前采取治疗措施,以避免肿瘤进一步癌变。

雌二醇及雌激素受体抑制剂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及其PTEN、GSK3β、cyclinD1蛋白表达的影响

目的:探讨雌二醇(E2)与雌激素受体抑制剂ICI182,780作用后,对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及磷脂酰肌醇/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路上蛋白表达的影响,明确E2及其受体抑制剂对SKOV3细胞作用的机制。方法:采用流式细胞技术检测普通培养液(对照组)、浓度为10-7mol/L的E2(E2组)和相同浓度E2与ICI182,780(E2+ICI182,780组)作用SKOV3细胞后不同时间段(24、48小时)SKOV3细胞凋亡率的变化,Western-Blot法检测E2与ICI182,780作用SKOV3细胞后不同时间段(0、1、2、6、12、24小时)PI3K/AKT信号通路相关分子的蛋白表达。结果:①E2组作用SKOV3细胞24、48小时后SKOV3细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);E2+ICI182,780组作用SKOV3细胞24、48小时后SKOV3细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。②E2上调SKOV3细胞人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、p-PTEN、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)、细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达;ICI182,780在不同程度上拮抗以上的作用,但是二者对GSK3β蛋白表达均无影响。结论:E2激活SKOV3细胞内的PI3K/AKT信号传导通路,促使通路上蛋白磷酸化,最终抑制细胞凋亡;雌激素受体抑制剂ICI182,780可抑制E2对PI3K/AKT信号传导通路的激活作用,从而促进细胞凋亡。

GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

G蛋白偶联雌激素受体1、表皮生长因子受体和趋化因子受体1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor1,GPER1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和趋化因子受体1(chemokine receptor1,CXCR1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达及意义。方法甲状腺乳头状癌68例、结节性甲状腺肿42例,采用免疫组织化学S-P法检测GPER1、EGFR和CXCR1的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,以及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,GPER1、EGFR和CXCR1的表达阳性率分别为76.5%、66.2%、64.7%,明显高于结节性甲状腺肿组的21.4%、16.7%和11.9%(P<0.01);GPER1、EGFR和CXCR1在PTC中的表达与颈部淋巴结转移相关(P<0.05),而与其他临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小及TNM分期)无相关性(P>0.05);在PTC及PTC淋巴转移癌组织中,GPER1与EGFR的表达呈显著正相关(r=0.262,P=0.031;r=0.542,P=0.002)、GPER1与CXCR1的表达也呈显著正相关(r=0.276,P=0.025;r=0.483,P=0.006)。结论 GPER1、EGFR和CXCR1的两两共表达与PTC的发生、发展密切相关,三者间可能存在一种相互作用。

不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30mRNA及蛋白表达观察

目的观察不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30(GPR30)mRNA及蛋白的表达变化。方法收集正常增生期人子宫内膜组织,原代培养子宫内膜腺上皮细胞并鉴定。体外培养人子宫内膜癌细胞系ISK(ERα阳性、ERβ阳性、高分化)、RL95-2(ERα阳性、ERβ阳性、中分化)、HEC-1-B(ERα阴性、ERβ阳性、中分化)、KLE(ERα阴性、ERβ阴性、低分化)。采用real-time PCR法检测正常子宫内膜腺上皮细胞及不同子宫内膜癌细胞系中的GPR30 mRNA,采用Western blotting法检测GPR30蛋白。结果子宫内膜腺上皮细胞、ISK细胞系、RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系中GPR30 mRNA相对表达量分别为0.016±0.002、0.032±0.004、0.049±0.003、0.051±0.006、0.083±0.001,GPR30蛋白相对表达量分别为0.31±0.22、0.57±0.01、1.21±0.04、1.34±0.05、1.77±0.01。各子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量均高于子宫内膜腺上皮细胞(P均<0.05);ISK细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量最低,与RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系相比,P均<0.05;KLE细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量高于HEC-1-B细胞系及RL95-2细胞系(P均<0.05)。结论不同子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白均呈高表达,且在高、中、低分化的子宫内膜癌细胞系中表达水平逐渐增高。

血清DJ-1蛋白和叶酸受体-1水平检测联合哥本哈根指数诊断上皮性卵巢癌的临床价值

目的探讨血清DJ-1蛋白和叶酸受体-1(folate receptor-1,FOLR1)水平检测联合哥本哈根指数(Copenhagen index,CPH-I)诊断上皮性卵巢癌的临床价值。方法将2016年1月至2019年3月首都医科大学宣武医院收治的83例上皮性卵巢癌患者纳入恶性组,将该院同期收治的85例卵巢良性肿瘤患者纳入良性组。比较两组患者血清DJ-1蛋白、FOLR1、糖类抗原125(carbohydrate antigen,CA125)、人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)水平,绘制受试者操作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC曲线),分析上述指标单独或联合诊断上皮性卵巢癌的价值。结果恶性组患者血清DJ-1蛋白、FOLR1、CA125、HE4水平和CPH-I均显著高于良性组(均P<0.05)。ROC曲线分析显示:DJ-1蛋白、FOLR1水平和CPH-I联合诊断上皮性卵巢癌的灵敏度、特异度、曲线下面积均大于DJ-1蛋白、FOLR1、CA125、HE4水平和CPH-I单独诊断。结论DJ-1蛋白、FOLR1水平检测联合CPH-I能够提高对上皮性卵巢癌的诊断效能,值得临床应用。

G蛋白耦联受体30和表皮生长因子受体在子宫内膜腺癌中的表达

目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)和表皮生长因子受体(EGFR)在子宫内膜腺癌组织中表达的意义及其关系。方法:20例子宫内膜不典型增生(EAH)组织、50例子宫内膜腺癌(EAC)组织,采用免疫组化EliVision二步法检测各组组织中GPR30和EGFR表达情况,另设20例正常子宫内膜组织标本作为对照组。分析GPR30和EGFR的表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。结果:对照组、EAH组、EAC组组织中GPR30的阳性表达率分别为10.0%、45.0%和74.0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.001),EAH组显著高于对照组(P<0.05),EAC组显著高于EAH组(P<0.05);GPR30表达与EAC组织病理学分级有关(P<0.05),但与其他临床病理特征无关(P>0.05)。EGFR在对照组、EAH和EAC组中阳性表达率分别为30.0%、40.0%和70.0%,EAC组显著高于EAH组和对照组(P<0.05,P<0.001),但EAH组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。在EAC组中,EGFR表达与手术-病理分期、组织病理学分级和肿瘤直径有关(P<0.05),与其他临床病理参数无关(均P>0.05)。EAC组中GPR30和EGFR表达呈正相关(r=0.308,P<0.05)。结论:GPR30和EGFR的过表达可能与子宫内膜腺癌的发生发展相关。GPR30和EGFR在子宫内膜腺癌中表达呈正相关,两者间可能存在相互作用。GPR30和EGFR可能成为治疗子宫内膜癌更为有效的新靶点。

G蛋白耦联受体C家族6组A亚型在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的前列腺癌(PCa)在我国的发病率逐年上升。G蛋白耦联受体C家族6组A亚型(GPRC6A)是近年来发现的PCa易感基因。文章探讨GPRC6A及其介导的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在前列腺癌LncapC4?2细胞增殖与凋亡中的作用。方法实验分为LncapC4?2 PCDH组(仅转染空载体pCDH)、LncapC4?2 GPRC6A组(仅转染pCDH?GPRC6A)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(转染pCDH?GPRC6A并加入U0126处理),通过CCK8检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡改变以及Western blot方法检测细胞周期与凋亡相关蛋白的变化。结果 Western blot法结果表明,与LncapC4?2 PCDH组比较,LncapC4?2 GPRC6A组的GPRC6A和P?ERK表达增加(P<0.05);与LncapC4?2 GPRC6A组比较,LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的P?ERK的表达明显降低(P<0.05)。CCK8检测表明LncapC4?2 GPRC6A组相较LncapC4?2 PCDH组增殖加快(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相较LncapC4?2 GPRC6A组增殖明显减慢(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示LncapC4?2 GPRC6A组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 PCDH组明显降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 GPRC6A组明显升高(P<0.05)。Western blot结果中LncapC4?2 GPRC6A组的CyclinD1蛋白表达(0.88±0.04)较LncapC4?2 PCDH组(0.66±0.02)明显升高(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的CyclinD1蛋白表达(0.71±0.02)较LncapC4?2 GPRC6A组明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测凋亡结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的凋亡比例(3.64%)较LncapC4?2 PCDH组(9.00%)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(19.57%)明显降低(P<0.05)。同时Western blot检测结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的Bcl2的表达比LncapC4?2 PCDH组高,活化Caspase3的表达则降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相对于LncapC4?2 GPRC6A组Bcl2的表达降低,活化Caspase3的表达则增高(P<0.05)。结论 GPRC6A可能通过ERK信号通路促进PCa细胞增殖,抑制细胞凋亡,而参与PCa的发展过程。

盘状结构域受体1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨人卵巢癌组织中盘状结构域受体1(DDR1)蛋白的表达情况及其临床意义。方法运用免疫组化法检测33例正常卵巢组织、43例卵巢良性肿瘤组织及94例卵巢癌组织中的DDR1蛋白表达情况,比较不同临床病理特征卵巢癌患者的DDR1蛋白阳性表达率,分析DDR1蛋白阳性表达与卵巢癌患者的预后关系。结果卵巢癌组织的DDR1蛋白阳性表达率均高于其他组织(均P<0.05),而正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织间,差异无统计学意义(P>0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期者、低分化者、有腹腔转移者的DDR1蛋白表达阳性率分别高于Ⅰ~Ⅱ期者、中-高分化者高、无腹腔转移者(均P<0.05)。DDR1蛋白的阳性表达及腹腔转移是卵巢癌患者死亡的危险因素(均P<0.05)。结论 DDR1蛋白在卵巢癌组织中呈高表达,其可能参与卵巢癌的发生发展与远处转移,或可成为评估卵巢癌患者预后的重要因素。

叶酸受体蛋白1对卵巢癌患者的临床应用价值

目的：探讨人卵巢组织叶酸受体蛋白1（FOLR1）表达量对卵巢癌患者诊断、疗效监测、化疗耐药和预后评估的临床应用价值。方法：93例卵巢癌患者（卵巢癌组）按照组织学分型分为黏液性癌组（n=37）、浆液性癌组（n=48）和内膜样癌组（n=8）;根据临床分期分为Ⅰ—Ⅱ期组（n=39）和Ⅲ—Ⅳ期组（n=54）;根据有无淋巴结或远处器官转移分为有转移组（n=21）和无转移组（n=72）;根据临床疗效分为完全缓解组（CR组,n=31）、部分缓解组（PR组,n=29）、病情稳定组（SD组,n=14）和病情进展组（PD组,n=19）;根据化疗耐药情况分为化疗耐药组（n=37）和化疗敏感组（n=56）。同期收治的卵巢良性肿瘤患者作为良性肿瘤组（n=60）。卵巢组织和功能正常妇女作为对照组（n=40）。采用Western Blotting技术检测各组卵巢组织FOLR1相对表达量,比较卵巢癌组、良性肿瘤组和对照组FOLR1水平差异,比较不同临床特征卵巢癌患者FOLR1水平差异,比较不同疗效和是否耐药卵巢癌患者FOLR1水平差异。通过FOLR1检测结果绘制ROC曲线,计算最佳临界值,并以此临界值评估卵巢癌患者60个月生存率。结果：与对照组比较,卵巢癌组和良性肿瘤组FOLR1相对表达量均显著升高（t=30.577、20.527,P〈0.01）,卵巢癌组较良性肿瘤组升高更明显（t=17.051,P〈0.01）。与浆液性癌组比较,黏液性癌组和内膜样癌组FOLR1相对表达量均显著降低（t=13.515、13.902,P〈0.01）,黏液性癌组与内膜样癌组FOLR1比较差异无统计学意义（t=0.187,P〉0.05）。Ⅲ—Ⅳ期组患者FOLR1表达水平显著高于Ⅰ—Ⅱ期组患者（t=10.834,P〈0.01）,有转移组FOLR1表达水平显著高于无转移组（t=10.335,P〈0.01）。与CR组患者比较,PR组、SD组和PD组患者FOLR1表达水平均依次升高,PR组高于CR组（t=16.42,P〈0.01）,SD组高于PR组（t=5.349,P〈0.01）,PD组更高于SD组（t=9.732,P〈0.01）。化疗敏感组患者FOLR1表达水平显著高于化疗耐药组（t=16.495,P〈0.01）。FOLR1≥3.184癌症患者60个月生存率仅为19.14%,而FOLR1〈3.184癌症患者60个月生存率达39.23%,两者差异有统计学意义（χ^2=4.715,P〈0.01）。结论：卵巢癌患者FOLR1表达量显著升高可以作为卵巢癌早期诊断、化疗耐药判断的生物标志物之一。

GPR120、SCC-Ag、PD-1在非小细胞肺癌中的表达及其与临床特征、预后的关系

目的:探究G蛋白耦联受体120(GPR120)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、程序性死亡受体1(PD-1)在非小细胞肺癌中的表达及其与临床特征、预后的关系。方法:选取2018年1月1日—2019年12月31日新疆生产建设兵团第一师医院收治的经手术治疗的81例非小细胞肺癌患者。分析所有患者临床特征(性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、临床分期、淋巴结转移、累及程度)及预后情况,检查所有患者癌组织、癌旁组织GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA。比较所有患者癌组织、癌旁组织GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA。比较不同临床特征患者癌组织GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1mRNA。比较存活组及死亡组GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA。分析GPR120 mRNA与SCC-Ag、PD-1 mRNA的关系。分析GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA对患者预后的预测价值。结果:癌组织中的GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1m RNA均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、累计肌层患者癌组织GPR120m RNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA均高于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、未累计肌层患者,差异有统计学意义(P<0.05)。81例患者随访6个月,22例死亡,59例存活。死亡组GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA均明显高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson结果显示,GPR120 mRNA与SCC-Ag呈正相关(r=0.368,P=0.001);GPR120 mRNA与PD-1 mRNA呈正相关(r=0.314,P=0.004);SCC-Ag与PD-1 mRNA呈正相关(r=0.295,P=0.007)。ROC曲线分析,三项联合诊断AUC值高于GPR120 mRNA、SCC-Ag、PD-1 mRNA单项诊断。结论:在非小细胞肺癌中GPR120、SCC-Ag、PD-1m RNA呈高表达状态,与患者分化程度、临床分期、淋巴结转移、累及程度相关,且与患者预后相关,三项联合检测对非小细胞肺癌患者预后存活、死亡的判断价值较高。