组蛋白H2A去泛素化酶BAP1对恶性胶质瘤细胞发生发展的作用及临床应用价值研究

目的探索乳腺癌/卵巢癌易感基因1相关蛋白1(breast/ovarian cancer susceptibility gene 1 associated protein 1,BAP1)对人源恶性胶质瘤发生、发展的作用与BAP1作为恶性胶质瘤临床诊断标志物的可行性。方法基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)的子数据集GSE4290,GSE90598,分析BAP1在正常组织及胶质瘤组织中的差异性表达情况;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析BAP1对恶性胶质瘤的早期诊断价值;选取自主收集的非配对28例恶性胶质瘤患者的原发灶组织、5例颅脑外伤患者内减压术切除的非瘤脑组织,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BAP1的表达水平;利用靶向BAP1的特异性小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)瞬时转染U251细胞系,进一步检测其干涉效率;基于流式细胞仪分析BAP1下调的U251细胞系,其细胞周期、凋亡的变化情况。结果生物信息学结果显示,BAP1在恶性胶质瘤组织中的表达水平均低于正常脑组织(GSE4290:1209±18.49 vs 1476±53.90;GSE90598:5.19±0.10 vs 5.65±0.21),差异具有统计学意义(t=5.115,2.267,均P<0.05)。ROC曲线显示,BAP1可高效区分恶性胶质瘤组织与正常脑组织(GSE4290:AUC=0.78;GSE90598:AUC=0.75,均P<0.05)。临床标本结果显示,BAP1在恶性胶质瘤原发灶组织中的表达水平显著低于非瘤脑组织(0.27±0.04 vs 1.06±0.07),差异具有统计学意义(t=10.22,P<0.001)。在U251细胞系中下调BAP1的表达,其细胞周期中S期细胞比例明显增多,由17.59%分别增至27.21%(siBAP1-1)和25.79%(siBAP1-2),差异具有统计学意义(t=6.576,6.642,均P<0.01),而细胞凋亡水平则有所下降,由10.17%分别降至2.70%(siBAP-1)和3.00%(siBAP-2),差异具有统计学意义(t=10.31,9.428,均P<0.01)。结论组蛋白H2A去泛素化酶BAP1能够通过抑制恶性胶质瘤细胞周期快速进展并促进其凋亡,进而发挥肿瘤抑癌基因的功能,可作为潜在的恶性胶质瘤临床诊断标志物。

丹归胶囊对大鼠卵巢储备功能低下的改善作用及机制研究

目的:评价丹归胶囊对大鼠卵巢储备功能低下(DOR)的改善作用,并初步探讨其机制。方法:48只12周龄健康SPF级SD雌性大鼠适应性喂养3 d后,随机分为模型组、坤泰胶囊组、丹归胶囊(高、中、低)剂量组、空白组。除空白组外,其余组均腹腔注射75 mg/kg的环磷酰胺1次,建立大鼠卵巢储备功能低下的模型。连续灌胃给药36 d后,观察大鼠行为学变化,动情周期,血清性激素水平、卵巢组织病理学改变及卵巢GDF-9、Egr-1蛋白表达和TNF-αmRNA、INF-γmRNA转录水平的变化情况。结果:丹归胶囊可使DOR大鼠FSH、LH水平明显降低,E2、AMH明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。丹归胶囊可使模型大鼠卵巢存在成熟卵泡,卵泡腔内卵子生长良好。丹归胶囊可使模型大鼠GDF-9、Egr-1蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且TNF-αmRNA、INF-γmRNA表达有不同程度的降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:丹归胶囊具有改善卵巢储备功能低下的作用,其机制可能跟调节各种性激素水平及卵巢相关蛋白表达有关。

苏格木勒-7对化疗致卵巢功能低下大鼠的卵巢功能保护机制

目的探究苏格木勒-7对卵巢功能低下模型大鼠的卵巢功能保护机制。方法采用48只正常性周期大鼠随机分为4组:模型组即环磷酰胺组(CTX)、模型加苏格木勒-7[0.5 g/(kg·d)]组即苏-7-0.5组、模型加苏格木勒-7[1.0 g/(kg·d)]组即苏-7-1.0组、正常组,除了正常组其他3组均连续7 d腹腔注射CTX 30 mg/(kg·d)。正常组和模型组等量生理盐水灌胃,其余给药组在造模第1天开始(建模同时)分别灌胃给予苏-7-1.0 g/(kg·d)和苏-7-0.5 g/(kg·d),每天给药1次,连续给药24 d,采用免疫组织化学法检测卵巢组织氧化应激相关蛋白8-羟基脱氧乌苷(OHdG)、4-羟基壬烯醛(HNE)、硝基酪氨酸(NTY)及卵泡发育相关细胞因子骨形成态蛋白质(BMP)-15、生长分化因子(GDF)-9的定位及表达量;用Western印迹法检测卵巢组织凋亡相关蛋白及抗氧化相关蛋白Bax、Bcl-2、超氧化物歧化酶(SOD)、血小板反应蛋白(TSP)-1、组织蛋白酶(Cathepin)D、骨髓基质细胞抗原(BST)1、补体因子-H(CFH)等的表达量。结果苏格木勒-7对大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、转化生长因子(TGF)-β1明显改善;Western印迹检测结果,对Bax、Bcl-2、SOD及TSP-1、CFH等显著改善。结论苏-7通过多方面、多途径来对化疗性卵巢功能低下大鼠内分泌和生殖功能起到保护作用。

小檗胺通过OTUB1和MDM2-p53通路调控肺癌A549细胞的增殖、凋亡和侵袭转移

目的:探讨小檗胺对肺癌细胞A549的增殖、侵袭转移和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:用MTT试验和EdU试剂盒检测小檗胺对A549细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell试验检测小檗胺对A549细胞侵袭转移的影响,台盼蓝染色实验和Cell Death Detection Elisa Kit检测小檗胺对A549细胞凋亡的影响;Western blotting检测小檗胺对A549细胞中卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)、鼠双微体2基因(MDM2)、p53及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。结果:小檗胺以浓度依赖和时间依赖的形式抑制A549细胞增殖,在小檗胺处理A549细胞72 h时,小檗胺抑制细胞增殖的IC50为(22.7±2.3)μmol/L。与对照组比较,小檗胺能够明显诱导A549细胞凋亡(P<0.05)。划痕试验和Transwell试验结果表明小檗胺能够明显抑制A549细胞的侵袭转移(P<0.05)。Western blotting结果提示小檗胺能够明显下调OTUB1、MDM2的表达(P<0.05),上调p53和cleaved-Caspase-3/Caspase-3的表达(P<0.05)。结论:小檗胺能够抑制A549细胞增殖与侵袭转移,诱导细胞凋亡,这种作用可能是通过调控OTUB1和MDM2-p53信号通路来实现的。

Expression of the chemoresistance-related proteins and p53 gene as a predictor of chemotherapy response and a prognostic factor in patients with ovarian cancer at the stages of II-IV

Objective To clarify the prognostic significance of histologic subtype and its correlation to expression of chemoresistance-related proteins （CRPs） in ovarian cancer. Methods A total of 107 stage II-IV ovarian cancers, where the proportion of serous, endometrioid, mucinous, and clear cell subtype was 62.6%, 15.9%, 14.0%, and 7.5%, respectively, were investigated for glutathione Stransferase-pi （GST-pi）, MDR （multidrug resistance）-l, and p53 expression using immunohistochemistry. Results GST-pi expression was detected in 62.6% of the tumors and was not related to histologic subtype of tumor. MDR-1 expression was observed in 52.3% of the tumors tested and was more frequently detected in serous adenocarcinomas than other histologic subtypes of tumor （P〈0.001）. P53 expression was found in 43.3% of serous, 35.3% of endometrioid, 40.0% of mucinous adenocarcinomas and 37.5% of clear cell adenocarcinomas. In univariate analysis, there are direct correlations between CRPs and overall survival. In multivariate analysis, GST-pi expression （P=0.0052）, MDR-1 expression （P=0.0058）, histologic subtype （P=0.0067）, FIGO stage （P=0.0089）, and residual tumor （P=0.0041） were found to be significant independent prognostic factors. Conclusion Histologic subtype proved to be the significant independent prognostic factor in addition to FlGO stage and residual tumor in stage II-IV ovarian cancer. GST-pi, MDR-1, and p53 expression pattern is closely related to histologic subtype of ovarian cancer, at the same time they are the significant predictors of survival.

去泛素化酶OTUB1与肿瘤相关性的研究现状

卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)属于去泛素化酶家族成员之一,对于多聚泛素化链的高度特异性识别切割功能引起广泛关注,可调控多种重要的信号通路,如上皮-间质转化通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路和p53相关信号通路等。近年来已经逐渐成为肿瘤学研究的新方向,越来越多的研究证明,OTUB1与肝细胞癌、结直肠癌、乳腺癌等多种肿瘤的关系密切,调控肿瘤的发生、发展以及预后,靶向OTUB1可能成为肿瘤的潜在治疗方法。泌尿系肿瘤主要包括前列腺癌、膀胱癌以及肾细胞癌。主要对OTUB1与泌尿系肿瘤相关性的研究进展进行综述,表明OTUB1在泌尿系肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,并进一步探索靶向OTUB1治疗泌尿系统肿瘤的可能性。