卵泡刺激素及其受体的信号传递功能和相关疾病的研究进展

卵泡刺激素(FSH)是由垂体前叶促性腺激素细胞分泌的促性腺激素,与卵泡刺激素受体(FSHR)结合,刺激卵泡的生成和精子的发生,FSH或FSHR缺乏会导致男性精子减少以及女性不孕和闭经。随着研究的不断深入,FSH/FSHR信号通路也不断完善,除了经典的环磷酸腺苷依赖的信号通路以外,还有β-抑制蛋白依赖的通路以及其他通路;FSHR存在不同构象之间的平衡,构象的偏向性会影响其信号传导,对于偏向性信号的产生类别也正不断深入研究。同时FSH/FSHR也可以为辅助生殖、性腺疾病甚至癌症的治疗和预防提供新的研究思路。本文聚焦于对FSH/FSHR的相关理论及与疾病关联性的最新研究进展作一综述。

卵泡刺激素受体基因多态性与多囊卵巢综合征关系的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种高度异质性生殖内分泌紊乱性疾病,对女性生活产生极大影响。卵泡刺激素(FSH)通过与分布在性腺上的特异性卵泡刺激素受体(FSHR)结合,起到促进和维持正常的性腺发育和生殖功能,FSHR是PCOS易感基因的位点之一。近年来,FSHR基因多态性相关研究较多,FSHR基因突变可降低FSH敏感性,雄激素水平升高,导致排卵功能障碍,影响辅助生殖等。本文对FSHR基因多态性及其对PCOS的影响进行综述,为PCOS发病风险的评估及其遗传学相关研究提供一定的理论依据。

补肾活血方对小鼠卵泡刺激素及其受体mRNA表达的影响

目的:探讨补肾活血复方中药对免疫性卵巢早衰小鼠卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)及其受体(Follicle stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA表达水平的影响。方法:以小鼠透明带3(Zona pellucida3)为抗原,皮下多点注射免疫雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型,以生理盐水注射免疫的小鼠作为空白对照组。设补肾活血中药低、中、高不同剂量的3组治疗组,以泼尼松、倍美力为西药治疗对照组,用酶联免疫竞争法检测小鼠治疗后血清中抗透明带抗体(ZPAb)、FSH和雌二醇(E2)浓度,用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测小鼠卵巢组织FSHR mRNA表达水平。结果:模型组小鼠血清ZPAb的含量明显比空白对照组高,但血清E2的含量比空白对照组低,差异都有显著性意义(P<0.01);补肾活血中药治疗的3组小鼠血清E2的含量都比模型组有显著性升高,差异有非常显著性意义(P<0.001)。模型组小鼠血清FSH的含量与空白对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05),补肾活血中药治疗的3组小鼠血清FSH的含量与模型组比较,含量都有显著性升高,差异有显著性意义(P<0.05)。模型组小鼠卵巢组织FSHR表达的mRNA量比空白对照组低,但差异没有统计学意义(P>0.05);补肾活血中药治疗的3组小鼠卵巢组织FSHR表达的mRNA量比模型组高,差异有显著性意义(P<0.05)。小鼠血清E2的含量与卵巢组织FSHR mRNA表达量呈线性正相关关系(R2=0.359,F=64.888,P<0.001)。结论:补肾活血复方中药通过促进垂体分泌FSH的增加和卵巢颗粒细胞表面FSHR表达量的增加,提高卵巢组织对FSH的反应性,促使卵巢颗粒细胞分泌雌激素量增加,并且卵巢颗粒细胞分泌E2的量与卵巢颗粒细胞表面FSHR表达量呈正相关关系。

卵泡刺激素受体基因作为产仔数候选基因的研究

分析了FSHR基因 2个位点 (FSHRA、FSHRB)的PCR -SSCP、PCR -RFLPS多态性 ,利用SAS软件分析了多态性与母猪产仔数间连锁关系。找到了 1个影响产仔数的新的变异位点FSHRB ,该位点多态性显著地影响猪产仔数性状 ,即基因型BB的产仔数显著地高于AB、AA基因型。

雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达

目的 确定雄激素受体 (AR)和卵泡刺激素受体 (FSHR)在大鼠睾丸中的细胞定位和表达变化。 方法 利用地高辛标记的cRNA探针 ,在成年大鼠睾丸冰冻切片上进行原位杂交 ;同时利用透光显微切割技术将成年大鼠曲细精管分为Ⅱ～Ⅵ、Ⅶ～Ⅷ、Ⅸ～Ⅻ、ⅩⅢ～Ⅰ 4个阶段 ,提取总RNA ,用α 32 P标记的cDNA探针进行斑点杂交 ,观察AR和FSHRmRNA表达的细胞定位和期依赖性变化。利用图像分析系统 ,对阳性杂交信号单位面积平均辉度进行定量分析。 结果 ARmRNA阳性杂交信号位于支持细胞和间质细胞 ,于Ⅶ～Ⅷ期最强 ,Ⅸ～Ⅰ期最弱 ;FSHRmRNA阳性杂交信号位于支持细胞 ,于ⅩⅢ～Ⅰ期最强 ,Ⅶ～Ⅷ期最弱。各阶段之间具有非常显著性差异 (P<0 0 1)。 结论 AR和FSHR期依赖性表达的不同规律提示T(睾酮 )和FSH(卵泡刺激素 )作用于精子发生的不同阶段 ,说明睾酮和卵泡刺激素协同作用调节成年大鼠的精子发生。

卵泡刺激素受体在大鼠下颌下腺及胃的定位和分布研究

目的研究卵泡刺激素受体(FSHR)在大鼠下颌下腺和胃的定位、分布。方法采用免疫组织化学ABC法。结果大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞,颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞以及胃底腺壁细胞均呈FSHR免疫反应阳性,阳性物质主要位于细胞质内,细胞核呈阴性反应。结论大鼠下颌下腺、胃底腺壁细胞存在FSHR,卵泡刺激素可能通过FSHR的介导对上述两个器官功能进行调控。

卵泡刺激素及其受体在大鼠胰腺的共定位观察

目的观察卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR)在大鼠胰腺中的共存关系,以了解FSH对胰腺的功能意义。方法应用免疫荧光组织化学双标记染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果。结果部分外分泌腺细胞、导管上皮细胞及部分胰岛细胞呈FSH反应阳性,呈强绿色荧光。小血管内皮细胞也呈FSH反应弱阳性,呈弱的绿色荧光。部分胰岛细胞呈FSHR反应阳性,呈强红色荧光。一些外分泌腺上皮细胞呈FSHR反应弱阳性,呈淡红色荧光。有一些胰岛细胞呈FSH和FSHR双阳性反应,呈黄色荧光或红、绿相间荧光。结论FSH及其受体均存在于大鼠胰腺中,胰岛中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用。

抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定

目的获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体。方法使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体。ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性。结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分别在相对分子质量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的条带。ELISA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHH FSHR-06的抗原结合活性最高。结论从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体。

卵泡刺激素受体基因多态性与卵巢过度刺激综合征的相关性

目的:探索卵巢过度刺激综合征(OHSS)与卵泡刺激素受体基因(FSHR)307位点和680位点的相关性。方法:对202例接受IVF-ET治疗的女性不孕症患者的血液样本进行FSHR基因307位点和680位点的分型鉴定。结果:OHSS组患者的680这个位点中基因型频率AA,AG,GG分别为51.1%,38.3%,10.6%,等位基因频率A,G分别为70.2%,29.8%,基因型及等位基因频率分布均与非OHSS组比较差异有统计学意义,在307这个位点上未有类似发现。结论:该研究结果表明FSHR基因的Asn680Ser这个位点可能与OHSS发病相关,Thr307Ala这个位点需要进一步的研究。

体外颗粒细胞培养中抗苗勒管激素与卵泡刺激素受体mRNA表达的相关性

目的体外培养小鼠原代颗粒细胞培养液中,加入不同浓度的抗苗勒管激素(AMH),比较各组间小鼠颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA的表达情况,探讨体外培养颗粒细胞中AMH与FSHR mRNA表达的关系。方法选取4～5周的昆明雌性小鼠,腹腔注射孕马血清促性腺激素,48～54 h后颈椎脱臼法处死小鼠,取双侧卵巢,采用机械分离法释放颗粒细胞,胰蛋白酶消化细胞,低速离心分离细胞,用含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基置于37℃、5%CO2培养箱中培养。显微镜观察细胞形态,流式细胞术分离细胞,并用免疫荧光法对所培养的颗粒细胞进行鉴定。同时在体外培养的小鼠原代颗粒细胞培养液中加入不同浓度(5、10、20、30、40ng/mL)的AMH,测定每组培养基中AMH的终浓度,并用荧光定量PCR技术检测每组颗粒细胞中FSHR mRNA的表达。结果分离培养的颗粒细胞纯度大于80%;随AMH浓度加大,小鼠颗粒细胞中FSHR mRNA的表达逐渐降低,当AMH浓度为5和10 ng/mL时,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且5 ng/mL浓度组颗粒细胞上FSHR mRNA的表达量最高。结论用机械分离加胰酶消化加低速离心能得到纯度较高活性很好的颗粒细胞,用FSHR鉴定颗粒细胞是一种简便易行的方法,AMH浓度与颗粒细胞上FSHR mRNA表达呈一定负相关,表明AMH有可能通过抑制FSHR表达降低FSH敏感性,从而参与卵巢早衰的病理生理过程。

卵泡刺激素受体基因与多囊卵巢综合征关系的初步研究

目的:探讨卵泡刺激素受体基因第7、10(A)外显子基因突变与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系。 方法:提取56例PCOS患者及38例对照者的外周血基因组DNA,采用PCR及RFLP(限制性片段长度多态性)方法研究FSHR第7、10(A)外显子基因多态性。 结果:PCOS组FSHR第7外显子49/49型96.43%,86/49型3.57%,第10(A)外显子128/128型98.21%,128/216型1.79%,与对照组相比较,其基因型分布差异无显著性(P>0.05)。PCOS组第7外显子49型等位基因频率为98.21%,86型等位基因频率为1.79%,第10(A)外显子128型等位基因频率为99.11%,216型等位基因频率为0.89%。结论:中国人群存在以上两位点突变,但突变率在PCOS组及对照组不存在差异。PCOS组LH /FSH比值、高雄激素血症与等位基因86型、216型存在一定的相关趋势。

卵泡刺激素受体在山羊颈胸神经节的分布

目的探讨卵泡刺激素(FSH)是否影响心肺功能活动的自主神经调节。方法取雄性和雌性成年山羊的颈胸神经节各5对,经免疫组织化学SP法染色后,观察FSH受体在山羊颈胸神经节的分布特点。结果在颈胸神经节内,FSH受体免疫阳性产物主要存在于神经元的细胞质和细胞膜,为强阳性或中等阳性染色,而细胞核呈空泡状,不着色。此外,在神经节内的支持细胞、过路纤维、施万细胞以及血管内皮细胞中FSH受体呈弱阳性染色,有少量分布。图像分析表明,该神经节内神经元胞体的FSH受体相对表达量极显著高于其他非神经元胞体结构(P<0.01)。结论颈胸神经节中神经元细胞是FSH作用的主要靶细胞,提示FSH可能通过影响该神经节的神经元活动,从而影响其发出的交感节后神经而调节心肺功能活动。

补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响

目的通过体外实验阐述补肾促排方治疗多囊卵巢综合征的药理学作用机制。方法提取与鉴定大鼠卵巢颗粒细胞,提取补肾促排方水溶液。实验分为补肾促排方低、中、高剂量组和空白对照组,分别相应处理分离与鉴定的大鼠卵巢颗粒细胞24 h后提取mRNA,48 h后提取蛋白。通过RT-PCR和Wester-blot法分别检测各组黄体生成素受体(LHR)和卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和蛋白表达水平。结果补肾促排方水溶液能够显著上调大鼠卵巢颗粒细胞LHR和FSHR mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05),且呈现显著的浓度梯度依赖效应。结论补肾促排方通过上调卵巢颗粒细胞LHR和FSHR的表达,促进卵泡的发育与排出,从而起到治疗多囊卵巢综合征的作用。

卵泡刺激素受体主动免疫对雄性小鼠生育力影响的初步研究

探索卵泡刺激素受体 (FSHR)作为男性免疫避孕疫苗的可能性。利用分子生物学方法克隆表达卵泡刺激素受体 -谷胱甘肽转硫酶 (FSHR- GST)融合蛋白 ,以此作为免疫原免疫雄性小鼠 ,观察免疫应答反应及其对生育力的影响。结果表明 ,在大肠杆菌中表达出 FSHR- GST融合蛋白 ,免疫家兔及小鼠后均产生免疫应答 ,免疫后的雄性小鼠仍具生育能力 ,免疫小鼠睾丸精曲小管出现生精细胞减少现象。提示

卵泡刺激素受体研究进展

卵泡刺激素 (FSH)是哺乳动物重要的生殖激素 ,其生理作用是通过其受体 (FSHR)介导的。FSHR属于G蛋白偶联受体超家族中的糖蛋白亚家族成员 ,它的细胞外域具有FSH特异性结合位点 ,细胞外域有 3或 4个潜在的糖基化位点 ,这些糖基对受体的折叠及转运激素至膜表面是必须的 ;其跨膜域参与蛋白激酶A(PKA)介导的信号转导 ,启动受体活化后的胞内事件 ;受体的脱敏可导致受体解偶联和受体数量下调。大多数哺乳动物FSHRcDNA开放阅读框由 2 0 85个核苷酸构成 ,人和大鼠FSHR基因为单拷贝基因 ,它包含 1 0个外显子和 9个内含子 ,其 5’侧翼区缺乏规则的TAT或CCAAT启动子元件 ,在 3’末端非翻译区含有 2个推断的多聚腺苷酸信号。FSHR存在活性突变和非活性突变 。

卵巢早衰小鼠中抗苗勒管激素与卵泡刺激素受体相关性的研究

目的探讨卵巢早衰(POF)小鼠中抗苗勒管激素(AMH)与卵泡刺激素受体(FSHR)的关系。方法以小鼠透明带3(ZP3)的第330～342个氨基酸序列所合成的透明带多肽为免疫原,免疫SPF级Balb/c雌性小鼠,皮下多点注射建立POF模型。放射免疫法测定模型组及对照组小鼠外周血FSH、雌二醇(E_2)的水平,酶联免疫法测定外周血AMH、抗透明带抗体(AzpAb)的水平,HE染色观察卵巢组织的变化,并用免疫组化方法分析卵巢颗粒细胞中FSHR的表达。结果 POF小鼠较正常小鼠外周血的FSH升高,E_2值降低,AMH值降低,AzpAb值升高。POF小鼠卵巢的HE染色病理切片见卵泡闭锁,正常发育的卵泡甚少。免疫组化分析,FSHR仅在颗粒细胞上表达,且POF小鼠卵巢上FSHR的表达明显少于正常组。结论 FSHR仅在颗粒细胞上表达,POF小鼠中各级卵泡的FSHR表达均降低,POF小鼠伴低浓度AMH,且FSHR的表达随AMH降低亦降低。

大鼠胃卵泡刺激素及其受体的免疫荧光定位及原位杂交

目的探讨大鼠胃组织中是否表达卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR),为进一步研究FSH对消化系统的功能调节提供理论依据。方法选取SD大鼠20只,雌雄不拘,经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉成功后,用4%多聚甲醛先快后慢灌流固定2h,开腹取胃组织置于300g/L蔗糖液中直至组织沉底,恒冷箱切片机切成厚度为6μm的组织切片用于单标记免疫荧光定位研究。另一部分胃组织放入4%多聚甲醛室温固定6-8h,按石蜡包埋程序包埋后制成4μm石蜡切片用于原位杂交研究。结果在大鼠胃底腺的壁细胞和主细胞呈FSH和FSHR免疫反应阳性,阳性物质分布于细胞质,细胞核呈阴性反应;上述细胞同样含有FSH和FSHR mRNA杂交信号,信号物质亦分布于细胞质内,细胞核呈阴性反应。结论 FSH及其受体定位于大鼠壁细胞和主细胞,同时大鼠壁细胞和主细胞又能产生FSH及其受体,说明FSH对壁细胞和主细胞功能作用可能是通过旁分泌或自分泌的作用来实现的。

携带人卵泡刺激素受体的慢病毒载体疫苗的构建及其免疫效应检测

制备携带卵泡刺激素受体的慢病毒载体疫苗,并研究其对小鼠的免疫效应。将卵泡刺激素受体胞外区(fshr366)基因克隆到慢病毒载体上,采用脂质体转染法将重组质粒转染至293T细胞中,包装并产生含有目的基因的病毒颗粒;分别利用RT-PCR和Western blot检测感染病毒颗粒的293T细胞中fshr366在m RNA水平及蛋白水平的表达情况;用携带fshr366的病毒颗粒单次腹腔免疫BALB/c小鼠,分别在免疫0、14、21和28 d对小鼠眼眶采血,ELISA法检测免疫小鼠血清的特异性并测定抗体滴度。酶切和测序结果表明fshr366基因片段成功构建到慢病毒载体上。将包装产生的携带fshr366的慢病毒颗粒感染293T细胞后,RT-PCR和Western blot检测结果表明细胞在转录水平和蛋白水平均表达fshr基因。ELISA结果显示携带fshr366的慢病毒颗粒单次腹腔免疫小鼠后,免疫14 d就激起了机体的体液免疫反应,抗体滴度达到1∶1 600。成功制备了携带卵泡刺激素受体的慢病毒载体疫苗,其可以在小鼠体内激发FSHR抗原特异的早期持续性免疫反应。

无精子症患者睾丸组织中卵泡刺激素受体及睾酮受体的研究

精子发生要经历2次减数分裂以及复杂的变形，这一过程受卵泡刺激素（FSH）的调节。如果FSH对靶细胞的作用发生障碍，将会导致精子发生障碍，临床上表现为不同程度的少精子症甚至无精子症。此外，睾酮（T）对精子发生也具有重要作用。由于激素对靶细胞的作用是通过相应受体实现的，

西北地区汉族妇女卵巢反应性与卵泡刺激素受体基因多态性的关系

目的探讨西北地区汉族妇女控制性超排卵(COH)中卵巢反应性与卵泡刺激素受体(FSHR)基因Thr307Ala(rs6165)和Asn680Ser(rs6166)位点多态性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性酶切技术对卵巢高反应患者45例、低反应患者27例和正常反应患者69例的FSHR基因第10号外显子Thr 307Ala位点和Asn680Ser位点进行分型,并通过Fisher′s精确检验方法分析基因型和等位基因分布频率。结果 FSHR基因Thr307Ala基因型、等位基因分布频率在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。Asn680Ser位点基因型、等位基因分布频率在卵巢高反应组与正常反应组间差异无统计学意义(P>0.05);Ser/Ser基因型频率在卵巢低反应组中占40.7%,与正常反应组比较差异有统计学意义(P<0.01);携带G等位基因者发生卵巢低反应的风险增加,OR值为2.37(95%CI=1.25,4.52)。结论FSHRAsn 680Ser基因多态性与西北地区汉族妇女COH中的卵巢低反应相关;Asn680Ser位点等位基因为G时,增加卵巢低反应的风险。