干细胞在卵巢组织冷冻与移植中应用的研究进展

干细胞在血液系统疾病中的临床应用已经较为成熟,并进行了广泛推广,例如骨髓造血干细胞移植治疗白血病等,挽救了很多白血病患者的生命。然而,干细胞在生殖医学领域仍处于较慢的初期发展阶段。虽然相对而言,干细胞在卵巢功能障碍的研究已经很多,但在卵巢冷冻与移植上有很多尚未开展且值得研究的方向。本文将从干细胞在卵巢组织冷冻保存和移植方面的最新研究进展进行综述,重点介绍不同来源干细胞改善损伤性卵泡存活的进展及其机制,以及在不孕症治疗和生育能力保存尤其是在卵巢冷冻移植方面的潜在临床应用价值。

中国卵巢组织冻存与移植后自然妊娠第2例报道

我国首个卵巢组织冻存库由首都医科大学附属北京妇产医院阮祥燕教授团队创建,该团队先后于2016年完成中国首例卵巢组织冻存与移植,2020年完成中国首例卵巢组织冻存与移植后妊娠,2021年报道中国首例卵巢组织冻存与移植后活产,至2024年已成功开展26例卵巢组织冻存与移植,移植患者全部恢复了卵巢功能并长期维持。本文报道再生障碍性贫血获得临床妊娠的患者,为中国第2例卵巢组织冻存与移植后妊娠病例。患者于外院经骨髓穿刺诊断为再生障碍性贫血(重型),2017年因药物、输血治疗效果欠佳,拟行异基因造血干细胞移植,因未婚未育,强烈要求生育力与卵巢功能保护,首都医科大学附属北京妇产医院对其进行综合评估后决定实施卵巢组织冻存,在全身麻醉下行腹腔镜下右侧卵巢切除术,手术顺利,取下的卵巢组织转运至首都医科大学附属北京妇产医院卵巢组织冻存库保存。造血干细胞移植后,患者于2018年行卵巢组织复苏与移植手术,手术顺利,无并发症发生。患者卵巢组织冻存与移植5年后结婚,卵巢功能维持良好,并于备孕4个月后自然妊娠,末次月经时间为2023年12月18日。

中国第2例冻存卵巢组织自体移植5年后活产报道

卵巢组织冻存与移植(ovarian tissue cryopreservation and transplantation,OTCT)指在患者卵巢功能严重受损前,将部分卵巢组织经手术取出,采用低温生物学方法将其冷冻保存,待原发病治疗结束后再将冻存的卵巢组织复苏、自体移植,恢复卵巢的生殖与内分泌功能,有效防治医源性POI[1]。OTCT可一次性保存成千上万枚卵母细胞;无需促排卵,不会延误原发病的治疗;不仅保护生育能力,还可保存卵巢内分泌功能;是亟需原发病治疗的患者及青春期前女童唯一的生育力保护方法[2-5]。

卵巢组织冻存与移植技术新进展

卵巢组织冻存与移植技术不仅保护女性生育力,还可保存卵巢内分泌功能,有效防治医源性早发性卵巢功能不全,尤其适用于青春期前女童与亟需原发病治疗的女性。卵巢组织冻存的有效性与安全性已得到了广泛验证,目前的临床金标准为慢速冻存,而玻璃化冻存仅适用于研究。尽管该技术近年来发展迅速,但仍面临超低温冻存损伤、冷冻保护剂毒性、卵泡储备量的评估、冻存与移植的安全性等问题。本文针对以上问题的研究进展进行综述。

卵巢组织冻存与移植,守护女性生育力

在人类探索生育奥秘的历程中,卵巢组织冻存与移植技术已成为守护女性生育力的坚实堡垒。正如冰川中的生命在极寒中等待春天的到来,卵巢组织冻存与移植技术为那些因种种原因而丧失生育能力的女性重新点燃了生育的希望。这项技术不仅是对女性生育力的捍卫,而且是对女性生育力保护的坚定承诺。冻存技术不简单简单来说,卵巢组织冻存与移植就是一场有关人体的“农耕作业”。农耕作业讲究气候、时间等,以便于劳作。人体内的卵巢就好比含有种子的果实,如果能够保存好这个果实,那么果实里的种子在等到合适的时机后被种植回人体内,就会重新生长。

兔卵巢组织冷冻移植后卵母细胞成熟及受精发育能力的研究

目的探讨兔卵巢组织冷冻复苏后移植对卵母细胞生长、成熟、受精发育潜能的影响。方法25只性成熟新西兰雌兔随机分为对照组(5只)、新鲜移植组(10只)及冷冻复苏移植组(10只),卵巢组织均自体多点移植于子宫系膜内。卵巢移植90d后对兔联合使用促排卵、体外成熟培养和卵泡浆内单精子注射技术,观察卵子的成熟情况以及体内和体外成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果新鲜移植组和冷冻复苏移植组获卵数均低于对照组(P<0.05),而两移植组间获卵数差异无显著性;各组未成熟卵子所占比率以及未成熟卵子体外成熟后的成熟率间均无显著性差异;各组间体内成熟卵子、体外培养成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率的差异不明显;各组内体内成熟卵子与体外培养成熟卵子相比受精率、卵裂率间无显著性差异,但体外培养成熟卵子囊胚形成率明显低于体内成熟卵子(P<0.05)。结论兔卵巢经冷冻复苏自体移植后,其卵泡能够重新生长发育;通过体外成熟和受精技术,体内和体外成熟卵子均可产生正常的胚胎。提示卵巢组织冻融移植结合辅助生殖技术可作为一种生育力保存的方法。

大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点。目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组。4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理。冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧。移植后30d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查。结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%。二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡。受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等。4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型。移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络。移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似。4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05)。结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡。冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善。

两种冷冻方法冻融人卵巢组织异种移植后血管生成素-2表达变化的比较

目的通过检测血管生成素-2(Ang-2)的表达,探讨两种冷冻方法对人卵巢组织的冻融及异种移植后的效果。方法共收集16例人卵巢组织标本,每例分成2份,其中1份应用程序化冷冻方法进行冷冻,另1份应用玻璃化冷冻方法进行冷冻。解冻后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下。32只SCID裸鼠随机分为两组:A组16只,移植以程序化方法冷冻复苏的人卵巢组织;B组16只,移植以玻璃化方法冷冻复苏的人卵巢组织。解冻后及移植6周后观察两组卵巢组织中始基卵泡的存活及颗粒细胞Ang-2的表达情况。结果解冻后,A组Ang-2的阳性率明显高于B组(P<0.05),始基卵泡正常率两组相比差别不明显(P>0.05)。移植后,始基卵泡正常率及Ang-2的阳性率两组相比均无明显差别(P>0.05)。解冻后和移植后相比,两组的Ang-2阳性率及A组的始基卵泡正常率差别均不明显(P>0.05),B组移植后始基卵泡正常率明显低于解冻后(P<0.05)。结论与玻璃化冷冻相比,程序化冷冻对人卵巢组织始基卵泡颗粒细胞Ang-2的表达影响更小。将解冻后的人卵巢组织进行异种移植不影响Ang-2的表达。

人卵巢组织冷冻及异种移植对始基卵泡凋亡的影响

目的:通过检测始基卵泡凋亡率的改变来探讨2种冷冻方法对人卵巢组织的冻融及异种移植后的效果。方法:共收集16例人卵巢组织标本,每例分成2份,其中1份应用程序化冷冻方法进行冷冻,另一份应用玻璃化冷冻方法进行冷冻。解冻后分别移植到去卵巢的雌性SCID裸鼠颈部皮下。32只裸鼠随机分为2组,程序化冷冻组移植以程序化方法冷冻复苏的人卵巢组织;玻璃化冷冻组移植以玻璃化方法冷冻复苏的人卵巢组织。解冻后及移植6周后观察2组卵巢组织中始基卵泡的形态学改变及凋亡情况。结果:解冻后,程序化冷冻组始基卵泡凋亡率明显低于玻璃化冷冻组,始基卵泡正常率2组相比无明显差别。移植后,始基卵泡正常率及凋亡率2组相比均无明显差别。无论是程序化冷冻组还是玻璃化冷冻组,解冻后和移植后相比,始基卵泡正常率及凋亡率均无明显差别。结论:与玻璃化冷冻相比,程序化冷冻更有利于人卵巢组织始基卵泡的存活。将解冻后的人卵巢组织进行异种移植不影响始基卵泡的凋亡。

卵巢组织冷冻保存和移植的研究进展

卵巢组织冷冻保存和移植技术为许多年轻女性患者提供了一种新的保存生殖及内分泌功能的方法。本文就卵巢组织冷冻和移植的动物及临床研究进展进行综述。

卵巢组织冷冻复苏及移植

绝大多数进行生育力保存的人群来自于癌症患者，因为此后的放化疗过程可能会损伤这些患者的性腺功能，从而造成不育。其他疾病的治疗，如自身免疫性疾病（如红斑狼疮）和骨髓增生异常综合征也会对生殖细胞和组织造成损伤。

移植卵巢组织卵泡损伤机制及保护策略

卵巢组织冷冻保存及移植是青春期前女性及不能延迟放疗或化疗的恶性肿瘤患者唯一的生育力保存手段。目前,卵巢组织冷冻保存及移植效率仍低,卵巢组织移植后面临缺血缺氧风险,始基卵泡的异常激活和血供恢复后的缺血-再灌注损伤也造成移植卵巢组织卵泡大量损失。大量研究尝试通过添加某些药物减少卵泡在冷冻及移植过程中所受的损伤,延长卵巢移植患者内分泌功能及生殖功能持续的时间:如添加褪黑素、N-乙酰半胱氨酸、促红细胞生成素或其他抗氧化剂以减轻氧化应激,添加不同来源的间充质干细胞、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、血管生成素2、促性腺激素以促进血运重建,添加抗米勒管激素、雷帕霉素以减少始基卵泡异常激活。本文重点阐述了卵巢组织移植后卵泡损伤的主要机制及减少移植卵巢组织卵泡损伤的方法,以期为提高卵巢组织移植效率提供参考。

卵巢组织冷冻保存及移植技术进展

背景:生育力保存技术可以为因肿瘤或肿瘤治疗相关原因失去卵巢功能的女性患者提供恢复内分泌功能和生殖功能的机会。目的:阐述了卵巢组织玻璃化冷冻以及冻融卵巢组织自体移植等技术在重建卵巢功能方面取得的进展和存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1999-01/2011-12关于卵巢早衰的文章,在标题和摘要中以"卵巢早衰,玻璃化冷冻,卵巢移植"或"premature ovarian failure,vitrification freeze,ovary transplantation"为检索词进行检索。最终选择关于卵巢玻璃化冷冻和自体移植的40篇文献进行综述。结果与结论:对于重建肿瘤相关性卵巢早衰患者卵巢功能,卵巢组织玻璃化冷冻保存和自体原位移植具有广泛临床应用前景。不仅能够恢复自然生育力、生殖功能及内分泌功能,而且不存在免疫排斥,也没有伦理学争议,安全方便。可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻移植技术将越发成熟,为更多的女性肿瘤患者保存生育力和内分泌功能带来福音。

卵巢组织冷冻保存和移植的研究进展

卵巢组织冷冻移植作为育龄女性癌症患者保存生育力和恢复内分泌功能的治疗方案之一,发挥着越来越重要的作用,它甚至是青春期女性患者的唯一选择。但是,卵巢组织冷冻移植比较复杂,其过程包括卵巢组织的获取、卵巢组织的冷冻复苏、冻融后的活力检测、复苏后再移植等步骤,而每个步骤又有诸多影响因素,都会影响冷冻保存和移植的效果。本文对卵巢组织冷冻保存和移植的各主要环节进行了论述,并阐述了该技术现存的主要问题及该领域的新进展。

卵巢组织的冷冻和移植研究进展

卵巢组织冷冻技术可以为患有良、恶性肿瘤的女性提供生育保险 ,已经成为生殖医学领域的新型技术和研究的热点之一。冷冻卵巢组织的移植途径有异体移植、异位自体移植、原位移植和卵泡的体外成熟培养 ,其应用前景广阔。

单合子双胎间部分卵巢组织原位移植及冷冻保存

【目的】总结1例单合子双胎间卵巢组织原位移植手术的体会。【方法】卵巢组织受者:单合子双胎之一(姐姐)诊断"卵巢早衰",卵巢组织供者:双胎之二(妹妹)卵巢储备正常,育有一子。2012年2月8日于中山大学附属第六医院生殖医学研究中心分别进行供者卵巢部分组织获取术及卵巢早衰的受者卵巢组织原位移植术。【结果】供者术后月经规则,受者在移植术后108 d恢复月经,术后受者血清卵泡生成素(FSH)和黄体生成素(LH)水平逐渐下降。【结论】异体卵巢组织原位移植可以帮助卵巢早衰患者恢复内分泌功能,并可能恢复其生殖功能。

卵巢组织冷冻保存和移植的历史、现状及前景

精子库的建立为男性生殖提供了保障 ,人们就试图寻找为女性提供生殖保障的方法。卵巢冷冻保存为一种趋势 ,现就卵巢组织冷冻、移植的历史、研究进展、方法、影响因素及关注问题和有关对策进行综述。

卵巢组织冷冻和移植研究

卵巢是维持女性生殖和内分泌功能的重要器官，对于那些由于卵巢早衰、卵巢先天发育不良或缺如、病理性卵巢切除、恶性肿瘤放射治疗、化学药物治疗（放、化疗）等原因失去卵巢功能的妇女，生育力的保存和卵巢内分泌功能的恢复显得尤为重要。目前对生育力保存可选择卵细胞冷冻保存、胚胎冷冻保存、卵巢组织冷冻保存。由于卵细胞对低温异常敏感、

白藜芦醇对鸭卵巢组织冻融后移植效果的影响

为探究不同浓度白藜芦醇对鸭卵巢组织玻璃化冷冻以及在鸭肾脏被膜下移植过程中的影响,试验分为5组(Con组:新鲜卵巢组织;0组、2.5组、5组、10组:0、2.5、5、10 mmol/L白藜芦醇),采用荧光定量PCR技术,检测玻璃化冷冻复苏后、复苏后鸭肾脏被膜下移植第3天和第9天卵巢组织中MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA表达情况;HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态。结果显示:与Con组相比,玻璃化冷冻显著降低卵巢组织MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。与0组相比,10 mmol/L白藜芦醇能显著增加玻璃化冷冻卵巢MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。卵巢移植3 d后,与0组相比,白藜芦醇能显著增加10组MST1、YAP1、VEGF,2.5组LATS1、YAP1,5组VEGF mRNA相对表达量(P<0.05);移植9 d后,白藜芦醇能显著降低MST1和LATS1 mRNA相对表达量(P<0.05)和显著升高YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。白藜芦醇能显著增加冻融卵巢移植3 d和9 d的5组和10组正常卵泡率(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇能提高鸭卵巢冻融移植后的卵泡存活率,以10 mmol/L为试验的最佳浓度。

恶性肿瘤在冷冻复苏后的卵巢组织移植中的转移风险研究进展

1960年,Parrott DM等^（[1]）将冷冻复苏后的小鼠卵巢进行移植并获得妊娠。卵巢组织冷冻是指冷冻保存卵巢的皮质组织或卵巢组织,目前多采用卵巢皮质组织。这种方法可以保存大量的原始卵泡,适用于无法进行超促排卵的癌症患者和青春期前癌症患者进行生育力保存。迄今为止,卵巢组织冷冻技术已经导致了24例正常分娩^（[2]）,日后癌症患者可能有望在癌症治愈后移植冷冻复苏后的自体卵巢组织恢复生育能力。