三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白

鸡卵类黏蛋白(hen’s egg ovomucoid,HOVM)是鸡蛋清中最重要的过敏原蛋白,探讨三步沉淀(一步三氯乙酸沉淀以及两步硫酸铵盐析沉淀)从鸡蛋清中提取并纯化HOVM的工艺条件,并利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)技术检测纯化效果。结果表明:用等体积去离子水稀释的鸡卵清液加入质量分数10%三氯乙酸去除大部分杂蛋白后,所得上清液加入硫酸铵至终饱和度50%,盐析沉淀进一步去除非HOVM的杂蛋白,上清液中最后再追加硫酸铵至终饱和度80%,离心所得沉淀再经过透析冻干即为高纯度的HOVM;HPLC(检测波长220 nm)检测所获HOVM的纯度为99.202%,此工艺条件下得到HOVM的提取率约为27.05%。

鸡卵类黏蛋白结构与性质研究进展

鸡卵类黏蛋白是鸡蛋中最主要也是过敏原性最强的过敏原蛋白。本文总结该蛋白的结构,包括氨基酸序列、糖基组成、二硫键位置、二级结构以及组成该蛋白的3个结构域,并描述其理化性质,最后着重分析讨论其过敏原性,特别是其分子结构中二硫键、糖基和结构域等因素与过敏原性之间的内在联系。

抗鸡蛋卵类黏蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗鸡蛋主要过敏原卵类黏蛋白的单克隆抗体。方法利用鸡蛋卵类黏蛋白(ovm)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双抗体夹心ELISA法检测食品中的鸡蛋过敏原。结果获得4株可稳定分泌鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8,2H5,3A7,4G4,其Ig亚型均为IgG1。且4株单抗效价均在10-8以上。ELISA和Western blotting分析表明该4株单抗均能特异性识别卵类黏蛋白,并且建立双抗体夹心ELISA的方法可以准确的检测出食品中鸡蛋过敏原的存在。结论成功制备了4株高效价的鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,为建立卵类黏蛋白检测及纯化方法奠定了基础,也可为食品中鸡蛋过敏原的检出提供依据。

鸡卵类黏蛋白过敏原性的在体与离体实验

通过观察卵类黏蛋白引起的豚鼠过敏性休克以及对致敏豚鼠离体肠平滑肌过敏性收缩反应(SchultzDale反应)的影响,研究鸡卵类黏蛋白的过敏原性,并初步建立其过敏实验的动物模型。结果显示:1)在实验观察剂量下,1 mg/mL卵清白蛋白组豚鼠100%出现过敏性休克并死亡,全身性过敏反应呈极强阳性(4分);卵类黏蛋白组豚鼠的反应与卵白蛋白组相似(P>0.05),大部分动物出现死亡,全身性过敏反应100%呈阳性(2.04~3.68分);不同剂量的卵类黏蛋白引起的豚鼠全身过敏反应呈现出剂量依赖性,当致敏剂量为4 mg/mL时,全身性过敏反应评分为3.68。2)卵类黏蛋白对Schultz-Dale反应的影响也与卵清白蛋白相似,使致敏的肠平滑肌收缩活动明显加强;以2 mg/mL致敏时,豚鼠离体肠收缩力改变率最高,为538.5%。3)不同致敏剂量卵类黏蛋白组豚鼠血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G水平较对照组明显升高,且呈剂量依赖性。由此建立的卵类黏蛋白在体与离体过敏实验的动物模型可用以检测卵类黏蛋白过敏原及评价其过敏原的消减效果。

加热对鸡卵类黏蛋白结构及其与IgG结合能力的影响

鸡卵类黏蛋白(hen's egg ovomucoid,HOVM)是存在于鸡蛋卵清中的一种致敏蛋白,而热处理是常用的一种蛋制品的加工方式。通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法、圆二色谱法、8-苯胺-1-萘磺酸(8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)荧光探针法以及相关性分析法解释热处理对HOVM与免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合能力和结构的影响。结果表明:随着热处理强度(包括温度和时间)的增加,HOVM与IgG的结合能力不断下降,二级结构中的α-螺旋和β-折叠含量呈下降趋势,β-转角和无规则卷曲的含量呈上升趋势,表面疏水性指数在处理强度较低的情况下会提高,处理强度较高的情况下会下降,HOVM结合ANS后的最大荧光波长数(λmax)出现蓝移以及数值变化显示HOVM结构在热处理的作用下先变得松散,随后处理温度的攀升可能会进一步导致HOVM蛋白发生凝聚。

双抗夹心酶联免疫(ELISA)方法测定卵类黏蛋白

卵类黏蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,因此建立相应的检测方法对保障消费者健康非常重要。为此本试验分别制备了卵类黏蛋白特异性兔多克隆抗体和鼠多克隆抗体,对不同检测条件进行优化,最终建立了一种用于定量分析卵类黏蛋白的双抗夹心ELISA方法,并对检测方法的精密度进行考察。结果表明,通过对封闭液、捕获抗体包被量和检测p H的优化,该方法的最低检出限达到(0.274±1.27)ng/m L,且具有良好的特异性以及检测精密度。因此,所建立的方法可用于食品中卵类黏蛋白的定量检测。

鸡蛋中重要功能蛋白的研究与应用展望

鸡蛋是一种最为普遍的食物过敏原。蛋清是引起过敏的主要因素,目前已经证实蛋清中含有4种蛋白质具有过敏原性,分别是卵类黏蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶。其中,卵类黏蛋白是引起免疫反应的成分,当体内摄入卵类黏蛋白后,血液中会产生更多的IgG与IgE来对抗它。卵白蛋白是蛋清中的主要蛋白质,含有8种人体所需的氨基酸,以及人体必需的金属微量元素。

β-甘露糖苷酶酶解对HOVM结构与胰蛋白酶抑制活性的影响

通过苯酚-硫酸法、8-苯氨基-1-萘磺酸(8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)荧光探针法以及圆二色谱法检测分析β-甘露糖苷酶酶解处理鸡卵类黏蛋白(hen-egg ovomucoid,HOVM)上的糖基部分后,HOVM中糖基含量变化与蛋白的表面疏水性、二级结构组成以及HOVM对胰蛋白酶抑制活力之间的关系。研究结果表明:β-甘露糖苷酶酶处理降低了HOVM中糖基部分的含量,会逐步提高HOVM对胰蛋白酶的抑制活力,同时对于二级结构组成的影响不是很显著,但是随着糖基含量的降低,HOVM中无规则卷曲的含量降低与胰蛋白酶的抑制率逐渐增高具有显著的相关性。

流感病毒裂解疫苗中鸡胚来源物质残留量分析

接种流感疫苗是预防流感发生和控制其流行的一种最有效的手段,保护效率约为60%~90%,每年全球可使约3亿人免受流感病毒的侵袭,在降低高危人群的发病率、减少并发症和死亡率等方面起重要作用[1]。目前普遍使用的季节性流感疫苗主要是针对H1N1、H3N2以及B型流感病毒的三价裂解疫苗,该类疫苗大多采用鸡胚生产,根据其生产工艺特点,各厂家生产的流感疫苗或多或少都残留有鸡胚来源的杂蛋白[2]。

色谱法在鸡蛋清主要过敏原分离纯化中研究进展

鸡蛋营养丰富,同时也是引起人体过敏的主要食物之一。蛋清中含有4种主要过敏原,包括卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白和溶菌酶。概述了鸡蛋中4种主要过敏原的理化特性及色谱法纯化过敏原的研究进展,旨在为规模化分离得到高纯度和高活性的过敏原提供参考。