FOXO3和转录因子SOHLH1对卵母细胞特异性表达基因Bmp15转录活性的调控

目的探究FOXO3和SOHLH1对卵母细胞特异性表达基因Bmp15的调控机制。方法构建Foxo3-pcDNA3.0表达质粒、Bmp15-p GL3.0荧光质粒,用细胞免疫荧光实验验证这2种表达质粒在HEK293T细胞中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验检测FOXO3和转录因子SOHLH1对Bmp15启动子区的转录活性的影响,染色质免疫共沉淀实验验证FOXO3和转录因子SOHLH1在Bmp15启动子区的结合情况。结果 Foxo3-pcDNA3.0表达质粒、Bmp15-p GL3.0荧光质粒构建成功。Foxo3-pcDNA3.0、Sohlh1-pcDNA3.0质粒成功转染HEK293T细胞并表达于其细胞核、质中。SOHLH1对Bmp15启动子(-2 000 bp,+200 bp)区域有正调控作用,该作用可被FOXO3抑制,且呈剂量依赖性。SOHLH1蛋白能与Bmp15启动子(-170 bp,80 bp),(-450 bp,-220 bp),(-745bp,-560 bp),(-1 410 bp,-1 200 bp)区间结合。FOXO3能与Bmp15启动子(120 bp,183 bp),(-84 bp,-75 bp),(-442bp,-395 bp),(-546 bp,-470 bp),(-674 bp,-665 bp)区间结合。结论 FOXO3能抑制转录因子SOHLH1对卵母细胞特异性表达基因Bmp15的转录活性。