重庆市输入性卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种分子特征分析

目的为了解重庆市输入性卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种的分子特征,对卵形疟病例的卵形疟原虫Cox1、Cytb、Tra、Dhfr、K13基因位点多态性进行分析。方法回顾性分析2013-2023年确诊的卵形疟原虫感染患者血样,PCR扩增卵形疟原虫Cox1、Cytb、Tra、Dhfr、K13基因的部分片段,利用测序技术及生物信息学方法区分2个亚种,分析卵形疟curtisi和wallikeri亚种核苷酸多态性位点以及氨基酸突变位点等多态性。结果以ssrRNA区分26例卵形疟(curtisi亚种14例;wallikeri亚种12例)与Cox1、Cytb、Tra基因分类结果一致。Cox1基因在145、153等13个位点呈现二态性,仅在528、862位点氨基酸M176I、I288V变异,单例N337H变异。Cytb基因亚种间发现12个位点发生碱基置换,仅248号氨基酸M248I突变。Tra基因发现49个核苷酸二态性位点,致18个氨基酸突变,curtisi型样本中poc1型比poc2型多PINTINPINTIN和TITPIS氨基酸单元。Dhfr基因突变率较高,25%样本出现S58R突变。K13基因亚种内不呈单态,1例样本为杂合。结论确认了重庆市输入性卵形疟在Cox1、Cytb、Tra、Dhfr、K13基因片段中curtisi和wallikeri亚种间的二态性位点、突变位点,丰富了输入性卵形疟原虫两个亚种基因多态性信息。

8例输入性卵形疟不同亚型的鉴定

目的鉴定并分析境外输入性卵形疟的2种亚型及其感染的临床特点。方法对在北京友谊医院2015年1月—2017年3月确诊的8例输入性卵形疟患者进行虫种亚型的鉴定,并分析比较不同亚型感染引起的实验室指标的差异。结果通过对8例患者进行巢氏PCR鉴定及序列分析,结果显示卵形疟curtisi及卵形疟wallikeri亚型各4例;与curtisi亚型感染相比,wallikeri亚型感染后引起血小板下降程度更低,乳酸脱氢酶及TBIL的上升程度更高。结论输入性卵形疟的亚型鉴定须通过巢氏PCR鉴定完成,wallikeri亚型感染导致的器官损害更为严重。

吉林省延边地区一例输入性卵形疟复发病例亚型鉴定及基因特征分析

为确诊一例输入性卵形疟复发病例并鉴定其亚型,采集已开始服用青蒿素哌喹片的输入性卵形疟复发病例患者静脉血,通过薄血膜涂片吉姆萨染色镜检查看其形态特征,采用巢式PCR方法扩增其18S rRNA特异性基因,鉴定其疟原虫种类,再通过基因测序进行同源性比对和遗传进化分析。薄血膜涂片吉姆萨染色镜检结果显示,该患者血液红细胞中疟原虫已开始萎缩破裂,形态不典型,巢式PCR检测为卵形疟原虫强阳性。基因序列分析显示其序列与NCBI GenBank卵形疟Curtisi亚型序列同源性达99%。

福建省2009—2019年输入性卵形疟及亚型的回顾性分析

目的分析福建省2009—2019年输入性卵形疟及亚型curtisi和wallikeri的流行分布,加强防治措施降低危害。方法收集聚合酶链式反应(PCR)确诊的80例输入性卵形疟及个案信息资料,回顾性分析输入性卵形疟及亚型的流行分布。结果福建省2009—2019年卵形疟检出率呈增高趋势(趋势χ^(2)=14.07,P<0.01),年均检出率8.2%(80/978),2015年检出率最高,达18.6%;80例卵形疟中,其中curtisi亚型28例(35.0%)、wallikeri亚型37例(46.2%)、二者混合感染15例(18.8%);感染来源地区分布:来自西非者32例(40.0%),其中curtisi16例、wallikeri 11例、混合感染5例;来自中非者33例(41.3%),其中curtisi 9例、wallikeri 18例、混合感染6例;来自东非者15例(18.7%),其中curtisi 3例、wallikeri8例、混合感染4例;复发率为5.0%(4/80),从国内首次发作到复发,4个病例分别间隔22 d、35 d、180 d和28 d。结论福建省2009—2019年输入性卵形疟呈增高趋势,两个亚型的地理分布散在、广泛,无明显区别。

江西口岸首例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染的PCR鉴定及序列分析

目的对江西口岸1例输入性疟疾病例的血样本进行检测、确认。方法利用普通PCR检测全血样本中疟原虫18S r RNA基因,将得到的测序结果在NCBI数据库进行比对,并结合吉姆萨染色镜检、胶体金快速检测和荧光定量PCR加以验证。结果血涂片镜检并未发现疟原虫,但胶体金快速检测结果为阳性。普通PCR扩增到18S r RNA基因特异性片段,卵形疟原虫特异性引物扩增到阳性条带,而恶性疟、间日疟和三日疟原虫特异性引物没有扩增到目的条带。用卵形疟不同亚型引物特异性扩增发现卵形疟原虫wallikeri亚种阳性,序列与卵形疟原虫wallikeri亚种(Gen Bank号:KF219564.1和KF696359.1)18S r RNA同源性达99%。荧光定量PCR检测亦确认为卵形疟阳性。结论该病例确认为江西口岸首例输入性卵形疟wallikeri亚种感染。

河南省输入性卵形疟原虫2个亚种富色氨酸抗原基因的多态性分析

目的分析河南省2015年输入性卵形疟原虫富色氨酸抗原(Plasmodium ovale tryptophan-rich antigen,Po TRA)基因序列。方法采集河南省2015年22例输入性卵形疟患者的血样,收集患者相关信息。提取血样DNA,用巢式PCR方法扩增Po TRA基因,连接至p MD18-T载体,提取质粒进行测序,在Gen Bank中进行同源性比对,判断卵形疟原虫的亚种,并对其基因长度及种类进行分析。对Po TRA基因的氨基酸序列进行比对,分析氨基酸的差异。用邻接法构建系统进化树,分析样本间的亲缘关系。结果 22例卵形疟中,8例为卵形疟原虫wallikeri亚种(P.ovale wallikeri),占36.4%,Po TRA基因长度有245和299 bp 2种类型,以245 bp为主;14例为卵形疟原虫curtisi亚种(P.ovale curtisi),占63.6%,Po TRA基因长度有299、317和335 bp等3种类型,以299 bp为主。氨基酸序列比对显示,wallikeri亚种的2种基因类型相差2个氨基酸单元(MANPINMANPIN和AITPIN),curtisi亚种的3种基因类型间相差2个氨基酸单元(TITPIS和TINPIN)。系统进化树显示,22例样本分为curtisi和wallikeri 2个亚群,其中curtisi亚群又分为2个亚支,299 bp的样本在同一亚支内,317和335 bp的样本在另一亚支内,亲缘关系更近。结论 2015年河南省输入性卵形疟有curtisi和wallikeri 2个亚种,其Po TRA基因存在多态性,curtisi亚种有3种基因类型,wallikeri亚种有2种基因类型。

基于线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因鉴定贵州省首例输入性卵形疟病例

提取贵州省首例镜检诊断为输入性卵形疟病例的血样DNA,以疟原虫的核糖体RNA小亚基(SSU r RNA)和线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因(cox3)为靶标,分别设计属、种特异性引物及种特异性引物, PCR扩增、测序,比较2种引物对疟原虫种类PCR鉴定的特异性。以卵形疟原虫wallikeri亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712053.1)和curtisi亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712052.1)为模板,应用DNAMAN V6软件对扩增序列进行Blast比对。利用Mega 7.0.26软件,采用邻接法,基于疟原虫线粒体cox3基因DNA序列构建系统进化树。PCR结果显示,基于疟原虫SSU r RNA属、种特异性引物扩增,仅获得1 200 bp的属特异性条带,未出现种特异性条带。基于疟原虫cox3种特异性引物扩增,可获得880 bp的目的条带。Blast比对结果显示,PCR扩增获得的cox3基因序列与卵形疟原虫wallikeri亚种和curtisi亚种的序列一致度为99.4%和97.4%。

贵州省首例输入性卵形疟病例的鉴定

目的对1例输入性疟疾病例进行鉴定。方法采集病例外周血制作滤纸血样和血涂片。血涂片染色后镜检,同时进行疟疾快速诊断试剂盒(RDT)检测,滤纸血样进行PCR,PCR扩增片段测序后在GenBank中进行Blast分析。结果RDT检测提示非恶性疟的疟原虫阳性,血涂片镜检可见卵形疟原虫。PCR扩增出大小为880 bp的卵形疟特异条带,Blast分析显示与卵形疟原虫wallikeri亚种的cox3部分基因序列同源性为99.4%。结论依据RDT、镜检、PCR和序列分析等实验室检测结果,结合其流行病学资料,该例输入性疟疾病例确诊为贵州省首次由境外输入的卵形疟病例,且感染的疟原虫虫种是卵形疟原虫wallikeri亚种。

2015年重庆市输入性疟疾病例特征分析

目的分析重庆市2015年输入性疟疾病例实验室诊断结果及流行病学特征。方法按照《重庆市疟疾诊断参比实验室工作手册》操作规程,采用涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条(RDT)及巢式PCR对该市输入性病例进行实验室诊断分型,并从寄生虫病防治信息管理系统收集疟疾个案调查资料进行分析。结果 2015年重庆市共报告境外输入性疟疾病例31例,其中间日疟2例(6.45%)、恶性疟23例(74.19%)、卵形疟5例(16.13%)、三日疟1例(3.22%),5例卵形疟中3例经实验室诊断为卵形疟wallikeri亚型。30例(96.77%)输入自非洲,1例(3.33%)输入自东南亚;30例为男性,1例为女性,年龄23~61岁,病例分布无明显季节性。病例从发病到初次就诊时间、从初次就诊到确诊时间的中位数均为2 d,初次就诊单位多为县级单位,确诊单位多为省级单位。结论重庆市2015年疟疾病例均为输入性,未发现本地病例,仍保持消除疟疾状态,但仍要加强输入性疟疾病例的管理及病原学监测工作,并加强相关疟疾防治机构医务人员的防治能力培训。