绵羊卵丘-卵母细胞复合体石蜡切片技术的改良

【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵羊COCs蛋白鉴定需求。【方法】首先采用抽吸法从绵羊有腔卵泡内获得COCs,以石蜡包埋方式人为构建了一种可以进行切片处理的"包含多枚绵羊卵丘-卵母细胞复合体的仿组织结构"。然后以该特殊结构与健康绵羊卵巢组织为研究对象,分别采用改良与传统的石蜡组织免疫化学技术流程,检测了目的蛋白,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)与其受体(urokinase-type plasminogen activator recepter,uPAR),在绵羊COCs中的表达情况,比较了两种技术的免疫染色效果与染色流程差异。【结果】将所构建的绵羊COCs仿组织结构与正常绵羊卵泡组织,进行石蜡组织切片处理,经切片、贴片与脱蜡等步骤,分别形成了散在分布于载玻片上的COCs薄片与包含卵泡的卵巢组织薄层(厚度5μm)。经间接免疫染色处理后,结果显示:①目的蛋白在两种结构COCs中的表达是一致的,即uPAR在绵羊卵丘与卵母细胞上都有表达,而uPA只存在于绵羊卵丘细胞中;②在绵羊COCs薄片结构中,COCs整体形态完好,卵母细胞与外围卵丘细胞层次清晰,蛋白定位清楚,染色效果良好;在卵巢薄层结构中,绵羊卵泡内壁颗粒细胞与COCs等形态结构相对完整,卵母细胞蛋白定位清楚,但是卵丘细胞层次与蛋白表达较不清晰;③与绵羊卵巢组织石蜡切片技术相比较,绵羊COCs仿组织结构石蜡切片技术,在固定、脱水、透明、浸蜡以及脱蜡等步骤的处理时间都大大缩短,例如固定处理由24h缩短为2h;由逐级脱水的10h缩短为两级脱水的1h;透明由30min缩短为10min;软蜡与硬腊浸入由原来的6h缩短为1h;由逐级脱蜡的25min缩短为两级脱蜡的10min等。【结论】改进后的COCs仿组织石蜡切片染色技术,显示更优质的免疫定位与染色效果,不仅具有COCs获得率高、卵母与卵丘细胞形态层次清晰等优点,而且显著缩短了操作时间,简化了操作流程。该技术在保留COCs结构完整的基础上,有效检测了目的蛋白在绵羊卵丘-卵母细胞复合体中的表达模式,对于探明绵羊卵泡发育与卵母细胞成熟机制,具有重要意义。

小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体蛋白质谱图的建立

目的通过聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,全面展示小鼠成熟卵丘卵母细胞复合体(COC)的蛋白质表达谱。方法采用13cmpH3～10的非线性胶条进行双向凝胶电泳,分离成熟雌鼠COC总蛋白,并作质谱鉴定。结果获得了较高分辨率的小鼠成熟COC蛋白质表达谱图,并对胶上的3个蛋白点进行了质谱鉴定。结论蛋白质组学是全面分析COC蛋白表达的有效手段。成熟COC蛋白质表达谱的建立为研究卵泡发育机理提供了依据。

TSG-6和连接蛋白在小鼠卵丘-卵母细胞复合体的共位性分析

目的：探讨小鼠卵丘-卵母细胞复合体(COC)中 TSG-6和连接蛋白(LP)与透明质酸(HA)的相关性。方法：应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重染色技术观察小鼠 COC 中 TSG-6和 LP 的表达和分布。结果： TSG-6和 LP 在 COC 中呈阳性表达。结论：TSG-6和 LP 的阳性表达可能和 HA 在 COC 成熟中起重要作用。

生长分化因子9在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达

旨在探讨牛卵丘卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟过程中生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF-9)基因表达和卵丘细胞扩展的关系。运用实时荧光定量PCR技术检测GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中(0、6、12、18、24和28h)的相对表达变化,同时观察了卵丘细胞扩展情况。结果表明,GDF-9mRNA的表达量在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中呈现一定的规律性变化,随着成熟培养的进行,其表达量逐渐增加,在成熟培养12h时表达量最高,但随后又逐渐降低,在成熟培养24h表达量最低;卵丘细胞在IVM 12h开始出现明显的扩散,而且随着成熟时间的延长,卵丘细胞的扩散程度在不断增加。研究结果表明:高水平的GDF-9mRNA表达与卵丘细胞开始扩散的时间一致,揭示GDF-9基因可能在牛卵丘细胞扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。

山羊GDF9基因在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达

本研究采用实时荧光定量PCR技术,从mRNA水平探讨了山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟(IVM)过程中(0、6、12、18、24和27h)GDF9基因的相对表达变化,分析其与卵丘细胞扩散之间的关系。结果表明,GDF9 mRNA在山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中均有表达,且在成熟培养初期表达量较低,其表达峰值出现在IVM12h,与卵丘细胞开始扩散的时间一致,之后又有所下降。由此推测,GDF9基因在山羊卵丘扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。

猪卵丘卵母细胞复合体和裸卵中卵母细胞发育及基因表达差异的研究

【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达。分离得到的差异表达基因在雌激素受体调节、细胞膜间的信息传导和细胞器物质运输等过程中发挥重要的作用。【结论】这些差异基因可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,对卵母细胞的成熟具有重要作用。

卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比较两组受精率(2PN、1PN和3PN)、卵裂率(2PN、1PN和3PN)、优胚率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 A组和B组的受精率分别是76.51%和73.74%(2PN受精率分别是60.64%,61.62%;1PN受精率分别是1.61%,0.86%;3PN受精率分别是10.44%,9.69%)、卵裂率分别是98.95%和99.17%(2PN卵裂率分别是97.02,98.01%;1PN卵裂率分别是100%,85.71%;3PN卵裂率分别是100%,100%)、优质胚胎率分别是60.75%,62.68%、临床妊娠率分别是63.89%,61.76%、种植率分别是48.00%,38.78%、流产率分别是9.09%,11.90%。所有指标均无统计学意义。结论卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞不会影响IVF-ET的临床结局,为利用卵丘细胞进行非侵入性种植前遗传学诊断提供临床依据。

泛素-蛋白水解酶复合体通路在卵母细胞减数分裂和受精中的作用

泛素-蛋白水解酶复合体通路(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)高效快速并高度选择性地降解特定的蛋白质,从而参与控制多种重要的细胞生物学过程。在卵母细胞减数分裂和受精过程中,该通路通过降解细胞周期中的关键因子,如细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子等细胞周期调控因子,从而参与卵母细胞生发泡破裂、第一极体排放、MⅡ阻滞的维持和克服等过程,使细胞通过特定的检验点。此外,UPP也与丝裂原活化蛋白激酶通路、Polo样激酶、成熟促进因子、蛋白激酶C、钙调蛋白依赖激酶Ⅱ等减数分裂关键调节因子相互作用来参与卵母细胞减数分裂成熟和受精。一些周期蛋白(如 后期促进复合体的某些亚单位等)还充当泛素连接酶成分,直接参与泛素化过程。

表皮生长因子调节小鼠卵丘卵母细胞复合体卵丘细胞扩散及激素分泌的研究

目的 研究表皮生长因子 (EGF)对小鼠GV期卵丘卵母细胞复合体 (COC)卵丘细胞扩散以及对孕酮 (P)、雌二醇 (E2 )合成的影响 ,探讨EGF对卵巢功能的调节作用。方法 GV期COC在EGF的浓度为 0、2、5、10、15 μg·L-1的培养基中体外培养 48h ,每组COC数为 5 5～ 65。以不含EGF的培养组为对照组 ,观察 2 4、3 6、48h时各组卵丘细胞扩散情况 ,测定培养终末上清液中P及E2 的含量。结果 在含不同浓度EGF培养基中培养的 4组 ,其 2 4h、3 6h、48h的Ⅱ度和Ⅲ度扩散率均大于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;EGF含量为 5、10、15 μg·L-1的培养组E2 分泌低于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;不同EGF含量的培养组P的分泌较对照组增加 (均为P <0 .0 1)。结论 EGF能促进卵丘细胞扩散 ,抑制E2 合成 ,促进P分泌。

小鼠年龄及卵丘-卵母细胞间联接的解离对卵母细胞体外成熟的影响

实验研究了小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘－卵母细胞间的相互作用。实验小鼠为雌性 Ｂ６Ｄ２杂交一代。激素处理４８小时后分离出卵丘和卵母细胞复合体（ＣＥＯ）．并培养在含有次黄嘌 呤（ＨＸ）的培养液中。２４小时后检查卵母细胞核成熟（ＧＶＢＤ）情况。结果表明：（１）随着小鼠 日龄的增加，ＣＥＯ和裸卵母细胞（ＤＯ）的ＧＶＢＤ百分比在ＨＸ培养中下降。当小鼠日龄超过２５天 时，４ｍｍｏｌ的ＨＸ可最大限度地抑制卵母细胞的成熟。不同日龄的ＣＥＯ和ＤＯ之间的ＧＶＢＤ百分 比无差异。（２） ＦＳＨ可诱导卵丘－卵母细胞的分离并进而刺激卵母细胞成熟（ＧＶＢＤ增加到６８％）。 （３）当ＣＥＯ被机械分离并进行共培养后，卵母细胞的ＧＶＢＤ为４５％，而对照为１５％。分离的卵 母细胞单独培养后其ＧＶＢＤ无明显变化。本实验结果提示卵母细胞与卵丘细胞分离再共培养可以 诱导卵丘细胞释放某种促卵母细胞成熟因子，它可以使卵母细胞克服ＨＸ的抑制而成熟。在卵泡内 卵丘细胞与卵母细胞间的紧密联接可能是抑制卵细胞成熟的条件之一。

猪卵丘卵母细胞复合体和壁层颗粒细胞上LHR/hCGR的检测及性腺激素的分泌

用取自 ３～５ ｍ ｍ 卵泡的处于减数分裂阻抑状态的猪卵丘卵母细胞复合体（ｐ Ｃ Ｅ Ｏ），培养 ４８ ｈ，用 Ｆ Ｓ Ｈ（１００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）或 ｈ Ｃ Ｇ（０、５０、１００、２００、５００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）刺激 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌甾体激素；用放射受体测定法（ Ｒ Ｒ Ａ）比较 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 的卵丘细胞及壁层颗粒细胞（ Ｍ Ｇ Ｃ）上促黄体激素受体／人绒毛膜促性腺激素受体（ Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ）的数量； Ａ Ｍ ｅ Ｘ 石蜡切片、免疫组织化学染色，检测 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 以及 Ｍ Ｇ Ｃ 的分布情况。在 Ｆ Ｓ Ｈ 作用下，ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌的孕酮明显高于 ｈ Ｃ Ｇ 作用组和对照组 （ Ｐ ＜ ００５）； 平均每个壁层颗粒细胞上的 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ是每个卵丘细胞的 １０５ 倍； Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在基膜两侧分布较多，且卵母细胞上没有 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ，临近卵母细胞的卵丘细胞膜上较少被染色。以上结果表明，在体外试验中，可能由于 Ｃ Ｅ Ｏ 上 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 的数量不足或生理活性降低， Ｌ Ｈ／ｈ Ｃ Ｇ 不能促进卵母细胞恢复减数分裂。

卵丘卵母细胞复合体和裸卵孤雌激活率的比较研究

卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚的发育研究,对于正确认识动物的个体发育、细胞分化,以及核移植和动物克隆具有重要的意义。经孤雌生殖而产生的单倍体和纯合双倍体细胞系在各种遗传学中都具有重要的价值,利用孤雌胚胎体外培养发育到囊胚的内细胞团可建立孤雌胚胎干细胞,可以进一步挖掘优良母畜的遗传资源,加速改良,有助于阐明孤雌生殖与有性生殖的内在联系与差异,进一步认识母源基因在两性生殖中的作用。

猪卵丘卵母细胞复合体和裸卵的卵母细胞发育及基因表达差异的研究

卵丘细胞是指包裹在卵母细胞外周并与之进行代谢联系的颗粒细胞群,是一类与生殖细胞密切相关的体细胞。大量研究表明,卵丘细胞在卵母细胞的发育、成熟、排卵、受精以及受精卵发育过程中发挥了重要作用,卵母细胞与卵丘细胞之间的相互作用已成为关注的焦点。由于卵丘与卵母细胞之间的相互作用十分复杂,人们对参与这一细胞间互作的信号通路和反应过程相关基因的表达还缺乏深刻了解。本研究对比了有致密完整卵丘细胞包裹的卵母细胞和无卵丘细胞包裹裸卵的体外培养成熟过程中的成熟率、孤雌激活卵裂率、囊胚率的差异,并运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)和半定量RT-PCR技术,比较了两者在基因表达上的差异,目的是进一步认识卵母细胞的发育机制,并推测卵母细胞和卵丘细胞间的相互作用的分子机理。材料与方法:采集大量猪的卵母细胞,捡出A级卵(胞质均匀且卵丘细胞层完整紧密,包裹五层以上的卵)和C级卵(有极少或无卵丘细胞包裹的卵)分别进行了体外培养、孤雌激活。同时对两类卵母细胞抽提RNA,进行DDRT-PCR,筛选出差异条带进行克隆测序,最后根据测序结果设计特异引物,最后通过半定量RT-PCR对筛选出的差异条带进行验证。结果与讨论:(1)在体外培养和成熟实验中,卵丘卵母细胞复合体(COC)中的卵母细胞的成熟率和卵裂率均显著高于裸卵的,而裸卵的囊胚率为0,表明卵丘细胞在卵母细胞的发育和成熟过程中起到了关键作用。(2)利用了3对锚定引物和随机引物,共发现了16条差异表达的片段,经过克隆测序最终得到了14条差异表达的序列,经过比对发现,其中3个片段分别与人的PELP1,Myo5b,calpastatin基因高度同源,另外5条序列与猪的EST同源,但功能未知,其余6条序列未找到同源片段。(3)经过半定量RT-PCR验证表明,大约有一半的条带在差异显示和半定量RT-PCR实验中的结果一致,其中PELP1,Myo5b基因在有卵丘细胞的卵母细胞中的表达量高于裸卵的,而calpastatin基因只在有卵丘细胞的卵母细胞中表达,在裸卵中则没有检测到。(4)相关研究表明,差异表达基因在雌激素受体的调节、细胞膜间的信息传导、细胞器物质运输等过程中发挥重要的作用,这些差异基因可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,对卵母细胞的成熟具有重要作用。上述研究为进一步认识卵母细胞的发育机制,并推测卵母细胞和卵丘细胞间的相互作用的分子机理奠定基础。这些差异表达的基因也是卵母细胞成熟过程中的关键因子,可以作为筛选卵母细胞进行下一步操作的标记基因。

培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响

A类卵母细胞在mTCM 199、NCSU2 3和NCSU37体系中培养 4 4～ 5 2小时后 ,成熟率分别为 76 .1%、78.1%和 6 5 .2 %。前两者差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但显著高于后者 (P <0 .0 5 )。卵母细胞在添加eCG和hCG的NCSU2 3体系中的成熟率 (75 .6 % )明显高于添加FSH的LH和成熟率 (6 5 .2 % ) (P <0 .0 5 )。A、B、C三类卵母细胞在NCSU2 3的成熟率分别为 73.3%、6 0 .4 %和 11.0 % ,三者间差异显著 (P <0 .0 5 )。大 (ф >6mm)、中 (ф =3～ 6mm)和小 (ф <3mm)三种卵泡中的卵母细胞在NCSU2 3中培养后 ,成熟率分别为 5 6 .2 % ,78.1%和 5 1.9% ,中等卵泡中卵母胞的体外成熟率显著高于其他两组 (P <0 .0 5 )。

牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。

卵丘细胞对辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

为了进一步探索辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟的方法,本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集直径大于2 mm卵泡的卵母细胞,研究卵丘细胞对卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响。试验1,将一部分COCs经机械吹打脱除卵丘细胞成为机械裸卵(DOs),然后以4种方式培养,即COCs单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养(DOs(CCs)),以及DOs单独培养。试验2,根据包裹卵母细胞的卵丘细胞的完整性分为3组,有3层卵丘细胞紧密包围的卵母细胞复合体COCs3,有1-3层卵丘细胞包围的卵母细胞COCs1-3,无卵丘细胞包围的裸露卵母细胞NOs,3组各自单独培养。结果表明:COCs组的成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率最高,分别为83.25%、41.75%和29.25%,卵丘细胞的存在有利于卵母细胞体外成熟和随后的发育,COCs3组成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率分别为83.25%、42.50%和29.75%,显著高于COCs1-3和NOs组,卵丘细胞的完整性也影响着卵母细胞的体外发育,自然裸卵已失去体外发育能力。

猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性

目的 探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系。 方法 取猪卵丘 卵母细胞复合体 (COCs)在体外进行成熟、受精和培养 ,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡 (<2 ,2～ 5和 >5mm)的不同浓度 (15%、5% )卵泡液。 结果 在含卵泡液的成熟培养液中培养 48h ,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散 (P <0 .0 5) ,但不影响第一极体的排出 ;COCs成熟培养 2 4h后 ,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养 2 4h ,卵丘扩散显著高于对应的 48h培养组 (P <0 .0 5) ,但第一极体的排出率无显著差异 ;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到 2～ 4细胞、>4细胞和桑葚胚 /囊胚的百分率 )呈显著正相关 (P =0 .0 0 58,0 .0 0 0 1和 0 .0 3 4 8)。 结论 卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用 ,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关 ;

卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟的影响

为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P<0.05),对COCs具有促进趋势但差异不显著(76.66±5.77 vs 66.76±9.46,P>0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵母细胞胞外卵丘细胞主要通过间隙连接促进卵母细胞的体外成熟,添加的离散卵丘细胞主要以旁分泌途径促进卵母细胞的体外成熟;3层及其以上胞外卵丘细胞能够提高其包裹的卵母细胞平均体外成熟能力的85.34%,添加的离散卵丘细胞能够提高COC平均体外成熟能力的16.18%,能够提高DO平均体外成熟能力的60.61%。

水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究

为了探讨水牛卵母细胞体外发育潜能与卵丘颗粒细胞凋亡之间的关系,本研究将水牛卵母细胞体外培养22-24 h后,取其卵丘颗粒细胞,采用Annexin V-FITC法进行颗粒细胞凋亡染色,进行凋亡率的分析,并与卵母细胞的成熟情况和卵母细胞的评分及形成卵裂、囊胚的结果进行对照。结果发现,随着卵母细胞成熟时间的增加,卵丘颗粒细胞凋亡率升高;随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,卵丘颗粒细胞凋亡率逐渐升高。由此表明,卵母细胞发育潜能与卵丘颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定卵丘颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能。

绵羊卵母细胞和卵丘细胞体外成熟过程中ghrelin mRNA的表达

运用实时定量RT-PCR技术检测了不同成熟培养时间绵羊卵母细胞和卵丘细胞ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,卵母细胞ghrelin mRNA相对表达量在16、24h呈现显著升高,而卵丘细胞ghrelin mRNA则随着成熟时间的延长表现显著降低。绵羊卵母细胞和卵丘细胞ghrelin mRNA的持续表达以及动力学变化提示这一新型分子在生殖功能上有潜在调控作用。