卵子玻璃化冻融后行卵母细胞胞质内单精子注射51例的临床结局

人卵母细胞的冷冻保存目前是女性生育力保存的最有前景的途径，卵子冻融技术可为年轻肿瘤患者保留生育能力，为延迟生育年龄女性提供优生优育保障．卵子库的建立为卵巢早衰患者、卵巢功能不全或遗传疾病妇女获得赠卵诞生新生命带来了希望。目前胚胎冷冻技术已经不断完善，然而由于卵母细胞自身特殊的结构特征极易受冷冻损伤，所以卵子冷冻技术相对进展缓慢Ⅲ。我院生殖医学中心将玻璃化冷冻技术应用于人卵母细胞冻存，取得了较好的临床效果，现报告如下。

猪卵母细胞胞质内单精子注射影响因素的研究

探讨了猪卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)的有关影响因素。结果表明:在本实验室条件下,在体外成熟液中添加30 ng/mL的EGF可以明显促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);当精子操作液中PVP浓度为20%时可以显著促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);操作液中添加5μg/mL的CB对ICSI胚胎的发育没有显著影响。

影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素

本试验探讨了成熟培养液中不同添加物、精子的处理方法及胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)胚胎激活方法3个方面,研究了影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素。结果表明,在体外成熟液中添加30ng/mL上表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)可以明显促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);精子的超声波处理和显微操作处理两种方法对ICSI受精卵发育的影响不明显(P>0.05);电激活比较适合于ICSI胚胎的激活。

卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射受精率和胚胎质量的关系

目的:了解人卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后正常受精率、卵裂率和优质胚胎率的关系。方法:选择行ICSI治疗的110个周期中1017枚人卵母细胞。将卵母细胞第一极体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种类型,采用3种来源的精子[手淫取精精子、附睾穿刺/睾丸活检(PESA/TESA)取精精子、冷冻精液精子]授精。ICSI操作后,了解各型第一极体卵母细胞受精率、卵裂率和优质胚胎率。结果:手淫取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和卵裂率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ型正常受精率低于Ⅰ和Ⅱ型,Ⅱ型卵裂率低于Ⅰ和Ⅲ型。PESA/TESA取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和取卵后第3天优质胚胎率比较,差异有统计学意义(χ2=8.488和6.789,P=0.044和0.034),Ⅰ型正常受精率低于Ⅱ和Ⅲ型,Ⅰ和Ⅲ型第3天优质胚胎率高于Ⅱ型。冷冻精液取精患者各指标比较,差异无统计学意义。结论:排除精子来源对受精的影响,正常受精可能和卵母细胞第一极体形态有关。

体质指数对多囊卵巢综合征患者卵胞质内单精子注射助孕结局的影响

目的探讨体质指数(BMI)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者卵胞质内单精子注射(ICSI)结局的影响。方法选择本院生殖中心行ICSI助孕的200例患者,包括82名PCOS患者和118名非PCOS患者,根据BMI分为非超重组(BMI<24 kg/m^(2))、超重组(BMI≥24 kg/m 2),PCOS患者分为非超重组47例和超重组35例,非PCOS患者分为非超重组81例和超重组37例。比较4组的一般临床特征、促性腺激素(Gn)用量、Gn时间、卵母细胞数量、成熟卵母细胞、受精率、胚胎质量、妊娠率、着床率及流产率等。结果PCOS组超重者和非超重者LH均高于非PCOS组;PCOS组和非PCOS组超重者BMI均高于非超重者(P<0.05)。与同组非超重亚组比较,超重亚组均Gn总量升高,日扳机E2水平下降(P<0.05)。Gn总量、日扳机E2水平PCOS超重组低于非PCOS超重组;PCOS非超重组低于非PCOS非超重组(P<0.05)。卵泡数、获卵数、成熟卵母细胞数PCOS非超重组高于非PCOS非超重组,PCOS超重组高于非PCOS超重组(P<0.05)。结论BMI的增加会增加促排卵过程中的促性腺激素使用剂量,多囊卵巢综合征患者卵泡数、获卵数高于无多囊卵巢综合征患者。

短时授精后行补救性卵母细胞胞质内单精子注射的临床应用

体外受精（IVF）作为常用的辅助生殖技术（ART），为广大不孕不育患者带来了福音。但不可否认的是，虽然常规IVF的受精率在60％～80％之间，但还是有部分病例会出现受精完全失败或受精率非常低的现象，给患者带来了很大的心理和经济压力，也导致了ART成功率的下降。为了避免这一问题的出现，国内外许多实验室都采取了一定的补救措施，如采用IVF和卵母细胞胞质内单精子注射（ICSI）分半的方法（即所获得的卵母细胞中50％行常规IVF，

MII期卵母细胞质量对卵胞浆内单精子注射结局的影响

目的 探讨MII期卵母细胞质量对卵胞浆内单精子注射 (ICSI)结局的影响。 方法 对ICSI中去除颗粒细胞后的MII期卵母细胞从第一极体、卵周隙和胞浆形态三者综合评价。按形态表现分为 5级 ,比较各级卵母细胞的受精率、优质胚胎率及种植率、临床妊娠率。 结果 I级卵母细胞受精率、优质胚胎率 ,明显高于其他各级含异常形态的卵母细胞 (P <0 .0 1) ;种植率和临床妊娠率也明显高于其他组 (P <0 .0 5 )。 结论 根据MII期卵母细胞的第一极体、卵周隙及胞浆形态进行的卵母细胞分级可作为胚胎移植时选择胚胎的依据。

辅助卵母细胞激活对经睾丸显微取精术获取活动精子患者卵胞浆单精子注射治疗结局的影响

【目的】探讨辅助卵母细胞激活(AOA)对经睾丸显微取精术(micro-TESE)成功获得活动精子患者行卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)治疗的实验室和临床结局影响。【方法】回顾性分析2018年至2020年间经micro-TESE已获取活动精子的非梗阻性无精子症男性患者167人,配偶经常规超排卵获得成熟卵母细胞行ICSI治疗230个周期,比较分析ICSI后是否经钙霉素行AOA处理的实验室和临床结局差异。【结果】激活组(G1)和未激活组(G2)的女方平均年龄(29.96±4.61vs.30.59±4.50,P=0.297),平均移植胚胎数(1.51±0.50 vs.1.56±0.50,P=0.154),移植囊胚数占比(24.37%vs.25.00%,P=0.915),差异均无统计学意义。G1组的总受精率和2PN受精率、首次移植妊娠率高于G2组(72.77%vs.67.59%,P=0.005;64.33%vs.60.22%,P=0.036;67.09%vs.50.00%,P=0.039)差异有统计学意义。G1组的无可用胚周期发生率(10.85%vs.9.90%,P=0.815)、D3可用胚率(41.29%vs.40.74%,P=0.817)、种植率(34.87%vs.32.05%,P=0.533)和临床妊娠率(43.87%vs.41.00%,P=0.651)均高于G2组,但差异无统计学意义;G1组的优胚率(13.44%vs.15.44%,P=0.265)和持续妊娠率(36.13%vs.40.00%,P=0.533)却低于G2组,组间差异无统计学意义。【结论】AOA处理可以提高经micro-TESE获取活动精子患者ICSI治疗的2PN受精率,有增加Day3可用胚胎数的趋势,但未改善胚胎质量和持续发育能力。对于使用活动micro-TESE精子行ICSI之后的AOA处理应仅用在精子形态畸形可疑受精低下的情况。

卵母细胞人工激活治疗卵质内单精子注射受精失败的临床应用及研究进展

卵质内单精子注射(ICSI)技术是治疗男性不育的有效手段,但是ICSI周期完全受精失败的发生率为2%~3%,同时男性精子严重畸形仅采用ICSI治疗仍无法正常受精。卵子激活障碍是导致受精失败的最主要因素,而卵子辅助激活可以人工诱发钙振荡激活卵子,促进正常受精。近年来卵母细胞人工激活在临床中的应用越来越广泛,成为治疗ICSI受精失败的主要辅助技术,但该技术临床应用的安全性仍存争议。本文就人卵子辅助激活技术在ICSI受精失败中的临床应用现状及其研究进展进行综述。

卵母细胞质内单精子注射技术的临床应用

应用卵母细胞质内单精子注射（ＩＯＳＳＩ）技术治疗严重男性因素所致不孕。自１９９７年７月至１９９８年６月，因男性严重少精、弱精及精子畸形来诊的不育夫妇２１对。女方采用药物超促排卵后，经阴道Ｂ超引导下取卵，应用ＩＯＳＳＩ技术获得体外受精卵及早期胚胎，然后行胚胎移植。２１个周期获得２１８个卵母细胞，其中１５０个成熟卵母细胞进行注射，１１６个（７７３％）成活，正常受精８９个，受精率为５９３％，卵裂５５个，卵裂率６１８％。共１８例患者获胚胎移植，４例临床妊娠，妊娠率为２２２％，流产１例，１例分娩于１９９８年１２月２日，为健康女婴。

时差成像胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数对卵胞浆内单精子显微注射的胚胎发育及临床结局的影响

目的使用时差成像(time-lapse imagining,TLI)胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)对卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的胚胎发育指标及临床结局的影响。方法选取2023年1月至6月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院辅助生殖科接受ICSI技术助孕的392对夫妇为研究对象,分为常规培养组284周期和TLI组108周期,再根据DFI≤15%、>15%~<30%、≥30%进一步分为正常组、临界组、异常组。比较各组的临床资料以及临床妊娠结局。统计学方法采用t检验、单因素方差分析、χ^(2)检验或Fisher确切概率法。结果6组的女方年龄、基础促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、身体质量指数(body mass index,BMI)及获卵数比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);男方精液常规指标中,浓度和正常形态率比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组的前向运动精子率分别为(46.5±16.5)%、(31.0±14.2)%、(14.8±8.4)%、(41.6±16.2)%、(32.5±14.4)%、(19.3±11.1)%,常规异常组和TLI异常组的前向运动精子率分别低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组和TLI临界组(P值均<0.05)。6组的卵裂率和囊胚形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TIL临界组和TLI异常组的受精率分别为(77.3±18.6)%、(78.6±17.1)%、(68.3±22.7)%、(77.4±14.5)%、(74.5±13.1)%、(63.1±25.4)%;常规异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组(P值均<0.05);TLI异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组、TLI临界组(P值均<0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组的妊娠率分别为57.4%(39/68)、54.5%(24/44)、27.3%(6/22),异常组低于正常组和临界组(P值均<0.05)。TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组3组的妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规组3组之间以及TLI 3组之间的早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论精子DFI值的升高会影响精子前向运动率,还会影响胚胎的受精率,高DFI精子进行ICSI助孕时使用TLI胚胎培养系统可以获得稳定的妊娠率。

卵母细胞质内单精子注射的胚胎形态与临床结局分析

目的 研究卵母细胞浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）技术治疗不育症的胚胎结局。方洁 对我中心１９９９年１月至２００１年 ３月进行的２９１个ＩＣＳＩ治疗周期（实验组）和３５２个常规体外受精（ＩＶＦ）周期（对照组）进行回顾性分析。结果（１）实验 组和对照组的受精率分别为７５．７％和７３．２％，差异不显著（Ｐ＞０．０５）；两组的卵溶解率分别为１０．６％和７．９％，实验组稍 高，但差异不显著（Ｐ＝０．２３８）。（２）实验组和对照组超过２０％碎片的胚胎率分别为４１．２％和３５．６％，两组的差异不显著 （Ｐ＝０．１３７）；两组的囊胚形成率分别为４１．３％和５５．８％，实验组显著低于对照组（Ｐ＜０．００１）。（３）实验组的临床妊娠率为 ３４．７％，略低于对照组３９．９％的结果，但差异不具显著性（Ｐ＝１．７４４）；实验组的宫内胚胎停育和自然流产率，略低于对照 组，但差异亦不具显著性（８．９％ ｖｓ１３．４％，Ｐ＝０．０７９）。结论 实验组可获得较稳定的临床妊娠，是治疗男性不育症等的一 种有效的手段。

Sr2＋辅助卵母细胞激活技术改善卵母细胞胞质内单精子注射受精失败患者的妊娠结局

卵母细胞胞质内单精子注射（intra-cytoplasmic sperm injection，ICSI）技术不受精子数量和形态影响，具有受精率高、多精受精率低等优点，已成为辅助生殖领域尤其是治疗男性不育的重要手段。该技术将精子直接注射到卵母细胞胞质内，绕过了自然受精过程中的诸多环节，因此常用于体外受精障碍者。尽管如此，临床上仍有1．29％-3．oo％的ICSI周期存在受精率低甚至受精完全失败。

常规IVF不受精周期行补救卵母细胞单精子注射

【目的】探讨常规体外受精胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)不受精时,应用卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术进行补救授精的临床意义。【方法】2001年8月～2005年8月,在499个常规IVF-ET周期中有25个周期完全不受精,进行补救ICSI,并与同期实施的179个正常ICSI周期进行比较。【结果】补救ICSI组与正常ICSI组比较,HCG日平均血清雌二醇水平、每个成熟卵泡平均血清雌二醇量、每个周期的获卵数无明显差别,补救ICSI受精率为57.7%,低于正常ICSI组(67.8%),补救ICSI组平均每个周期获得胚胎数(7.8±3.9)比正常ICSI(10.0±4.9)组少,且有统计学意义(P<0.01)。补救ICSI组≥4细胞的胚胎占总胚胎数的54.5%,低于正常ICSI组(87.5%),有统计学意义(P<0.01)。正常ICSI组妊娠率为38.5%,补救ICSI组无一例妊娠。补救ICSI组中有8例在下一周期行ICSI,有2例妊娠并分娩2个健康女婴。【结论】补救ICSI虽可以避免取消IVF周期,但其受精率和妊娠率低,其临床应用价值还有待于进一步探讨。对于常规IVF不受精的患者,再次治疗时可考虑行ICSI助孕。

精子不同处理和胰岛素不同浓度对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精的影响

探讨了分别使用新鲜、冷冻和超声波断尾精子以及在胚胎培养液中分别添加不同浓度胰岛素对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精(ICSI)胚胎早期发育的影响。结果:(1)使用冷冻解冻精子与新鲜精子相比对猪卵母细胞ICSI后的卵裂率和囊胚率均无显著影响(P>0.05);(2)精子断尾与否对猪卵母细胞ICSI后的分裂率和囊胚率没有显著影响(P>0.05);(3)在胚胎培养液中添加5mg/L胰岛素与对照组相比可显著提高猪ICSI胚胎的囊胚发育率(18.22%vs3.60%,P<0.05)。

卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射临床结局的影响

目的探索最适合的单精子胞浆内注射(ICSI)时机。方法根据从患者取卵结束到开始ICSI的时间(t),将患者分为3组:A组(2h≤t<4h,n=60),B组(4h≤t≤6h,n=85),C组(6h<t≤8h,n=62)。回顾性分析了卵母细胞体外培养时间对于ICSI患者的受精、胚胎发育及临床结局的影响。结果 B组及C组患者的临床妊娠率及植入率均显著高于A组。结论适度的卵母细胞体外培养时间(4～8h)有利于改善ICSI患者的临床结局。

精子和卵母细胞质量控制对山羊卵胞质内精子注射(ICSI)受精的影响

以体外成熟卵母细胞为材料研究了精子来源及制动处理方法、卵母细胞质量及注射后激活等因素对山羊ICSI效果的影响。结果说明,附睾头、体和尾精子ICSI后的受精率、卵裂率和桑椹胚/囊胚发育率与射出的鲜精精子都没有明显差异(p>0.05),但带下注射时附睾头和体精子的受精和发育率显著低于附睾尾和射精精子。在以4种不同方法致死的精子中,室温保存24h的死精子ICSI受精、卵裂和桑椹/囊胚率虽然低于对照组,但是明显高于其它方式致死的精子;5℃保存15天的死精子受精和发育效果最差。0.0005%Triton X-100处理精子的受精率、卵裂率和桑椹/囊胚率显著(p<0.05)高于制动对照组、不制动对照组和其它浓度组。经高渗处理法检测质量好的卵母细胞ICSI受精和胚胎发育效果显著好于质量差的卵母细胞。与对照组相比,A23187和Ionomycin/6-DMAP激活处理均显著(p<0.05)提高ICSI的受精率、卵裂率和桑椹/囊胚发育率。因此,精子在附睾内的成熟过程主要与其获得与卵质膜融合能力有关;精液保存方法对精子受精能力的损伤程度有很大差异;适当浓度的Triton X-100处理可模仿精子制动;卵母细胞质量是影响ICSI效果的重要因素;注射精子后激活卵母细胞能保证山羊ICSI的受精效果。

激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞内单精子注射中的应用

目的 :比较使用激光和机械两种方法制动睾丸精子后行卵母细胞内单精子注射的受精率、卵裂率和优质胚胎形成率的异同 ,探索激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞内单精子注射中应用的可能性。方法 :1 6对外周血染色体正常、无体外受精 -胚胎移植禁忌症的无精子症夫妇 ,女方用GnRH Gonal-F HCG长方案超数排卵 ,将每对夫妇获得的卵用透明质酸酶去除颗粒细胞后随机均分为 2组 ;女方采卵当日丈夫睾丸取精处理后分别用激光法和机械法制动精子并行卵母细胞内单精子注射 ,2 4小时观察受精卵数目 ,48小时观察卵裂受精卵的数目和优质胚胎的数目并计算出两组各自的受精率、卵裂率和优质胚胎形成率进行比较研究。结果 :1 6对夫妇 1 6个周期共获得MⅡ期卵母细胞 1 89枚。激光制动组 ( 95枚 )的受精率为 71 .6 % ( 6 8 95 ) ,卵裂率为 6 0 .0 % ( 5 7 95 ) ,优质胚胎形成率为 5 3 .7% ( 5 1 95 ) ;机械制动组 ( 94枚 )的受精率为70 .2 % ( 6 6 94) ,卵裂率为 6 1 .7% ( 5 8 94) ,优质胚胎形成率为 5 2 .1 % ( 49 94)。两组相比受精率、卵裂率和优质胚胎形成率均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论

常规受精和卵母细胞胞浆内单精子注射受精在获卵较少周期的临床结局比较

目的探讨体外受精—胚胎移植(IVF-ET)周期中,获卵数较少的患者受精方式的选择。方法选择在该院进行IVF-ET,女方获卵数≤3的夫妇做为研究对象。根据女方年龄分为≥35岁组和<35岁组,根据精液情况分为正常精液ICSI组和少弱精ICSI组,分别比较各组内的2PN率、卵裂率、临床妊娠率、着床率及活婴产率。结果对于获卵数较少的夫妇,不论女方年龄是否≥35岁,采取常规受精与采取单精子注射受精的2PN率、卵裂率、临床妊娠率、着床率及活婴产率均没有显著性差异。精液正常行ICSI和少弱精行ICSI的2PN率、卵裂率、临床妊娠率、着床率及活婴产率均没有显著性差异。结论 IVF治疗时,获卵数较少的夫妇单精子注射并不能改善妊娠结局,受精方式的选择仍以精液指标为准。