DMB衍生-高效液相色谱法测定重组人促卵泡激素中的唾液酸含量

目的建立采用4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)衍生-高效液相色谱-荧光检测器(HPLCFLD)法(DMB衍生法)同时测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中2种唾液酸组分N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量的方法。方法将DMB衍生法与邻苯二胺衍生-高效液相色谱法(邻苯二胺衍生法)进行对比研究,对DMB衍生法中的水解条件进行优化并确定最终方法为rhFSH原液经酸水解后,采用DMB进行衍生,经Agilent ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,采用荧光检测器检测。结果与邻苯二胺衍生法相比,DMB衍生法能够实现Neu5Gc与Neu5Ac相关杂质的有效分离。该方法Neu5Gc和Neu5Ac分别在0.5~5.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和25~250μg·mL^(-1)(r=0.9998)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;Neu5Gc和Neu5Ac的检测限分别为11.07、10.30 ng·mL^(-1),定量限分别为33.21、20.60 ng·mL^(-1),两者回收率分别为(99.63±1.33)%(n=9)和(100.62±1.58)%(n=9),RSD分别为1.3%(n=9)和1.5%(n=9)。结论该方法专属性强、灵敏度高、精密度和准确度良好,可用于准确测定rhFSH中唾液酸Neu5Gc和Neu5Ac的含量。

助孕者使用重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的量化评估

目的通过比较经验评估法和量化评估法在临床上的应用效果,探索评估助孕者是否具备使用重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的可靠方法,提高助孕者自行注射预充式注射笔的安全性。方法参考文献,建立助孕者重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力量化评估法,包含注射相关知识和注射操作两个量化评估表,均设置单项否定因素。在百色某三级甲等医院生殖医学中心,选取2020年1月—2023年3月体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)第一周期经护士同质化注射宣教指导,且促排卵第1天采用两种不同方法1次评估具重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的助孕者212例作为观察对象,采用经验评估法的104例设为对照组,采用量化评估法的108例设为观察组。比较两组本周期内下次复诊日的注射相关知识得分、注射操作得分及人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)注射日注射并发症发生情况。结果注射相关知识得分、注射操作得分、注射相关知识和注射操作20个项目中13个单项得分,观察组均明显高于对照组(P<0.001);观察组注射并发症低于对照组(P<0.05)。结论相比经验评估法,量化评估法更全面客观,能激励助孕者正性学习态度,其掌握注射相关知识和注射操作动作更正确规范,提高助孕者自行注射安全性;利用单项否定因素初步分流,对判断助孕者是否具备使用预充式注射笔自行注射能力具有临床实用价值。

重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表信效度检验

目的构建助孕者重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表,并进行信效度检验。方法通过参考文献、专家咨询形成初稿,经预调查结果修改初稿得到重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表终稿,包含注射相关知识和注射操作两个子表。在百色市某三级甲等医院生殖医学中心,选取2020年1月-2023年3月体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)第一周期采用评估表评估重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力的助孕者328例(531例次)作为调查对象。分析评估表的内部一致性信度(Cronbach’sα系数)、重测信度、条目水平的内容效度指数(item-level content validity index,I-CVI)、平均量表水平的内容效度指数(average scale-level content validity index,SCVI/Ave)、随机一致性概率(random consistency probability,Pc)、Kappa值,并进行层次分析、KMO和巴特利特球形检验(kaiser-meyer-olkin and Bartlett sphericity test,KMO和Bartlett球形检验)、探索性因子分析(exploratory factor analysis,EFA)和项目分析。结果评估表总体的Cronbach’sα系数为0.832,重测信度为0.885;各条目I-CVI为0.80~1.00,S-CVI/Ave为0.70~1.00,Pc为0.031~0.156,Kappa值为0.76~1.00,CR值为0;KMO值为0.792,近似χ^(2)值为4331.941(P<0.001);探索性因子分析共提取得到6个公因子,各条目共同度在0.424~0.934,累积方差解释率为75.604%;项目分析显示20项均具有良好的区分性(P<0.001)。结论重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表具有良好的信度和效度,可作为生殖医学专科护士对助孕者自行注射能力的测评工具。

来曲唑联合促卵泡激素在体外受精-胚胎移植 卵巢储备减退患者中的应用效果

目的分析来曲唑联合促卵泡激素应用于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中卵巢储备减退患者的效果。方法选取2021年1月至2022年8月韶关市妇幼保健院生殖中心收治的130例卵巢储备减退患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组(65例)与对照组(65例)。观察组患者月经周期第2天开始予来曲唑联合促卵泡激素,对照组采用促卵泡激素和拮抗剂醋酸西曲瑞克。比较两组的相关临床指标[促性腺激素(Gn)天数、Gn量、注射日促黄体生成素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E_(2))、内膜厚度、获卵数、受精率、优胚率、新鲜胚胎移植率、临床妊娠率、着床率]及不良反应。结果两组的注射日P、E_(2)、子宫内膜厚度、获卵数、受精率、优胚率、新鲜胚胎移植率、临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组的Gn天数、Gn总量少于对照组,注射日LH高于对照组,着床率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在卵巢储备减退患者临床治疗中,选择曲唑联合促卵泡激素可以达到与拮抗剂方案相同的治疗结局,但使用更少的促排卵药物,可为患者降低助孕治疗的经济成本。

论促卵泡激素与男性不育的关系

据世卫组织报道,全球至少有4800万对夫妇和1.86亿人患有不育症,其中男性因素占比约30%~40%。随着生活习惯和工作环境的变化可能导致男性精液质量下降,从而使男性生育能力下降。导致男性不育的原因有很多方面,主要包括感染、遗传、免疫及内分泌疾病等,诸多因素中,生殖激素分泌紊乱是导致男性不育的重要原因之一,体内生殖激素水平的动态平衡是男性保持正常生殖功能的前提。本研究通过分析促卵泡激素与男性不育的关系,对男性不育的发病机制进行探索,为临床病因分析及治疗提供理论依据。

牛促卵泡激素α亚基cDNA的克隆与序列分析

从牛脑垂体中提取总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，反转录获得ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增获得长为３８０ｂｐ的牛促卵泡激素α亚基ｃＤＮＡ片段，将它克隆于ｐＵＣ１９中，进行序列分析，结果表明：所克隆的α亚基基因编码区序列与Ｅｒｗｉｎ所发表的序列基本相同，仅编码第２４位赖氨酸的密码有差异，同时将所获基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列与人、啮齿类的同类基因相比较，具有很高的同源性．

血清雌二醇、促卵泡激素、黄体生成素在中枢性性早熟女童诊断中的价值

目的探讨血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)在中枢性性早熟女童诊断中的价值。方法选取2020年1月至2022年12月于淄博市张店区妇幼保健院就诊的30例中枢性性早熟女童为观察组,并选取同期同年龄段的30例健康女童为对照组。比较两组血清E2、FSH、LH水平,并通过受试者操作特征(ROC)曲线分析血清E2、FSH、LH水平对中枢性性早熟的诊断价值。结果观察组血清E2、FSH、LH水平均高于对照组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清E2、FSH、LH联合检测的曲线下面积高于单一检测(P<0.05)。结论血清E2、FSH、LH联合检测在中枢性性早熟女童诊断中的价值较高,临床可推广应用。

两种不同来源促卵泡激素对早卵泡期长效长方案不同体重指数患者IVF/ICSI-ET临床结局的影响

目的:比较不同体重指数(BMI)预期卵巢正常反应患者在早卵泡期长效长方案(长长方案)体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)中应用尿促卵泡激素(uFSH)和基因重组人促卵泡激素(rFSH)临床结局的差异。方法:回顾性收集2015年9月至2019年12月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心行长长方案IVF/ICSI-ET助孕且预期卵巢正常反应的患者,按照BMI分为偏瘦或正常组(BMI<24 kg/m2,1056例)、超重组(24 kg/m2≤BMI<28 kg/m2,554例)和肥胖组(BMI≥28 kg/m2,112例)。在3组不同BMI的患者中,分别对使用uFSH或rFSH进行超促排卵IVF/ICSI-ET助孕的两组患者以年龄、窦卵泡数、不孕年限、基础FSH和抗米勒管激素(AMH)进行1∶1倾向性评分匹配,对匹配后患者的数据进行分析。比较两组患者Gn启动量、Gn时间、Gn总量、Gn费用,HCG日内膜厚度、LH、E2、P、≥14 mm卵泡数、获卵数、可利用胚胎数以及两组患者优质胚胎率、中重度卵巢过度刺激(OHSS)综合征发生率、胚胎着床率、临床妊娠率、流产率、活产率、累积妊娠率和累积分娩率的差异。结果:3组不同BMI的患者rFSH组和uFSH组比较,获卵数、中重度OHSS发生率、临床妊娠率、活产率差异均无统计学意义(P>0.05),uFSH组的Gn启动量均高于rFSH组(P均<0.05),而Gn费用低于rFSH组(P<0.05);偏瘦或正常组和超重uFSH组的Gn总量均高于rFSH组(P<0.05);肥胖组中uFSH组的优质胚胎率(44.03%)高于rFSH组(32.10%),差异有统计学意义(P<0.001)。结论:uFSH的临床有效性不低于rFSH,控制性卵巢刺激有效性低于rFSH;uFSH成本低,更具有经济学优势;肥胖患者可能更适合选用uFSH进行超促排卵。

血清抗苗勒管激素和促卵泡激素水平在多囊卵巢综合征诊断中的应用价值

目的探讨血清抗苗勒管激素(AMH)和促卵泡激素(FSH)水平在多囊卵巢综合征(PCOS)诊断中的应用价值。方法选择45例PCOS患者为观察组,同期选择45例健康女性为对照组,检测两组AMH、FSH水平;比较观察组中不同症状患者的AMH、FSH水平。结果观察组AMH水平高于对照组,FSH水平低于对照组(P<0.05);观察组中有肥胖、卵巢多囊样变症状患者的AMH水平高于无症状患者,FSH水平低于无症状患者(P<0.05)。结论AMH和FSH水平诊断PCOS有较高临床应用的价值,值得应用与推广。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体表达的影响及机制

目的探讨左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周,用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢FSHR mRNA及蛋白的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养卵巢颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理因素后FSHR mRNA的表达水平。结果(1)围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达明显低于青年组(P<0.01),给予不同剂量左归饮处理后,FSHR表达均显著升高(P<0.01)。(2)培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,左归饮提取物可促进FSHR mRNA表达(P<0.01);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和福司考林(Forskolin)可进一步促进FSHR mRNA的表达(P<0.01),同时加入左归饮提取物和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein则能明显削弱左归饮的促进作用。结论左归饮可通过上调围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达,提高卵巢对卵泡刺激素的反应性,改善围绝经期卵巢功能。左归饮对FSHR mRNA表达的促进作用可能是通过激活腺苷酸环化酶-蛋白激酶A(cAMP-PKA)及酪氨酸蛋白激酶途径实现的。

超排卵时卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞促卵泡激素受体的表达

目的 :探讨促排卵周期卵巢对促性腺激素反应性与颗粒细胞促卵泡激素受体 (FSHR)表达的关系。方法 :根据取卵时卵泡发育数不同 ,将卵巢对促排卵药物的反应分为低反应型 (卵泡数≤ 3个 )、中反应型 (卵泡数 4～13个 )和高反应型 (卵泡数≥ 14个 ) ,分别为 11例、15例和 13例。采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)测定 3种反应类型的卵泡颗粒细胞 FSHR m RNA的表达量。结果 :低反应型 FSHR m RNA表达量显著低于中、高反应型 (相对积分值分别为 0 .5 4± 0 .0 7、0 .90± 0 .17和 1.2 0± 0 .4 5 ,P<0 .0 5 )。结论 :卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞FSHR m RNA的表达量高低有关。

东北虎促卵泡激素和促黄体激素基因的克隆及其序列分析

本研究首次从东北虎 (Pantheratigrisaltaica)脑垂体提取总RNA ,利用RT PCR技术扩增出东北虎垂体促性腺激素α亚基、促卵泡激素 (FSH) β亚基和促黄体激素 (LH) β亚基的编码区序列 ,并进行克隆、测序和比较分析。结果表明 ,其α亚基、FSHβ亚基、LHβ亚基基因的开放阅读框分别为 36 3bp、 390bp和 4 2 9bp ,分别编码 12 0、 12 9和 14 2氨基酸的前体蛋白。与已发表的人、牛、绵羊、猪、大鼠、小鼠等物种相应序列比较 ,无论在核苷酸水平 ,还是在氨基酸水平都显示出较高的同源性 (6 4 7%～ 96 6 %) ,其中与猪的同源性最高(86 %～ 96 6 %)。东北虎的基因序列还具有其明显的特异性 ,首次发现LHβ亚基cDNA编码的前体蛋白在信号肽部分比其它物种相应序列多一个亮氨酸残基 (Leu)。

促卵泡激素受体结合抑制剂抑制小鼠卵巢发育

目的探讨不同浓度的促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI)对小鼠卵巢发育、生殖激素分泌及其蛋白表达的影响。方法给FRBI组小鼠分别肌肉注射20、30和40 mg/kg FRBI;促卵泡激素(FSH)组注射10 IU/kg FSH;对照组(CG)注射0.2 mL 0.9%氯化钠溶液,每组均连续注射5 d。精确称量每只小鼠体质量和双侧卵巢质量;测定卵巢组织切片中皮质厚度(OCT)和次级卵泡形态大小;ELISA测定血清FSH浓度;Western blot检测卵巢FSH受体(FSHR)表达。结果实验第15天起,FRBI组小鼠卵巢质量低于CG和FSH组(P<0.05),以FRBI-30 mg组小鼠卵巢质量最低;FRBI组OCT、次级卵泡最大纵径(MLD)和最大横径(MTD)低于CG组和FSH组(P<0.05),FRBI-40 mg组小鼠卵巢的MLD和MTD值最低;第15天时,FRBI-30 mg组小鼠血清FSH的浓度最低;随着FRBI注射剂量的增加,卵巢中FSHR表达水平逐渐降低,FRBI组的FSHR蛋白水平明显低于FSH组(P<0.05)。结论 FRBI能抑制卵巢和卵泡发育,降低血清FSH浓度,下调卵巢FSHR蛋白表达水平。

籽鹅促卵泡激素α亚基基因的克隆、序列分析及其原核表达载体的构建

以雌性籽鹅脑垂体的总RNA为模板,利用特异性引物通过RT-PCR扩增获得长为363 bp的籽鹅促卵泡激素α亚基的cDNA片段,将扩增的促卵泡激素α亚基基因片段克隆至pMD18-T载体后进行测序。将测序结果与鸡、鹌鹑、火鸡、鼠、羊、牛等多种禽类和哺乳动物的该基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,这些物种促卵泡激素α亚基基因序列具有较高的保守性,其中与鸡、鹌鹑、火鸡的核苷酸同源性最高,均为95.9%,推导的氨基酸序列与鸡、鹌鹑、火鸡的同源性最高,均为97.5%。为了对克隆的籽鹅促卵泡激素α亚基基因功能研究提供基础,将籽鹅促卵泡激素α亚基基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体。

人促卵泡激素光激化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的利用光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)建立人促卵泡激素(hFSH)的快速检测试剂。方法使用2株配对的hFSH单克隆抗体,一株hFSH单克隆抗体用生物素标记,另一株hFSH单克隆抗体包被于受体微球上,与包被有链霉亲合素的供体微球共同构成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hFSH试剂分析敏感性和功能敏感性分别为0.09和0.12 U/L,线性测量范围为0.09～192.00 U/L,试剂的分析内变异系数(CV)和分析间CV分别为4.2%～7.1%和7.5%～8.3%,均<10.0%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.16%、0.08%和0.02%。100份临床血清样本用本试剂与西门子Immulite 2000促卵泡生成激素化学发光(CLIA)检测试剂盒检测,其相关系数为0.979(P<0.001)。结论自制hFSH AlphaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本hFSH浓度的测定。

重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究

目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。

促卵泡激素的径向色谱纯化工艺

比较了径向离子交换色谱与经典离子交换色谱在纯化工艺放大过程中的分离效果 ,证实了径向色谱比经典色谱更适合于促卵泡激素 (FSH)的纯化 ,并建立了适合于大规模生产FSH的径向色谱纯化新工艺。纯化后FSH的比活性为 180IU/mg ,活性回收率为 5 6 % 。

补肾养精汤与活血汤周期疗法治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征疗效及对血清促卵泡激素的影响

目的探讨补肾养精汤与活血汤周期疗法治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征(PCOS)患者疗效及对血清促卵泡激素的影响。方法将72例肾虚血瘀型PCOS患者随机分为2组,对照组36例给予克罗米芬治疗,研究组36例在对照组治疗基础上加用补肾养精汤与活血汤周期疗法,2组均持续治疗3个月。记录2组治疗前后中医证候积分,比较2组治疗后临床疗效,观察2组治疗前后血清促卵泡素激素(FSH)以及卵巢B超检查指标水平变化情况。结果治疗后,研究组中医证候积分明显低于对照组(P<0.05),治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);2组FSH均明显升高(P均<0.05),且研究组明显高于对照组(P<0.05);2组卵泡数目和卵巢体积均明显降低(P均<0.05),且研究组均明显低于对照组(P均<0.05)。结论补肾养精汤与活血汤周期疗法治疗肾虚血瘀型PCOS患者疗效好,可升高血清促卵泡激素水平,值得临床推广应用。