黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究

目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增殖的影响。10-5mol/L丙酸睾丸酮、10μmol/L C2-神经酰胺作用大鼠卵巢颗粒细胞24 h诱导PCOS大鼠颗粒细胞自噬模型,CCK8检测细胞增殖情况;透射电镜观察自噬体情况;免疫印迹法检测细胞中Sirt1、Fox O1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示,FSHR蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的平均阳性表达量93.18%>90%,可进行接下来实验。0、100、200、400μg/mL APS处理正常卵巢颗粒细胞,在贴壁0、24 h比较,细胞OD450差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组细胞核附近出现大量自噬小体,双层、单层膜包裹胞质形成封闭、圆形结构,部分自噬小体内膜溶解,自噬小体周围可见单层膜结构包裹着一些被降解的胞浆、类似自噬小体结构;100μg/mL APS组与模型组细胞结构类似,随着APS剂量的升高,自噬小体数量减少,在400μg/m L APS组时细胞正常。正常组、模型组、100、200、400μg/mL APS组在细胞贴壁0 h时,细胞OD450差异无统计学意义(P>0.05)。细胞贴壁24 h,与正常组相比,模型组细胞OD450降低(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,100、200、400μg/mL APS组细胞OD450升高(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平降低(P<0.05)。结论APS可以抑制PCOS大鼠颗粒细胞自噬,可能是通过抑制自噬通路Sirt1/FoxO1实现的。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨益母草碱(Leo)调节RhoA/ROCK信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(GCs)自噬和凋亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为正常组(NC组)和模型组(PCOS组),分离卵巢GCs,H-E染色观察其形态;FSHR免疫荧光鉴定PCOS大鼠卵巢GCs。不同浓度的Leo处理PCOS大鼠卵巢GCs,CCK-8法检测细胞增殖并筛选最佳药物浓度。将PCOS大鼠GCs随机分为模型组(PCOS组)、益母草碱低剂量组(Leo-L组)、益母草碱中剂量组(Leo-M组)、益母草碱高剂量组(Leo-H组)、益母草碱高剂量组+RhoA/ROCK激活剂组(Leo+LPA组),流式细胞术检测细胞凋亡率;透射电子显微镜检测细胞自噬;Western blot检测Bax、Cleaved-Caspase-3、Bcl-2、Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果 与NC组比较,PCOS组可见大小不等的囊性卵泡,且卵巢GCs数增多(P<0.05);PCOS大鼠FSHR阳性率达92.13%,即成功分离卵巢GCs;Leo处理PCOS卵巢GCs后,细胞凋亡率、Bax、Cleaved-Caspase-3、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达及MDA含量显著降低,细胞OD值、Bcl-2蛋白表达及GSH、SOD、GSH-PX含量显著增加,且呈浓度依赖性(P<0.05);LPA逆转了Leo对PCOS大鼠卵巢GCs凋亡和自噬的抑制作用。结论 Leo通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制PCOS大鼠中GCs凋亡和自噬。