人羊膜上皮细胞向卵泡样结构转分化的实验研究

目的研究人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)在人卵泡液的长时间刺激下能否转分化为卵泡样结构。方法在前期实验结果基础上,体外分离培养hAECs,5%人卵泡液为诱导条件,延长诱导时间至44d,倒置显微镜观察细胞形态学改变,化学发光免疫技术检测培养基上清液中雌激素(estradiol,E2)水平的变化,实时荧光定量-聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测雌性生殖细胞特异性基因(GDF9、DAZL、SCP3)表达情况。结果诱导组(添加有5%卵泡液的培养基)在培养第10天出现卵母细胞样细胞(OLCs),随着时间延长,OLCs体积增大,周围见透明带样环变,随后减小,部分消失;对照组无上述现象。诱导组DAZL及GDF9的mRNA表达水平较对照组升高(P<0.05),并且具有两个高峰;诱导组SCP3mRNA表达水平与对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。诱导组有E2生成,其水平随时间先下降后升高再下降;对照组无E2生成。结论在体外,hAECs具有向卵泡样结构转分化的潜能。

组织TMEFF2基因甲基化状态与子宫内膜癌和子宫内膜增生的关系

目的分析含表皮样生长因子和卵泡抑素结构域的跨膜蛋白2(TMEFF2)基因甲基化状态与子宫内膜癌(EC)和子宫内膜增生的关系。方法选取2017年3月至2021年8月在该院妇产科住院的172例汉族女性为研究对象,包括91例EC患者(EC组)、36例子宫内膜增生患者(增生组)和45例子宫内膜正常女性(对照组)。采用实时定量焦磷酸测序检测TMEFF2基因3个CpG位点甲基化水平。根据甲基化指数(MI),将91例EC患者分为未甲基化组(MI<10%)、中低度甲基化组(MI为10%~30%)和高度甲基化组(MI>30%)。比较对照组、增生组、EC组临床资料,比较不同甲基化水平组各项临床和病理学特征。采用随机森林分类算法,根据变量在诊断中的重要性绘制出示意图,并对其进行排序,筛选鉴别诊断指标。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析TMEFF2基因CpG1位点甲基化水平对EC、增生子宫内膜及正常子宫内膜的鉴别诊断价值。结果EC组、对照组、增生组TMEFF2基因MI分别为24.53(9.20,65.78)、4.58(0.49,15.76)、13.67(2.95,28.76),EC组MI明显高于对照组和增生组,且增生组MI明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。未甲基化组、中低度甲基化组、高甲基化组的EC肿瘤(pT)分期、淋巴结转移状态(pN)分期、年龄分布情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据随机森林分类法,TMEFF2基因CpG1位点甲基化状态是仅次于体质量指数的重要诊断指标。ROC曲线分析结果显示,TMEFF2基因CpG1位点甲基化水平鉴别子宫内膜增生与正常子宫内膜、EC与子宫内膜增生的曲线下面积分别为0.700(95%CI:0.586~0.813,P<0.05)和0.933(95%CI:0.891~0.976,P<0.05)。结论TMEFF2基因CpG1位点甲基化异常与子宫内膜增生形成及增生组织进一步癌变密切相关,可作为潜在的预测因子。

TMEFF1对神经母细胞瘤细胞系增殖的调控

目的探究具有表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1)对神经母细胞瘤(NB)细胞系SN-K-BE(2)增殖和迁移的调控效应。方法RT-qPCR检测神经母细胞瘤细胞系SN-K-BE(2)、IMR32、SK-N-SH、SK-N-AS和正常细胞系MCF 10A、hTERT RPE-1中TMEFF1 mRNA表达量。利用小分子干扰RNA(siRNA)瞬时敲低MCF 10A、hTERT RPE-1细胞和SN-K-BE(2)NB细胞中TMEFF1表达,RT-qPCR检测TMEFF1 mRNA瞬时敲低效果后,结晶紫染色、实时无标记细胞分析(RTCA)检测细胞增殖;CellTiter-Glo(CTG)检测细胞活性。利用短发夹RNA(shRNA)稳定敲低正常细胞系和NB细胞系中TMEFF1表达,进一步通过集落形成实验、RTCA、CTG检测细胞增殖和活性,此外,通过免疫荧光检测Ki-67细胞阳性率,细胞划痕实验检测细胞迁移率。结果与正常细胞系相比,NB细胞系中TMEFF1 mRNA表达量显著较高(P<0.001)。敲低TMEFF1对正常细胞系增殖影响无统计学意义,但在SN-K-BE(2)细胞中敲低TMEFF1,RTCA和集落形成实验结果显示细胞增殖能力减弱(P<0.05),免疫荧光结果显示Ki-67阳性细胞率减少(P<0.001),CTG结果显示细胞活性降低(P<0.01),细胞划痕实验结果显示敲低组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01)。结论TMEFF1是一种特异在NB细胞中高表达的膜蛋白,TMEFF1敲低后不影响正常细胞系的增殖,但显著抑制NB细胞系的增殖、迁移,提示TMEFF1可能在NB发生发展中发挥重要作用,可能成为NB靶向治疗的潜在新靶点。