G蛋白偶联受体抑制剂与成人卵巢组织体外共培养通过抑制HIPPO-YAP信号通路促进始基卵泡募集

目的本研究观察G蛋白偶联受体抑制剂溶血磷脂酸(LPA)及1-磷酸硝氨醇(S1P)与成人卵巢组织共培养后Hippo-YAP信号通路各元件及下游蛋白因子的表达及卵巢组织中卵泡发育相关标记的变化,探讨其通过Hippo-YAP信号通路调控始基卵泡募集的作用。方法收集中山大学附属第一医院2017年3月-2017年11月妇科手术切除的正常成人卵巢组织,通过WB、ELISA等方法检测分别经GPCRs抑制剂共培养、机械卵巢组织碎片化及其与Akt通路激活剂共培养结合使用后组织中通路各元件及下游蛋白因子的表达及培养液中卵泡发育相关指标的浓度,观察不同处理方式对Hippo-YAP通路抑制效应及对卵巢内卵泡募集的效果。结果(1)成人卵巢皮质组织使用5μmol/L LPA及5μmol/L S1P联合培养体系共培养8h左右可获得较明显的Hippo-YAP通路效应因子CCN2的表达促进效果(P<0.01);(2)正常成人卵巢皮质组织中,AKT信号通路激活剂共培养48 h后与LPA及S1P共培养8 h可获得与目前体外卵泡激活标准的“机械碎片化HIPPO-YAP信号通路抑制法+AKT信号通路激活剂共培养48 h”方案相接近的HIPPO-YAP信号通路主要元件YAP的磷酸化抑制及下游效应因子CCN2表达增加效应(P>0.5)。结论(1)GPCRs抑制剂LPA及S1P共培养后在人卵巢组织呈现Hippo-YAP通路抑制效应;(2)在体外培养体系中,人卵巢皮质组织以5μmol/L LPA及5μmol/L S1P组成的总浓度为10μmol/L的GPCRs抑制剂处理,培养24 h后可获得较佳的Hippo-YAP通路抑制效应,但Hippo-YAP信号通路抑制产生的促卵巢组织生长的效应在通路抑制效应后仍可能持续存在。