平衡温度、保护剂及时间对卵母细胞减数分裂能力的影响

以小鼠为动物模型 ,研究延长小鼠卵母细胞在含有冷冻保护剂的液体中的平衡时间 ,并且降低或提高平衡时的温度是否能影响卵母细胞完成减数分裂的能力。结果表明 :1)无论是否有DMSO ,0℃平衡 15min或 6 0min后卵母细胞的激活率没有明显差异 ;2 ) 1 5mol/LDMSO液中 ,0℃平衡 15min和 6 0min后卵母细胞激活率低于对照组 ;3) 0℃平衡 15min和 6 0min后卵母细胞的激活率与对照组没有差异 ;4 ) 1 5mol/L的DMSO液体中 2 4℃平衡 15min和 6 0min后卵母细胞的激活率显著低于对照组 ;5 )无论是否添加DMSO ,无论是 2 4℃平衡还是 0℃平衡均没有影响激活卵母细胞的第二极体排出。说明卵母细胞低温平衡时添加DMSO对卵母细胞的激活有一定的影响。

PLCγ1在小鼠卵母细胞减数分裂恢复中的作用

目的探究磷脂酶(PLC)Cγ1在卵母细胞减数分裂恢复中的作用及机制,进一步阐明卵母细胞成熟的分子机理,为与相关的人体临床应用提供理论基础。方法利用Real-time PCR检测PLC不同亚型在颗粒细胞与卵丘细胞中的表达情况,构建体外卵泡培养模型及COC培养模型研究PLCγ1特异抑制剂U73122对LH及EGF诱导的减数分裂恢复的影响,利用钙离子荧光探针Fluo 3-AM检测胞内钙离子水平变化,酶联免疫法检测胞内cGMP水平变化,利用Real-time PCR、Western blot以及免疫组化检测不同亚型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP 3R)的表达变化情况。结果研究表明,颗粒细胞与卵丘细胞中Plcγ1 mRNA的表达均显著高于其它亚型(P<0.05),U73122能够有效抑制LH和EGF诱导的卵母细胞减数分裂恢复(P<0.05)以及EGF诱导的卵丘细胞内钙离子水平升高(P<0.05),U73122还显著逆转了EGF介导的胞内cGMP水平下降(P<0.05),此外,研究还发现在颗粒细胞,卵丘细胞与卵母细胞中Itpr1 mRNA的表达量显著高于其它亚型(P<0.05),Western blot与免疫组化的结果也表明IP 3R1在三种细胞中均有表达。结论LH-EGFR信号通过PLCγ1-IP 3R1升高胞内钙离子水平诱导卵母细胞减数分裂恢复。

钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在小鼠卵母细胞减数分裂恢复中的作用

目的:探究钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK-Ⅱ)在小鼠卵母细胞减数分裂恢复中的作用。方法:构建卵丘卵母细胞复合物(COCs)体外培养模型,研究CaMK-Ⅱ特异抑制剂KN-93及AIP对EGF诱导的减数分裂恢复及卵丘扩展的影响,利用酶联免疫法检测胞内cGMP水平变化。结果:CaMK-Ⅱ抑制剂KN-93及AIP能够有效抑制EGF诱导的减数分裂恢复(P<0.05);KN-93能够抑制EGF诱导的卵丘扩展;KN-93及AIP降低COCs内cGMP的含量(P<0.05)。结论:EGF通过CaMK-Ⅱ诱导小鼠卵母细胞恢复减数分裂。

卵母细胞减数分裂阻滞与促黄体素诱导减数分裂恢复的分子机制研究进展

哺乳动物排卵前,卵泡中的卵母细胞一直被阻滞在减数分裂I前期的双线期,卵泡壁层颗粒细胞分泌的C型利尿钠肽(C-type natriuretic peptide, NPPC)与表达在卵丘细胞中的同源利尿钠肽受体2 (natriuretic peptide receptor 2, NPR2)结合,产生的cGMP是维持减数分裂阻滞的关键因子。另外,cAMP、缝隙连接、肌苷单磷酸脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)等多种重要调控因子也参与了减数分裂阻滞。当垂体分泌的促黄体素(luteinizing hormone, LH)峰到来时,LH通过多种调控方式迅速降低胞内cGMP水平,使卵母细胞恢复减数分裂。本文对维持卵母细胞减数分裂I阻滞以及LH诱导减数分裂恢复的机制研究进展进行综述,为相关生殖疾病的预防和诊治提供思路。

IP3R在LH-EGFR诱导小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用

目的:探究1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)在促黄体素-表皮生长因子受体(LH-EGFR)信号诱导卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用及机制。方法:构建小鼠卵丘-卵母细胞复合物(COCs)体外培养模型以及卵泡培养模型,研究IP3R特异性抑制剂2-氨乙基二苯基硼酸脂(2-APB)及heparin对LH/EGF诱导减数分裂恢复以及EGF诱导卵丘扩展的影响,利用real-time PCR技术检测卵丘扩展因子的表达,钙离子荧光探针Fluo 3-AM检测胞内钙离子水平变化,酶联免疫法检测胞内cGMP水平变化。结果:IP3R抑制剂2-APB和heparin能够有效抑制EGF诱导的减数分裂恢复(P<0.05),同时显著降低了COCs内cGMP的含量(P<0.05);2-APB和Heparin还能够抑制EGF诱导的卵丘扩展,同时显著降低卵丘扩展因子的mRNA表达水平(P<0.05);激活IP3R可升高细胞内钙离子水平,而2-APB及heparin能够有效降低EGF升高的卵丘细胞内钙离子水平(P<0.05);利用卵泡培养模型进一步的研究表明,2-APB及heparin同样显著抑制了LH诱导的卵母细胞减数分裂恢复(P<0.05)。结论:LH-EGFR信号通路通过IP3R升高卵丘细胞内钙离子水平,诱导卵母细胞第一次减数分裂的恢复。

卵母细胞成熟过程中蛋白因子的表达和作用

近年来,随着辅助生育技术的日益发展,卵细胞成熟的分子调控机制愈来愈受到人们的重视,其中成熟刺激因子(MPF)、丝裂原激活蛋白激酶家族(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、cAMP/蛋白激酶A(cAMP/PKA)等蛋白因子在卵母细胞成熟过程起着重要的作用。现就这些因子在卵母细胞成熟过程中的表达和调控研究进展作一综述。

NHE1生物学功能的研究进展

钠氢交换蛋白1(NHE1)是哺乳动物细胞中广泛表达的整合膜蛋白,主要通过交换细胞内的H^(+)与细胞外的Na^(+)进行电中性交换去除质子,调节细胞内的pH。在已知的10种亚型中,NHE1是表达最广泛的亚型,它定位于质膜,参与很多生理过程,如细胞内pH(pHi)、细胞体积稳态和维持细胞骨架结构,并且对细胞生长、增殖、分化、细胞迁移和凋亡等发挥关键作用。Na^(+)/H^(+)交换器NHE1和HCO_(3)^(-)/Cl^(-)交换器AE2偶联作用,共同调节哺乳动物细胞体积减少。在医学方面,对NHE1的研究主要是在癌症、肿瘤细胞、人的心肌梗死及心血管疾病中的调控作用。本文对NHE1调节细胞内pH、细胞体积及细胞骨架组装的分子机制和卵母细胞减数分裂过程相关研究进行综述,以期为NHE1蛋白相关调控机制研究奠定基础。