去甲斑蝥素干预Wnt/β-catenin信号通路诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:讨论去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,将浓度为52μmol/L去甲斑蝥素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、去甲斑蝥素组(52μmol/L),等待卵巢癌细胞贴壁药物作用6 h后,在倒置显微镜下观察卵巢癌SKOV3细胞的形态学变化,荧光显微镜观察细胞核的变化;药物作用24 h后,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化情况,采用Western blot法检测药物作用后对卵巢癌SKOV3细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平的影响。结果:与对照组比较,去甲斑蝥素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,降低线粒体膜电位,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,升高Bax的表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达水平,降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达水平。结论:去甲斑蝥素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

NDUFA4通过增强线粒体活化水平促进卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨NDUFA4介导线粒体活化水平对卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移及侵袭的影响。方法:以慢病毒技术建立SKOV3细胞的NDUFA4过表达和沉默模型;CCK-8检测细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测线粒体膜电位和凋亡;Real-time PCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数,MT-ND1、MT-ND5、MT-CYB、SDHA、PGC-1α、NRF1和mTFA mRNA的表达;电镜观察线粒体形态,分光光度法检测Complex IV活性水平;Western blot检测PGC-1α、NRF1、mTFA蛋白的表达。结果:SKOV3细胞中实现NDUFA4的过表达和沉默;NDUFA4的过表达提高细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05),上调mtDNA拷贝数,上调MT-ND1、MT-ND5、MT-CYB、SDHA、PGC-1α、NRF1和mTFA mRNA水平(P<0.05),上调PGC-1α、NRF1和mTFA蛋白水平(P<0.05),上调线粒体膜电位水平以及Complex IV活性水平(P<0.05),线粒体变多形态正常。而NDUFA4的沉默则相反,线粒体出现空泡化。结论:NDUFA4可能通过加强线粒体的活化和氧化磷酸化的水平在SKOV3细胞中发挥促癌功能。

circSKA3/miR-3163/ADAM9基因轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及免疫因子表达的机制研究

目的:探讨circSKA3/miR-3163/去整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)基因轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及免疫因子表达的机制。方法:qRT-PCR检测卵巢癌组织、癌旁组织circSKA3、miR-3163表达;Western blot检测组织ADAM9蛋白水平。选用SKOV3细胞进行体外实验,分为sh-NC组、sh-circSKA3组、miR-NC组、miR-3163组、sh-circSKA3+antimiR-3163组、sh-circSKA3+pcDNA-ADAM9组。qRT-PCR检测SKOV3细胞circSKA3、miR-3163表达;CCK-8、划痕实验、Transwell检测细胞增殖活性、迁移及侵袭能力;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6、IL-10表达;双荧光素酶报告实验验证circSKA3与miR-3163、miR-3163与ADAM9的靶向关系;Western blot检测SKOV3细胞ADAM9、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白水平。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织circSKA3、ADAM9表达升高,miR-3163表达降低(P<0.05);与sh-NC组/miR-NC组比较,sh-circSKA3组/miR-3163组细胞增殖活性、划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9蛋白及TNF-α、IL-6表达降低,IL-10表达升高(P<0.05);circSKA3可靶向调控miR-3163表达,miR-3163可靶向结合ADAM9(P<0.05);与sh-circSKA3组比较,sh-circSKA3+anti-miR-3163组、sh-circSKA3+pcDNA-ADAM9组细胞增殖活性、划痕愈合率升高,侵袭细胞数增多,MMP-2、MMP-9蛋白及TNF-α、IL-6表达升高,IL-10表达降低(P<0.05)。结论:沉默circSKA3表达可通过上调miR-3163表达而降低ADAM9表达,抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭,调控免疫因子表达。

莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞胀亡及Bcl-2表达的影响

目的观察莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞胀亡指数及Bcl-2表达的影响,探讨莪术油注射液致人卵巢癌SKOV3细胞胀亡的机制。方法以不同浓度莪术油注射液作用人卵巢癌SKOV3细胞后,通过荧光显微镜观察细胞核变化、透射电镜计算细胞胀亡指数、琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂情况、免疫组化观察细胞Bcl-2基因的表达。结果人卵巢癌SKOV3细胞经莪术油注射液作用48 h后,荧光显微镜观察到胀亡细胞出现细胞肿胀,体积增大,胞膜面积缩小,核染色质分散扩大;细胞胀亡指数随浓度的增加而增大,呈量效关系;电泳观察DNA呈弥漫型;Bcl-2基因表达下调。结论莪术油注射液可使人卵巢癌SKOV3细胞随浓度的增加而胀亡指数增大,并可下调Bcl-2基因表达,提示下调Bcl-2基因表达可能是莪术油注射液致SKOV3细胞胀亡的作用机制之一。

miR-145对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miR-145对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响.方法:通过慢病毒转染将含miR-145的质粒转入SKOV3细胞中,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达miR-145的SKOV3细胞株.通过实时荧光定量PCR验证miR-145的表达情况,MTT、流式细胞和transwell检测过表达miR-145后对SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.结果:过表达miR-145后,MTT实验显示SKOV3细胞增殖能力较对照组明显降低;流式检测显示过表达miR-145的SKOV3细胞凋亡率增加;Transwell实验显示过表达miR-145的SKOV3细胞侵袭能力明显低于对照组.结论:SKOV3细胞miR-145过表达可能通过增加SKOV3细胞凋亡率从而降低细胞增殖和侵袭能力.

岩大戟内酯B对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用

目的探讨岩大戟内酯B(JB)对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用及可能机制。方法采用不同浓度的JB处理卵巢癌Skov3细胞48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Skov3细胞的增殖抑制率,Hoechst法检测Skov3细胞凋亡指数,Western blot检测Akt、P-Akt(Ser473)、Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白水平。结果 0.1,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的JB可呈剂量依赖的方式抑制Skov3细胞的增殖,IC50为5.28μmol/L;20.0μmol/L JB和30.0μmol/L LY294002(PI3K抑制剂)均可增加Skov3细胞凋亡指数,降低P-Akt(Ser473)/Akt水平,增加促凋亡基因(Bax、Caspase-3)的蛋白水平,降低抑制凋亡基因(Bcl-2)的蛋白水平,且均与对照组有显著差异;而LY294002可增强JB的效应,且与JB组有显著差异。结论 JB可抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路和诱导死亡受体表达来发挥抗肿瘤作用的。

理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响

目的:探讨理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响。方法:以卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞抑制作用,AnnexinV-FITC法检测SKOV3细胞凋亡情况,细胞周期与细胞凋亡检测试剂测定SKOV3细胞周期变化,流式细胞术检测SKOV3细胞中CD44^+CD117^+细胞比例。结果:与空白组比较,24h和48h顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44^+CD117^+细胞比例明显增加,与顺铂组比较,24h和48h理冲生髓饮联合顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44^+CD117^+细胞比例明显降低,其中理冲生髓饮中剂量组联合顺铂组作用效果最强。结论:理冲生髓饮具有抗肿瘤作用,其机制可能是增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡,调控细胞周期阻滞,降低卵巢癌SKOV3细胞中干细胞数量。

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2mRNA及蛋白表达水平的影响

目的:研究中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2(COX-2)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10μmol/L组、柚皮苷20μmol/L组、柚皮苷40μmol/L组、阳性对照组(塞来昔布80μmol/L)。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Re-al-time PCR和Western Blot法测定培养48h后各组细胞中COX-2mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48h后,Real-time PCR结果显示,与空白对照组(1.094±0.053)比较,10、20μmol/L柚皮苷即对SKOV3细胞COX-2 mRNA表达抑制作用(0.828±0.006,0.753±0.011,P<0.05),而40μmol/L柚皮苷则明显下调COX-2mRNA的表达(0.412±0.216,P<0.01),与塞来昔布组(0.321±0.017)的抑制程度相近。Western Blot法检测结果显示,与空白对照组(1.7325±0.0826)相比,10μmol/L柚皮苷组相对表达量(1.7925±0.0880)虽略有上调,但无统计学差异,20、40μmol/L柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达(1.2225±0.0822,1.2725±0.0763,P<0.05),塞来昔布组也明显抑制COX-2蛋白的表达。结论:柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2mRNA和蛋白的表达。

沉默GRP78基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的抑制作用

目的探讨RNA干涉技术(RNAi)沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的影响,阐明GRP78基因沉默对SKOV3细胞侵袭力抑制作用的生物学机制。方法设计并构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3细胞。RT-PCR和Western印迹法检测GRP78基因表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭力;Transwell小室迁移实验检测细胞迁移率。结果 RT-PCR及W estern印迹检测转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞GRP78基因表达抑制;RT-PCR结果显示与对照组相比转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达降低;Transwell小室侵袭实验和迁移实验结果显示转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞穿透细胞数(P<0.05)和迁移率均明显降低(P<0.05)。结论①转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3细胞GRP78基因表达;②抑制GRP78基因表达能降低SKOV3细胞的侵袭力和迁移力,有望为抑制卵巢癌转移基因治疗提供新的靶点。

miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响。方法：通过慢病毒转染技术将含miR-125a-5p的质粒转入SKOV3细胞中，经嘌呤霉素筛选建立稳定表达mi-125a-Sp的SKOV3细胞株。通过实时定量荧光RT-PCR验证miR-125a-5p的表达情况，MTT、流式技术、Transwell、划痕实验检测过表达miR-125a-5p后对SKOV3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移能力的影响。结果：过表达miR-125a-5p后，SKOV3细胞增殖能力较对照组有显著提高；流式细胞检测显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞S期细胞增多，GO／GI期细胞及细胞凋亡率减少；Transwell和划痕实验显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞侵袭和迁移能力明显高于对照组。结论：SKOV3细胞miR-125a-Sp过表达可能通过减少G0／G1期细胞及细胞凋亡率从而促进细胞增殖、侵袭和迁移能力。

绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的探讨绿茶提取物(green tea extract,GTE)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及其作用途径。方法 SKOV3细胞的培养液内添加GTE,培养后,应用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测SKOV3细胞的生长曲线;免疫细胞化学法检测细胞抗凋亡蛋白酶(Bcl-xl)、细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3)等凋亡相关蛋白的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、芳香化酶(aromatase)等蛋白的表达水平。结果 MTT法显示,培养液内添加不同浓度GTE均能明显抑制SKOV3细胞生长(P<0.05),且呈明显的浓度依赖性;免疫细胞化学法显示,培养液内添加GTE 80μg/L作用24 h后,SKOV3细胞中Bcl-xl蛋白的平均吸光度(A)值为(0.228±0.032),与对照组(0.303±0.014)相比显著下调(P<0.01),Caspase-3蛋白平均A值为(0.193±0.043),与对照组(0.1 35±0.030)相比明显上调(P<0.05);Western blotting法显示,经GTE(40、80μg/L)作用24 h后,SKOV3细胞中ERα、aromatase的蛋白表达明显下调,ERα与内参β-肌动蛋白(β-actin)的比值分别为(0.665±0.042)、(0.208±0.020),与对照组(0.846±0.046)相比均显著降低(P<0.01),aromatase与β-actin的比值分别为(0.251±0.030)、(0.129±0.054),与对照组(0.728±0.026)相比亦均显著降低(P<0.01);ERβ蛋白的表达明显上调,其与β-actin的比值为(0.322±0.081)、(0.735±0.032),与对照组(0.098±0.039)相比显著升高(P<0.01)。结论 GTE在体外能有效抑制SKOV3细胞的生长与增值,其作用机制可能与诱导SKOV3细胞凋亡,并可下调ERα、aromatase蛋白的表达水平,上调ERβ蛋白的表达水平有关。

氧化苦参碱通过下调HOTAIR表达抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖及机制

目的研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其可能机制。方法培养SKOV3细胞,应用不同浓度OMT作用不同时间后,应用CCK-8检测细胞增殖的变化;应用Real-Time PCR法检测OMT作用不同时间后,HOTAIR在SKOV3细胞中的表达的变换;应用Lipofect Amine 2000,将HOTAIR过表达慢病毒载体以及其阴性对照转染至SKOV3细胞后,给予OMT,应用CCK-8法检测SKOV3细胞增殖变化,应用Western Blot检测SKOV3细胞Bcl-2以及Bax的蛋白表达含量变化,计算Bcl-2/Bax的比值。结果 OMT明显抑制了SKOV3细胞增殖,并呈时间和剂量依赖;OMT明显降低了HOTAIR在SKOV3细胞中的表达水平,表现为剂量相关;转染HOTAIR过表达慢病毒载体后,OMT抑制增殖的作用被阻断,SKOV3细胞的增殖能力基本恢复,SKOV3细胞中Bcl-2/Bax的比值基本恢复。结论 HOTAIR参与了OMT抑制SKOV3细胞增殖调控过程,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达相关。

体外靶向PI3K基因RNA干扰对卵巢癌SKOV3细胞Akt表达的影响

目的采用RNA干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/Akt信号转导通路中关键基因PI3Kp110α,观察其对PI3K/Akt信号通路下游信号蛋白Akt的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110α基因的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌SKOV3细胞,采用荧光定量PCR法检测干扰后PI3K、Akt mRNA的表达,免疫荧光双标法观察RNA干扰48 h后对PI3K、Akt蛋白的影响。结果 Real-time PCR结果示RNA干扰组PI3K、Akt mRNA相对含量显著低于空白载体组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而空白载体组与对照组表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光细胞化学结果示RNA干扰组的PI3K、Akt蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组比较无明显差异。结论 siRNA可沉默卵巢癌SKOV3细胞P13Kp110α基因的表达,同时减轻PI3K蛋白及下游信号蛋白Akt的表达,以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术可望成为卵巢癌基因治疗的新策略。

RNA干扰PI3K基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的采用RNA干扰技术沉默人卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号转导通路中PI3Kp110α基因,观察其对SKOV3细胞增殖的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110α基因的小干扰RNA(siRNA)转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用免疫荧光双标法观察RNA干扰48h后对PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的影响。结果 RNA干扰组PCNA蛋白、CyclinD1蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组相比无明显差别。结论 RNA干扰P13Kp110α基因可下调PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的表达,抑制细胞增殖,这种调控可能是通过PI3K/AKT信号通路及其下游靶分子进行的。以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术有望成为卵巢癌基因治疗的新策略。

KLK7小分子抑制剂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭与转移的影响

为了探讨KLK7小分子抑制剂G284-1264对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭和转移的影响,采用MTT法检测G284-1264处理后细胞的存活率;钙黄绿素-AM/PI活细胞/死细胞双染和流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布,同时用细胞划痕实验检测G284-1264对SKOV3细胞侵袭与转移的影响。结果显示:相同时间作用下,随着G284-1264浓度增大,SKOV3细胞存活率逐渐降低,24 h、48 h和72 h的IC50分别为110.0、48.62和39.64μmol/L,相比5-FU,G284-1264对SKOV3细胞表现出更强的抗增殖能力;钙黄绿素-AM/PI对细胞进行双染后,G284-1264作用组细胞活力明显降低;流式细胞术分析发现,G284-1264作用组G1期的细胞数目增加,G2期明显降低,且凋亡率高于空白组和阳性对照组;划痕实验表明G284-1264处理细胞36 h后,细胞迁移率降低16.49%。以上结果表明KLK7小分子抑制剂G284-1264能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭与转移。

双氢青蒿素下调Notch1蛋白表达对人卵巢癌Skov3细胞抑制作用的研究

目的研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人卵巢癌Skov3细胞增殖及对Notch1mRNA、蛋白表达的影响。方法体外培养人卵巢癌Skov3细胞,加入不同浓度的DHA(分别为0、5、10、20、40、80μmol/L),采用MTT比色法检测不同浓度DHA对人卵巢癌Skov3细胞增殖的影响;采用RT-PCR法和Western blot法检测不同浓度DHA处理24h的人卵巢癌Skov3细胞内Notch1mRNA和蛋白表达水平的变化。结果不同浓度的DHA处理不同时间(24、48、72h)后,卵巢癌Skov3细胞的生长明显受到抑制(P<0.05);随着DHA浓度的增加,人卵巢癌Skov3细胞内Notch1mRNA和蛋白的表达逐渐下降(均P<0.05)。结论 DHA可能通过下调Notch1的表达抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖。

固体脂质纳米姜黄素联合顺铂对卵巢癌SKOV3的增殖及Bax/Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:研究固体脂质纳米姜黄素(Curcumin-loaded solid lipid nanoparticles,SLN-Cur)与顺铂(Cisplatin,DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响及促凋亡作用。方法:姜黄素(Curcumin,Cur)制备成SLN-Cur新型给药系统,分别检测DDP、Cur、SLN-Cur、DDP+Cur、DDP+SLN-Cur对人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡形态学变化及超微结构变化,细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白的表达。结果:SLN-Cur可抑制SKOV3细胞生长,抑制率与药物浓度及作用时间成依赖关系,24 h IC50=40.14μmol/L,DDP与SLN-Cur联合诱导细胞凋亡作用增强,具有显著协同作用;Bcl-2表达减弱,Bax表达增强。结论:SLN-Cur合用DDP对SKOV3细胞株具有较好的抑制增殖及促凋亡作用,通过下调Bcl-2表达及上调Bax表达而诱导细胞凋亡。

二氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用

目的研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法用MTT法检测DHA对SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)测其凋亡率,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax的表达。结果双氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制效应,呈明显的时间-剂量依赖性。DHA处理SKOV3细胞后,24、28、72 h的IC50值分别为117、35.677、23.382μmol/L。二氢青蒿素可以抑制SKOV3细胞增殖,促进其凋亡,下调Bcl-2基因的表达,增加Bax基因的表达,并有时间、浓度依赖性。结论二氢青蒿素对人卵巢癌SKOV3细胞有体外抑制作用,可能通过下调Bcl-2、增加Bax基因的表达来促进细胞的凋亡。

木犀草素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

目的观察木犀草素(Luteolin)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响,并通过转录组学探讨其分子机制。方法体外培养人卵巢癌细胞,设立空白对照组、Luteolin组(10、20、40μmol·L^-1),给予药物干预48 h。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;EdU实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Hochest33342染色观察细胞的形态学变化;转录组测序分析空白对照组与40μmol·L^-1Luteolin组干预48 h的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs);根据转录组测序结果,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,Luteolin组细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组EdU阳性细胞率均显著降低(P<0.05);Luteolin组G0/G1期细胞比例均显著降低(P<0.05),S期细胞比例均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组Hochest33342染色存在细胞凋亡现象;通过转录组测序分析,筛选获得1476个DEGs,挖掘到包括CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1调控细胞增殖与凋亡的DEGs;与空白对照组比较,Luteolin组的CDKN1A、GADD45A、ATF4、DDIT3 mRNA表达水平上调(P<0.05),CDC20、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1 mRNA表达水平下调(P<0.05)。结论 Luteolin可抑制SKOV3细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能涉及CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1多基因的调控。

沉默信息调节因子3对白藜芦醇诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的:检测沉默信息调节因子3 (Sirt3)对白藜芦醇(Res)诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,探讨其促进凋亡的机制。方法:人卵巢癌SKOV3细胞加入不同浓度(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0mg·L-1)Res培养24h,MTT法检测细胞存活率。将细胞随机分为对照组、Sirt3抑制剂3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶(3-TYP)组、Res组和3-TYP+Res组,培养24h后,MTT法检各组细胞增殖抑制率;采用Hoechst 33342进行细胞核染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态;采用活性氧(ROS)探针检测细胞中ROS水平;Western blotting法检测各组细胞中Sirt3、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:MTT实验,随着Res浓度的增加,细胞存活率明显降低,Res的半数抑制浓度(IC50)为42.73mg·L^-1。与对照组比较,Res组和3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05);与Res组比较,3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,3-TYP+Res组细胞核出现固缩、染色增强、核碎裂增多。与对照组比较,3-TYP组细胞红色荧光无明显变化,Res组和3-TYP+Res组细胞红色荧光明显减少。Western blotting法检测,与对照组比较,3-TYP组细胞中Sirt3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),Res组细胞中Sirt3和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与Res组比较,3-TYP+Res组细胞中Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2和Sirt3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:Res可以诱导SKOV3细胞的凋亡,3-TYP通过抑制Sirt3表达可增强Res的作用。