离子交换色谱法分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白

建立了高效、经济、大规模获得鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的生产方法。在对传统的水稀释法改良的基础上,结合聚乙二醇沉淀与离子交换色谱进行IgY的分离纯化。结果显示,用8倍无菌水稀释蛋黄液,用0.1 mol/L HCl调节pH为5.2,在4℃下静置8 h,于5 000×g力离心可得上清粗IgY液,经测定回收率可达93.47%。然后用6%聚乙二醇沉淀后经DEAE-Toyopearl 650 M离子交换纯化,最佳的纯化条件:0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7)平衡上样,0.075 mol/L PBS(pH 7)洗脱。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果显示所得的IgY的纯度为95.02%,活性保持率高达73.77%。本研究弥补了传统分离方法不能同时达到高纯度和高回收率的缺点,且可用于大规模生产。

鸡卵黄免疫球蛋白的研究进展

用抗原免疫鸡，并从鸡卵黄中获取大量持异多克隆抗体IgY已越来越受到人们的重视。与哺乳动物抗体IgG相比，鸡IgY具有许多突出而重要的优点，这些优点使IgY可广泛应用于免疫检测、生化检测及口服防治某些疾病。近年来，人们对IgY的分子结构、功能及性质进行了深入研究，对IgY的分离、纯化方法作了许多探索，并在应用研究领域做了大量工作。

鸡卵黄免疫球蛋白的分离制备研究

实验研究了从高免鸡卵黄中分离纯化免疫球蛋白(IgY)的方法。确定最优条件为:卵黄十倍稀释,pH5.3,-18℃冻结6h,4℃解冻;添加3%硅藻土进行微滤;采用超滤浓缩五倍;再用45%饱和硫酸铵(pH5.3)盐析;沉淀重溶后经DEAE-Sepharose F.F.柱层析分离纯化。结果表明,用此方法可以从高免鸡蛋中得到电泳纯IgY,总活性回收率达到64.16%。

卵黄免疫球蛋白提取和纯化方法

卵黄免疫球蛋白是一种产量高、成本低、易于生产、应用广泛的多克隆抗体。在生产中卵黄抗体的提纯方法不一,提取和纯化的工艺直接影响卵黄抗体的质量。本文对多种卵黄抗体提取和纯化方法进行综述,并比较了各方法的优缺点,为其在生产中的应用提供理论指导。

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响

目的观察鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响。方法用鸡卵黄免疫球蛋白IgY经口灌胃,观察小鼠单核吞噬细胞碳粒廓清率和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力。结果鸡卵黄免疫球蛋白IgY具有提高小鼠单核吞噬细胞碳粒廓清率及增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力。结论鸡卵黄免疫球蛋白IgY能提高小鼠单核吞噬细胞吞噬功能,具有增强小鼠免疫功能的作用。

卵黄免疫球蛋白的性质与特点

卵黄免疫球蛋白是一种产量高、成本低、易于生产、应用广泛的多克隆抗体,其稳定性良好,具有耐热、耐酸、耐碱和一定的抗酶解能力,因而利于临床保存和使用。卵黄抗体不能激活哺乳动物的补体系统,不与哺乳动物的Fc受体、类风湿因子(RF)、葡萄球菌蛋白A(SPA)、葡萄球菌蛋白G(SPG)结合,作为诊断试剂具有较高的敏感性。卵黄抗体具有良好的免疫活性,作为防治药物具有见效快,疗效高,无毒副作用,无残留等优点。目前,卵黄抗体作为特异、高效、价廉的生物制剂,已在动物疾病的免疫诊断、预防和治疗中得到了应用,随着有关研究的不断深入,其应用前景将会更为广阔。

鸡卵黄免疫球蛋白的mPEG修饰及其稳定性研究

研究了单甲氧基聚乙二醇(mPEG)对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的化学修饰,并通过傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱和荧光光谱分析比较了修饰前后IgY的稳定性。首先用N-羟基琥珀酰亚胺活化的单甲氧基聚乙二醇(NHS-mPEG)对IgY进行化学修饰,确定了mPEG的最佳修饰条件,即IgY与mPEG摩尔比为1∶10、pH值为7、反应时间为1h,所得产物mPEG-IgY修饰率为20.56%,活性保持率为87.62%。其次通过光谱分析法对IgY以及mPEG-IgY的热稳定性和酸碱稳定性进行了研究。结果表明,70℃温育120min后,IgY的α-Helix,β-sheet,β-Turn,Random各二级结构含量由14.5%,42.1%,6.2%,37.2%变为1.6%,55.25%,5.8%,37.5%;mPEG-IgY的各二级结构含量由12.9%,42.7%,6.3%,38.1%变为3.1%,50.5%,7.2%,39.2%。同样酸碱处理后,mPEG-IgY比修饰前IgY所引起的二级结构变化更小。因此可以推断出IgY经过mPEG修饰后对温度、酸碱处理所引起的变性有着更强的稳定性。

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。

鸡卵黄免疫球蛋白在医学领域中的应用

卵黄免疫球蛋白(eggyolk immunoglobulin,IgY)是鸟类、两栖类和爬行类动物的主要免疫球蛋白。IgY稳定性好,具有不激活补体系统、不与类风湿因子和蛋白A、G结合等免疫学特性,且产量高、易提取纯化。该蛋白已广泛应用于兽医学、功能食品和生物制品等方面,且在疾病预防控制和治疗方面开发潜力广阔。本文就从IgY在生物学特性、提取、纯化,以及其在免疫诊断和免疫治疗方面的应用作一综述。

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离纯化的研究

对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离纯化进行了研究。工艺流程为:卵黄→8倍水稀释并搅拌10min→用HCl调pH至5.2后在4℃静置2h去沉淀→在上清夜中加入95%冰乙醇(-20℃)使终浓度为60%(v/v)→4℃搅拌20min后离心(22000r/min,4℃,25min)→收集沉淀并加入0.028mol/LNaCl溶液在4℃下过滤除去脂蛋白沉淀→收集的滤液用SDS-PAGE法进行纯化得纯度为98%的lgY。用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定,效果良好,此方法能保持免疫球蛋白的活性。

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量 ,SDS -PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量 12 .8mg/mL蛋黄液 ,抗体纯度达 95 %。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性 ,对酸碱具有一定的耐受力。结论WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY 。

卵黄免疫球蛋白对雏鸡生长性能和免疫机能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加卵黄免疫球蛋白（IgY）对雏鸡生长性能和免疫机能的影响。选取同一批出雏、体重相近的1日龄罗曼褐蛋鸡公雏240只,随机分为2组（对照组和试验组）,每组6个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在对照组饲粮基础上添加0.1%的IgY。试验期5周。分别于1、3、5周龄,每个重复选取接近该重复平均体重的试验鸡2只,称重、采血并用于血清免疫指标测定,然后取免疫器官、空肠食糜用于相关指标测定。结果表明：1）与对照组相比,试验组1、3、5周龄雏鸡平均日增重有增大的趋势（0.050.05）。3）试验组1周龄雏鸡血清球蛋白、α-干扰素、白细胞介素-2含量和溶菌酶活性,3周龄雏鸡血清总蛋白、球蛋白和白细胞介素-2含量,5周龄雏鸡血液淋巴细胞数量均显著高于对照组（P〈0.05）。4）试验组1周龄雏鸡肠道食糜中分泌型免疫球蛋白A含量显著高于对照组（P〈0.05）。由此可知,雏鸡饲粮中添加IgY可以促进雏鸡1-5周龄生长性能和免疫机能的提高,但从提高免疫机能的角度看,育雏前期（1-3周龄）的作用效果更为明显。

鸭、鹅卵黄免疫球蛋白提取的比较研究

以氯仿抽提法提纯鸭、鹅卵黄免疫球蛋白,免疫电泳分析纯度,SDS-PAGE分析成分和含量并将二者进行比较,以琼脂扩散测定二者间及其与鸡IgY、猪IgG、牛IgG、鼠IgG间抗原性交叉情况。结果表明:鸭、鹅卵黄免疫球蛋白均由IgY和IgY(△Fc)组成,二者IgY和IgY(△Fc)的含量比分别为3∶1和12∶1;鸭、鹅卵黄免疫球蛋白间较二者与鸡IgY间抗原性交叉低。

牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的实验研究

为研究牛珀至宝丹 (主药 :水牛角、羚羊角、郁金、琥珀等 )合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用与机理 ,6 0只SD大鼠均分为 6组 :空白对照组 (A)、模型组 (B)、普通鸡卵黄对照组 (C)、鸡卵黄免疫球蛋白组 (D)、牛珀至宝丹组 (E)、牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白 (F)。除A组外 ,其余 5组大鼠均以粗制大肠杆菌内毒素制成内毒素休克 ,并应用相应药物 (B组以生理盐水代替 )。观察各组大鼠的血压与淋巴细胞亚群的变化。结果 :除A组外 ,其余 5组大鼠的血压均明显下降 ,但三个用药组下降的程度低于其他组。T细胞亚群中 ,CD3 各组间无明显差异 ;B、C组的CD4、CD8低于A组 ,而三个用药组均高于B组 ,并与A组接近 ;E、F组的CD4/CD8比值高于B组 ,并与A组接近。提示 ,调整淋巴细胞亚群含量和比值 ,可能是牛珀至宝丹、鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用机理之一 。

卵黄免疫球蛋白及其应用研究进展

卵黄免疫球蛋白IgY与哺乳动物IgG相比具有许多突出的优点,现已成为当今生物科学研究的热点。随着研究的深入,其应用也越来越广泛。本文介绍了卵黄抗体的结构与性质、制备方法及其在动物生产中的应用研究进展。