甲基强的松龙对脊髓损伤后卵磷脂胆固醇脂酰转移酶基因表达的影响

目的研究甲基强的松龙对脊髓损伤后卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)基因表达的影响。方法SD大鼠30只,体重200～250 g,雌雄不拘。随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)、脊髓损伤+大剂量甲基强的松龙组(甲基强的松龙组)。每组10只。损伤后24小时将损伤平面上下0.5 cm的脊髓组织切取,进行RT-PCR反应。结果假手术组在术后24小时LCAT mRNA的表达的相对丰度为0.6743±0.0043,损伤组在伤后24小时LCAT mRNA的表达相对丰度降至0.0589±0.0281,差异有统计学意义(P<0.01)。甲基强的松龙组在伤后24小时LCAT mRNA的表达的相对丰度为0.7036±0.2225,与损伤组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论大剂量甲基强的松龙能促进LCAT的表达,发挥保护作用,减少脊髓继发损伤。

巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合

目的探讨脂肪分化相关蛋白是否与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶相互结合。方法 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6 h,使用逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹分析技术检测脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA及蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶是否相互结合。结果随着氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞孵育时间的延长,逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析显示,脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0 h相比,差异有显著性(P<0.05,n=3)。免疫共沉淀实验显示,RAW264.7细胞与氧化型低密度脂蛋白孵育0、0.5、1、3 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1结合,6 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1不结合;孵育0、0.5、1 h时脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶不结合,3、6 h时与中性胆固醇酯水解酶结合。结论在荷脂的RAW264.7细胞中脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1相互结合。脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶在细胞内脂质代谢中可能协同作用。

酯酰-胆固醇酯酰转移酶亚型与动脉粥样硬化

巨噬细胞或者平滑肌细胞聚集,吞噬脂质后形成泡沫化细胞是动脉粥样硬化病变的一个起始环节。酯酰-胆固醇酯酰转移酶(ACAT)是细胞内唯一催化胆固醇酯化的酶,存在ACAT1和ACAT2两种亚型。本文就其两种亚型在动脉粥样硬化中的作用及其调控因素作一综述。

脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。

肝炎患者血清胆固醇脂酰转移酶检验的临床意义

测定了196例病毒性肝炎患者血清卵磷脂，胆固醇脂酰转移酶（LCAT）活性，结果表明：急性肝炎（72．2±15.3nmol/ml.h^-1),慢性肝炎（60．4±14.7nmol/ml.h^-1)，重型肝炎（51．4±10.5nmol/ml.h^-1)及肝炎后肝硬化（50．6±10.9nmol/ml.h^-1)，均较正常值（104．11±11.4nmol/ml.h^-1)显著降低（P＜0．01）。非肝炎（107．8±13.1nmol/ml.h^-1)无升高。相关分析表明：除肝硬化组外，LCAT变化与丙氨酸转氨酶（ALT）变化一致，两者显著负相关，LCAT异常率高于ALT（P＜0．01）。结果表明：LCAT可作为一项反映肝功能损害程度的指标。

健脾降脂中药对脾失健运膏脂转输障碍大鼠肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响

目的:观察健脾降脂中药对脾失健运膏脂转输障碍大鼠肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响,探讨健脾降脂中药干预胆固醇代谢的作用机制。方法:60只大鼠随机分为空白对照组、模型组、健脾降脂治疗组。采用劳倦过度加饮食不节结合高脂饲料喂饲造模法,治疗组予健脾降脂中药日一次灌胃,空白对照组、模型组给予等体积的生理盐水灌胃。全自动生化分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。油红O染色观察肝脏脂质沉积。采用实时定量RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠肝组织B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、肝低密度脂蛋白受体(LDL-R)、卵磷脂胆固醇酯酰基转移酶(LCAT)等基因mRNA和蛋白水平。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠血清TC、LDL-C水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05),肝细胞中见大量脂质沉积,肝脏LDL-R、SR-BⅠ、LCAT基因表达显著下调。与模型组相比,健脾降脂治疗组大鼠TC、LDL-C显著下降,HDL-C显著升高,肝细胞中脂质沉积明显减少,肝脏LDL-R、SR-BⅠ、LCAT基因表达显著上调。结论:健脾降脂中药具有调节血脂的作用,其作用机制可能与调控肝组织胆固醇代谢相关基因表达有关。

健脾降脂中药对脾失健运膏脂转输障碍大鼠肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响

目的观察健脾降脂中药对脾失健运膏脂转输障碍大鼠肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响，探讨健脾降脂中药干预胆固醇代谢的作用机制。方法60只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和健脾降脂治疗组，采用劳倦过度加饮食不节结合高脂饲料喂饲造模法，治疗组予健脾降脂中药日一次灌胃，正常组、模型组给予等体积的生理盐水灌胃。全自动生化分析仪检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）和高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）水平。HE染色观察大鼠肝脏结构变化，油红0染色观察肝脏脂质沉积。采用实时定量RT—PCR和Westernblot技术检测大鼠肝组织B类I型清道夫受体（sR—BI）、肝低密度脂蛋白受体（LDLR）、卵磷脂胆固醇酯酰基转移酶（LCAT）等基因mRNA和蛋白水平。结果与空白对照组相比，模型组大鼠血清TC、LDLC水平显著升高（P〈0．05），HDLC水平显著降低（P〈0．05），肝细胞中见大量脂质沉积，肝脏LDLR、sR．BI、LCAT基因表达显著下调。与模型组相比，健脾降脂治疗组大鼠TC、LDLC显著下降，HDLC显著升高，肝细胞中脂质沉积明显减少，肝脏LDLR、sR．BI、LCAT基因表达显著上调。结论健脾降脂中药具有调节血脂的作用，其作用机制可能与调控肝组织胆固醇代谢相关基因表达有关。

妊娠期高脂血症孕妇高密度脂蛋白胆固醇逆向转运功能的变化

目的观察妊娠期高脂血症孕妇的高密度脂蛋白(HDL)胆固醇逆向转运功能的变化。方法选取21例妊娠期高脂血症孕妇、21例妊娠期正常孕妇,采用ELISA法检测其血清HDL胆固醇逆向转运功能指标腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、载脂蛋白A1(ApoA-1)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP),并进行对比分析。结果妊娠期高脂血症孕妇血清ABCA1、Apo A-1、LCAT、CETP水平分别为(1.19±0.68)ng/mL、(0.80±0.62)μg/mL、(0.92±0.30)μmol/L、(621.48±320.31)ng/mL,妊娠期正常孕妇血清ABCA1、ApoA-1、LCAT、CETP水平分别为(2.30±1.56)ng/mL、(2.18±1.78)μg/mL、(2.19±1.87)μmol/L、(968.94±714.97)ng/mL,两者各指标相比,P均<0.05。结论妊娠期高脂血症孕妇的HDL胆固醇逆向转运功能下降,是妊娠期高脂血症的发病机制,血清ABCA1、Apo A-1、LCAT、CETP可以作为妊娠期高脂血症的生物标志物。

巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢与动脉粥样硬化

巨噬细胞源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化形成和发展中的早期变化。巨噬细胞向泡沫细胞的转变与巨噬细胞清道夫受体介导脂蛋白的吸收,ATP结合盒转运子介导胆固醇的流出及细胞内胆固醇的代谢机制相关。对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢的研究,将为防治动脉粥样硬化寻找新的突破口。

降胆固醇药Ezetimibe的发现——基于受体外的药物设计新方法

综述新型降胆固醇药Ezetimibe的设计与发现,着重介绍对其先导物SCH48461及体内代谢物的药理活性研究和基于SCH48461活性代谢物及软、硬药理论的药物设计过程,展现了一种完全脱离受体模型、基于受体外的药物设计新方法。

酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1在退行性瓣膜钙化灶周围的表达

脂酰辅酶A：胆固醇酯酰转移酶1（ACAT1）是细胞内胆固醇代谢重要的限速酶。我们推测ACAT1可能参与退行性主动脉瓣疾病的发生发展。 一、资料与方法 1．一般资料：收集2012年10月至2013年10月在海南省人民医院心脏外科因退行性主动脉瓣膜行手术切除的主动脉瓣标本30例[其中男17例，女13例，年龄（55±6）岁]，因夹层动脉瘤行Bentall手术切除正常主动脉瓣标本7例[男4例，女3例，年龄（41±8）岁]。所有组织标本均经患者及家属知情同意后采集，研究方案获医院伦理委员会批准。

IL-1通过PKC/MAPK激活蛋白激酶通路上调泡沫细胞ACAT-1的表达及活性

目的研究白细胞介素1(IL-1)是否通过蛋白激酶C/丝裂原激活蛋白激酶(PKC/MAPK)信号通路上调泡沫细胞中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)的表达及活性。方法复苏并培养人单核细胞白血病细胞系/THP-1细胞,与200 nmol/L乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)共孵育48 h,再与氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)共孵育24 h,油红O染色观察胞质内脂质沉积;分别以非放射性酶法和Western blot检测细胞中PKC和MAPK活性;加入PKC和MAPK抑制剂后,以Western blot及液相闪烁计数法检测ACAT-1的蛋白表达及酶活性。结果与PMA共孵育48 h后,THP-1细胞逐渐伸出突起,由圆形、悬浮式生长转变为多角形、梭形,呈阿米巴样贴壁生长;经Ox-LDL诱导24 h后,油红O染色胞质内可见大量吞噬的脂质小滴。与泡沫细胞组相比,泡沫细胞加IL-1组PKC活性、MAPK活性、ACAT-1蛋白表达及活性增加(P<0.05);ACAT-1蛋白表达由4.92±0.11增至5.95±0.12(P<0.05);PKC抑制剂和MAPK抑制剂能显著抑制IL-1上调ACAT-1表达(P<0.05)及活性(P<0.05)的作用。结论 IL-1上调泡沫细胞ACAT-1表达及活性,其作用是通过PKC/MAPK信号通路途径实现的。

西红花酸对大鼠血浆胆固醇的调节作用及其机制研究

目的:探讨西红花酸对高胆固醇血症大鼠血浆胆固醇的影响及其机制。方法:建立大鼠高胆固醇血症模型,观察西红花酸对胆固醇吸收、合成、转化等方面的影响。同时,建立细胞模型,考察西红花酸对内源性胆固醇合成的影响。结果:西红花酸能降低血浆总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度及卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT)、7α-羟化酶(CYP7A1)活性及mRNA表达,降低HMG-COA还原酶(HMG-CoAR)活性及mRNA表达;增加胆汁酸排泄。体外试验显示,西红花酸可抑制内源性胆固醇的合成。结论:西红花酸能降低大鼠血浆胆固醇水平,其机制可能是抑制内源性胆固醇合成及促进胆固醇向胆汁酸转化及排泄。

马齿苋脂肪油对动脉粥样硬化大鼠胆固醇逆向转运相关基因表达的影响

目的探讨马齿苋脂肪油有效成分对肝脏卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT)、载脂蛋白AI(apoAI)和高密度脂蛋白受体(SR-BI)基因表达的干预作用,分析马齿苋调节胆固醇逆向转运(RCT)通路的分子机制。方法健康雄性SD大鼠24只,随机分为模型组、多烯康组、马齿苋组、正常组,每组6只。应用高脂高胆固醇膳食诱导建立动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,用定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定LCAT、apoAI及SR-BI mRNA表达量,以免疫比浊法、沉淀法测定血清apoAI、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果模型组大鼠肝脏LCAT mRNA和apoAI mRNA的表达量明显下降,分别为0.43±0.20、2.33±0.35,与正常组(分别为1.49±0.32、6.30±0.82)、多烯康组(分别为1.15±0.16、4.32±0.69)、马齿苋组(分别为1.12±0.12、4.21±0.76)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠血清apoAI([0.15±0.03)g/L]和HDL-C水平([0.53±0.25)mmol/L]明显下降,与马齿苋组([0.39±0.09)g/L、(0.86±0.04)mmol/L]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。除正常组外,多烯康组、马齿苋组、模型组肝脏LCAT mRNA表达量与HDL-C水平均呈明显的正相关(r值分别为0.935、0.927、0.892,P<0.01)。模型组大鼠肝脏SR-BI mRNA水平(1.33±0.57)下降,马齿苋组(3.20±0.41)高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在转录水平阻抗高脂高胆固醇负荷下调大鼠肝脏LCAT和apoAI mRNA以及SR-BI mRNA表达的作用,促进RCT过程是马齿苋改善高脂血症、抗动脉粥样硬化的重要分子机制。

高脂饮食豚鼠高密度脂蛋白代谢的特点

目的研究豚鼠高脂饮食后高密度脂蛋白代谢的特点,并与大鼠进行比较。方法将豚鼠和大鼠分别随机分为正常组(NC)和高脂组(HF),正常组均给予普通饲料,高脂组给予高脂饲料诱导10周后,测定血清LDL-C、HDL-C水平,HDL3/HDL2比值和LCAT、CETP的表达;采用real-time RT-PCR方法检测肝脏SR-BI表达的变化。结果与正常组相比,豚鼠高脂组血清HDL-C水平显著升高,高密度脂蛋白亚型HDL3/HDL2的比值升高,血清CETP表达均显著增加,血清LCAT表达下降,肝脏SR-BI mRNA表达水平是正常组的2.27倍。而相同高脂饲料条件下,大鼠的上述指标均无明显变化。结论豚鼠摄入高脂饮食后HDL代谢与大鼠有所不同,主要表现为血清HDL-C升高,肝脏SR-BI受体表达增加,高密度脂蛋白亚型组分发生变化,大颗粒HDL2含量相对减少,小颗粒HDL3堆积,其机制与血清CETP、LCAT的变化密切相关。

豚鼠高脂血症模型的建立及机制探讨

目的建立豚鼠高脂血症模型,探讨模型形成机制并与大鼠模型进行比较。方法豚鼠模型和大鼠模型1组用低胆固醇(0.1%)饲料诱导,大鼠模型2组用高胆固醇(1%)饲料诱导,连续诱导4周。第3、4周分别取血测定血清脂质水平及CETP表达,4周末剖取肝脏检测肝脏FC、TG、ACAT、CYP7A1等指标。动态观察两种动物形成高脂血症状况。结果与对照组比较,豚鼠模型组于第3周血清TC、LDL-C、TG分别升高3.92倍、3.75倍和1.24倍,4周末血清CETP表达、肝脏ACAT活性明显增加,但肝CYP7A1水平变化不大。大鼠模型1组经低胆固醇饲料诱导4周,血脂水平变化不明显,模型2组经高胆固醇饲料诱导于第3周血清TC、LDL-C分别升高1.24倍和1.54倍,明显低于同期豚鼠模型组,4周末大鼠两个模型组肝CYP7A1活性显著增强,血清TG、CETP水平、肝ACAT活性均未见明显变化。结论豚鼠对高脂饲料较大鼠敏感,是一种比大鼠更理想的高血脂模型动物,模型形成机制与血清CETP表达、肝ACAT及CYP7A1活性变化密切相关。