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应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒
被引量:
16
1
作者
张颖
刘长军
+3 位作者
秦运安
张艳萍
张晓巍
郝永清
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期46-51,共6页
本研究建立了鸡马立克氏病血清1型病毒(MDV1)绝对定量检测方法。研究中选择MDV1特有的Meq基因的一段保守序列作为检测对象,将其克隆到质粒载体中,作为阳性标准品;同时将管家基因-鸡卵铁转蛋白(Ovo)特异性基因片段克隆到质粒载体上作为...
本研究建立了鸡马立克氏病血清1型病毒(MDV1)绝对定量检测方法。研究中选择MDV1特有的Meq基因的一段保守序列作为检测对象,将其克隆到质粒载体中,作为阳性标准品;同时将管家基因-鸡卵铁转蛋白(Ovo)特异性基因片段克隆到质粒载体上作为内参照的标准品。经荧光定量PCR(FQ-PCR)法扩增获得MDV1的FQ-PCR两条标准曲线,建立了MDV1双重FQ-PCR检测方法。应用该方法绝对定量检测了实验攻毒鸡及吉林省某地发病鸡只的羽髓、淋巴细胞等组织样本中单位细胞病毒拷贝数,并与琼脂扩散(AGP)、常规PCR等检测方法进行比较。结果表明,不论实验攻毒鸡还是自然发病鸡,羽髓中病毒富含量均高于其它组织,每百万宿主细胞内病毒含量为107~108拷贝;FQ-PCR检测MD发病鸡只的阳性率高于AGP,达100%;该方法的灵敏度比常规PCR检测高10~100倍,在单位细胞内可灵敏地检测到2.78个拷贝的病毒。该方法可以在不同的样品中有效的绝对定量检测MDV1。
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关键词
实时荧光定量PCR
马立克氏病病毒
MEQ
基因
卵铁转蛋白基因
下载PDF
职称材料
题名
应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒
被引量:
16
1
作者
张颖
刘长军
秦运安
张艳萍
张晓巍
郝永清
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
内蒙古农业大学动物科学与医学学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期46-51,共6页
文摘
本研究建立了鸡马立克氏病血清1型病毒(MDV1)绝对定量检测方法。研究中选择MDV1特有的Meq基因的一段保守序列作为检测对象,将其克隆到质粒载体中,作为阳性标准品;同时将管家基因-鸡卵铁转蛋白(Ovo)特异性基因片段克隆到质粒载体上作为内参照的标准品。经荧光定量PCR(FQ-PCR)法扩增获得MDV1的FQ-PCR两条标准曲线,建立了MDV1双重FQ-PCR检测方法。应用该方法绝对定量检测了实验攻毒鸡及吉林省某地发病鸡只的羽髓、淋巴细胞等组织样本中单位细胞病毒拷贝数,并与琼脂扩散(AGP)、常规PCR等检测方法进行比较。结果表明,不论实验攻毒鸡还是自然发病鸡,羽髓中病毒富含量均高于其它组织,每百万宿主细胞内病毒含量为107~108拷贝;FQ-PCR检测MD发病鸡只的阳性率高于AGP,达100%;该方法的灵敏度比常规PCR检测高10~100倍,在单位细胞内可灵敏地检测到2.78个拷贝的病毒。该方法可以在不同的样品中有效的绝对定量检测MDV1。
关键词
实时荧光定量PCR
马立克氏病病毒
MEQ
基因
卵铁转蛋白基因
Keywords
real-time FQ-PCR
Marek's disease virus
Meq gene
ovotransferrin gene
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒
张颖
刘长军
秦运安
张艳萍
张晓巍
郝永清
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
16
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