日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在小鼠诱生的保护性免疫力

目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法 分两大组进行 ,实验Ⅰ小鼠有预感染 ,实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 pL SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5w以血吸虫尾蚴攻击感染 ,6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果 PL SjFerl免疫小鼠 ,在实验Ⅰ主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ主要诱生IgG2a和IgG2b ;实验组尚产生较高水平的IgA和IFN γ应答。pL SjFerl免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 (2 6 .47% ,34 .0 8% ) ,减卵率(4 0 .0 2 % ,36 .83% )和死亡卵百分比 (2 7.5 0 % ,30 .13% )。结论 PL SjFerl免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫小鼠的保护性研究

目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 DNA免疫小鼠诱导的保护性免疫力。方法 将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 p L XSN- Fer l经左后腿肌肉注射 BAL B/ c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5周以血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击感染后 6周计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果 p L XSN- Fer l免疫小鼠 ,诱生的Ig G亚类主要是 Ig G2 a和 Ig G2 b;免疫组可产生较高水平的 Ig A和 IFN- γ应答。 p L XSN- Fer l免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 34 .0 8% ,减卵率 36 .83% ,死亡卵百分比为 30 .13%。结论 p L XSN-Fer l免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的体外扩增及逆转录病毒pLXSN-Fer1重组质粒的构建

目的 构建日本血吸虫ｐＬＸＳＮ－ Ｆｅｒ１ 真核表达重组逆转录病毒，为进一步在细胞中表达及ＤＮＡ免疫作准备。方法 用ＰＣＲ技术从日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库中扩增编码卵黄铁蛋白（ｙｏｌｋ ｆｅｒｒｉｔｉｎ，Ｆｅｒｌ） 的基因片段，定向克隆入ｐＬＸＳＮ 逆转录病毒载体，然后经氨苄ＬＢ培养基筛选，酶切、ＰＣＲ鉴定。结果 从日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库中扩增出特异的卵黄铁蛋白的基因片段，克隆成功ｐＬＸＳＮ－ Ｆｅｒ１ 重组逆转录病毒。结论 构建成功ｐＬＸＳＮ－ Ｆｅｒ１ 重组逆转录病毒。

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察

【目的】研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用。【方法】免疫小鼠分两大组进行 :实验Ⅰ组小鼠有预感染 ,实验Ⅱ组小鼠没有预感染。将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN Fer1经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5周以血吸虫尾蚴攻击感染 ,6周后剖杀小鼠 ,计数成虫负荷及肝组织虫卵数。设空载质粒免疫组为对照组。【结果】免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b ;实验组产生较高水平的IgA和IFN γ应答。pLXSN Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率 (2 6 47% ,34 0 8% )和减卵率 (4 0 0 2 % ,36 83% )。【结论】日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用 ,有可能成为有价值的疫苗候选分子 。

日本血吸虫大陆株卵黄铁蛋白基因重组及其真核表达

目的 构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 (Sj Yol Fer)的真核表达重组质粒 p L Yol Fer,转染 Hela细胞进行表达 ,并对表达产物进行鉴定。 方法 用 PCR法从日本血吸虫大陆株成虫 c DNA文库中扩增目的基因片段 ,经 RNA斑点杂交显示转录差异 ,然后定向克隆入表达载体 p L XSN。转染重组体到 Hela细胞中进行表达 ,并用 SDS- PAGE和 Westernblot分析表达产物。 结果 PCR扩增产物大小约 6 0 0 bp左右 ,与雌虫 RNA的杂交信号明显强于雄虫。获得重组质粒p L Yol Fer,特异性表达产物约为 2 1ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别。 结论 为进一步免疫原性实验奠定了基础。

梅氏新贝尼登虫(Neobenedenia melleni)卵黄铁蛋白的cDNA克隆、原核表达及抗血清制备

从cDNA文库中获得了梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白(NmYF)的编码序列。序列全长739个核苷酸,3′-末端具有polyA尾,单一大开放阅读框编码一个由226个氨基酸组成的分子量为26.1kDa的蛋白。序列比较表明,NmYF与卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白最相似,氨基酸序列同源性为23.7%。系统进化树分析表明,NmYF、卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白和头槽绦虫卵黄铁蛋白形成了一个小的进化簇,而体铁蛋白序列形成了一个大的进化簇,揭示了卵黄铁蛋白和体铁蛋白间的差异以及进化上的相关性。这是梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因序列的首次报道。随后,构建了插入有全长NmYF基因开放阅读框序列的原核表达质粒pET-22b-NmYF,转化大肠杆菌BL21pLysE菌株,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE检测表明预期大小的目的蛋白大量表达。随后制备了目的蛋白的多克隆抗血清,它能与目的蛋白起强的特异性反应,但与细菌自身蛋白不起反应,可用于后续研究。

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因重组质粒pLXSN-Sj YF的构建

目的 构建日本血吸虫pLXSN-Sj YF重组质粒，为进一步在细胞中表达及DNA免疫作准备。方法 用PCR技术从日本血吸虫雌性成虫基因组中扩增编码卵黄铁蛋白(yolk ferritin,YF)的基因片段，定向克隆入逆转录病毒载体PpLXSN，经氨苄LB培养基筛选．酶切、RCR鉴定。结果 从日本血吸虫雌性成虫基因组中扩增出特异的卵黄铁蛋白基因片段，成功克隆pLXSN-Sj YF重组质粒。结论 构建成功pLXSN-Sj YF重组质粒．为下一步研究奠定了基础。