血清抗衰老因子、分泌型卷曲相关蛋白-1、C反应蛋白在糖尿病肾病患者检测中的临床价值

目的探讨血清抗衰老因子(Klotho)、分泌型卷曲相关蛋白-1(sfrp-1)、C反应蛋白(CRP)在糖尿病肾病(DN)患者检测中的临床价值。方法采用回顾性分析法,选取2020年11月至2022年11月九江市第一人民医院内分泌科收治的60例DN患者作为DN组,并纳入60例同期进行体检的健康者作为对照组,检测DN组和对照组血清中Klotho、sfrp-1以及CRP水平的变化,根据肾损伤情况,将DN组分为单纯糖尿病组[尿蛋白排泄率(UAER)<20μg/min]、早期DN组(200μg/min≥UAER≥20μg/min)和临床期DN组(UAER>200μg/min),比较各组患者血清Klotho、sfrp-1以及CRP水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Klotho、sfrp-1、CRP对肾损伤程度的诊断价值。结果DN组sfrp-1、CRP水平高于对照组,Klotho水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床期DN组Klotho水平低于早期DN组和单纯糖尿病组,且早期DN组Klotho水平低于单纯糖尿病组,临床期DN组sfrp-1、CRP水平高于早期DN组和单纯糖尿病组,且早期DN组sfrp-1、CRP水平高于单纯糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman分析结果显示,DN患者Klotho水平与肾损伤程度呈负相关,Psfrp-1、CRP水平与肾损伤程度成正相关(P<0.05);Klotho、sfrp-1、CRP三者联合诊断肾损伤程度的ROC曲线下面积(AUC)面积高于单独检测。结论DN患者肾损伤程度越高,血清sfrp-1、CRP水平越高,血清Klotho水平越低。

乳腺增生症的中西医认识及分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对发病机制的作用

乳腺增生病是一种由乳腺导管上皮细胞、乳腺腺泡及纤维结缔组织增生所致的疾病,该病多发于中年女性,但近年来具有年轻化的趋势,青年女性发病率逐年升高,同时乳腺增生及乳腺癌的总体病患数亦逐年提高,并有一定的癌变风险,被视为癌前病变。同时该病病因病机尚未完全明确,目前现代医学对于病因病机的研究主要分为两方面,一方面是激素,另一方面为信号通路,且激素与信号通路间存在相互调控影响的过程,病机较为复杂。因此,进一步明确乳腺增生的病因病机对该病进行积极防治十分重要。该文简述了乳腺增生病的症状,总结乳腺增生的病因病机及中西医对该病的认识,并论述分泌型卷曲相关蛋白1(Recombinant Secreted Frizzled Related Protein 1,SFRP1)对乳腺增生病的影响,对此进行综述探讨。

慢性阻塞性肺疾病患者急性加重影响因素及血清分泌型卷曲相关蛋白1和Clara细胞分泌蛋白对其预测价值

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者急性加重的影响因素,以及血清分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和Clara细胞分泌蛋白(CC16)对急性加重慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)的预测价值。方法:选取COPD患者198例为研究对象,根据出院后3个月复诊是否发生AECOPD分为稳定期COPD组(102例)和AECOPD组(96例)。比较两组患者性别、年龄、体重指数(BMI)、是否吸烟、既往病史(糖尿病、高血压、肺心病和冠心病等)、病程等一般资料。比较两组患者C反应蛋白(CRP)、白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)、血小板(PLT)、纤维蛋白原(FIB)、白蛋白(ALB)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、纤维蛋白原/白蛋白比值(FAR)、血清SFRP1和CC16水平。采用Logistic回归分析发生AECOPD的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SFRP1和CC16对AECOPD发生的预测价值。结果:两组患者性别、年龄、BMI、是否吸烟、既往病史(高血压、糖尿病、肺心病和冠心病)以及病程比较差异无统计学意义(均P>0.05)。AECOPD组CRP、WBC、NEU、LYM、PLT、ALB、FIB、NLR、PLR、FAR、SFRP1和CC16水平高于稳定期COPD组(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,NLR>3.53、PLR>120、FAR>3.5、SFRP1>4.8 ng/ml以及CC16>260 ng/ml是COPD患者发生AECOPD的独立危险因素(均P<0.05)。血清SFRP1和CC16对COPD患者发生AECOPD具有一定的预测价值,且两者联合的预测价值更高。结论:NLR、PLR、FAR、SFRP1及CC16是COPD患者发生AECOPD的独立影响因素。SFRP1联合CC16对COPD患者发生AECOPD的预测价值较高。

早期糖尿病肾病外周血分泌型卷曲相关蛋白1、血脂素、纤溶酶原激活物抑制物-1水平变化情况及临床检测意义

目的:探讨早期糖尿病肾病(Diabetes nephropathy,DN)外周血分泌型卷曲相关蛋白1(secreted curl associated protein 1,SFRP1)、血脂素(serum adiponectin,APN)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)水平变化情况及临床检测意义。方法:回顾性分析襄城县人民医院2019年6月—2021年2月收治的115例糖尿病患者的临床资料,分为糖尿病组54例和DN组61例,另选择同期体检健康者45例为正常对照组。分别采集3组受试者晨起空腹外周静脉血,检测血清SFRP1、APN、PAI-1、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAle)、空腹胰岛素、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)及肌酐水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);分析血清SFRP1、APN、PAI-1水平与早期DN患者临床相关指标的相关性。结果:糖尿病组和DN组受试者的FPG、HbA1c、空腹胰岛素、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、肌酐水平均高于正常对照组,HDL-C水平低于正常对照组,差异有统计学意义(F=228.01、162.12、257.10、464.95、10.01、21.91、10.35、145.00、481.63,P<0.05)。糖尿病组受试者血清SFRP1、APN、PAI-1水平与正常对照组,DN组受试者血清SFRP1、PAI-1水平高于糖尿病组,而血清APN水平低于糖尿病组及正常对照组,差异有统计学意义(F=398.82、406.70、28.32,P<0.05)。DN患者血清SFRP1、APN、PAI-1水平与FPG、HbA1c、空腹胰岛素、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、肌酐呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05)。结论:早期DN患者血清SFRP1、PAI-1水平升高及APN水平降低,可能参与了疾病的发生及发展过程。

干扰卷曲蛋白1基因表达抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及上皮-间充质转化

目的观察卷曲蛋白1(FZD1)对神经胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的作用。方法将U118细胞分为低氧0、24、48 h组,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)法检测FZD1 mRNA和蛋白的表达。U118细胞分为对照Ⅰ组、对照短发卡RNA(shRNA)Ⅰ组、sh-缺氧诱导因子(HIF)-1α组、对照Ⅱ组、对照shRNAⅡ组、sh-FZD1组。利用脂质体法将对照短发卡RNA(Control shRNA)、HIF-1αshRNA、FZD1 shRNA转染胶质瘤细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,小室迁移(Transwell)试验检测细胞迁移,Western blot检测HIF-1α、波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析,多组间比较采用双因素方差分析或克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal-Wallis)秩和检验。结果低氧24 h和48 h组细胞FZD1 mRNA和蛋白表达水平高于低氧0 h组(mRNA水平:2.46±0.39,3.54±0.44比1.00±0.04,F=83.537,P<0.01;蛋白水平:1.41±0.06,1.85±0.09比1.06±0.06,χ2=7.200,P<0.01)。sh-HIF-1α组HIF-1α和FZD1蛋白表达水平低于对照Ⅰ组和对照shRNAⅠ组(HIF-1α:0.50±0.06比1.03±0.03、0.97±0.03,χ2=7.200,P<0.01;FZD1:0.60±0.06比1.03±0.04、0.96±0.04,χ2=7.200,P<0.01)。培养24、48、72、96 h后,sh-FZD1组细胞活性低于对照Ⅱ组和对照shRNAⅡ组(24 h:0.159±0.006比0.204±0.008、0.216±0.008;48 h:0.218±0.009比0.329±0.009、0.331±0.009;72 h:0.296±0.007比0.447±0.011、0.472±0.013;96 h:0.361±0.008比0.563±0.013、0.582±0.015,F=32.790,P<0.01)。sh-FZD1组细胞克隆形成数量低于对照Ⅱ组和对照shRNAⅡ组(238.00±21.28比343.00±17.35、371.69±21.28,χ2=7.200,P<0.01)。sh-FZD1组细胞迁移数目低于对照Ⅱ组和对照shRNAⅡ组(18.33±2.52比31.33±3.51、36.67±2.08,χ2=6.880,P<0.01)。sh-FZD1组FZD1、波形蛋白、N-钙黏蛋白表达水平低于对照Ⅱ组和对照shRNAⅡ组,而E-钙黏蛋白表达高于对照Ⅱ组和对照shRNAⅡ组(FZD1:0.33±0.06比1.05±0.05、0.97±0.03,χ2=7.200,P<0.01;波形蛋白:0.65±0.06比1.00±0.02、0.96±0.03,χ2=6.880,P<0.01;N-钙黏蛋白:0.37±0.04比1.02±0.03、0.89±0.02,χ2=7.200,P<0.01;E-钙黏蛋白:2.07±0.09比0.96±0.04、1.02±0.05,χ2=6.489,P<0.05)。结论FZD1参与调控胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化过程。

分泌型卷曲相关蛋白1与慢性牙周炎的相关分析

目的检测分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在慢性牙周炎(CP)患者和牙周健康者的表达情况,探讨SFRP1在CP的发生与发展过程中的作用。方法选择CP患者28例为试验组,按临床附着丧失(CAL)程度分为轻、中、重度3组,另外选择牙周健康者10例为对照组。收集两组研究对象的龈沟液,采用酶联免疫吸附法测定龈沟液中SFRP1的质量浓度。取试验组中22例CP患者的病变牙龈组织标本,以及10例对照组的正常牙龈组织,进行SFRP1免疫组织化学染色,观察着色强度,分析SFRP1表达与不同程度CP的相关性。结果 1)试验组和对照组龈沟液中SFRP1的质量浓度分别为(281.07±33.37)和(245.30±35.69)ng·L-1,试验组明显高于对照组(P<0.05);龈沟液内SFRP1质量浓度与CAL呈明显正相关(r=0.651,P<0.001)。2)试验组SFRP1着色强度积分值(4.500±0.913)明显高于对照组(2.800±1.135)(P<0.001);试验组中,轻、中、重度CP组间的着色强度积分值无明显差异(P>0.05)。结论SFRP1在CP患者龈沟液及牙龈组织中的表达高于牙周健康者,SFRP1可能参与了CP的发生发展过程。

早期糖尿病肾病患者血清分泌型卷曲相关蛋白1的表达及其临床意义

目的探讨早期糖尿病肾病患者血清分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的表达及其临床意义。方法选择2016年5月至2019年5月新乡医学院第一附属医院收治的117例2型糖尿病患者为研究对象,其中未并发糖尿病肾病患者54例(糖尿病组),并发糖尿病肾病患者63例(糖尿病肾病组);另选择同期体检健康者47例为正常对照组。分别采集3组受试者晨起空腹外周静脉血,检测血清SFRP1、超氧化物歧化酶(SOD)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)及肌酐水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);留过夜8、24 h尿,分别检测尿白蛋白排泄率和尿白蛋白/肌酐比值;分析血清SFRP1水平与早期糖尿病肾病患者临床相关指标的相关性。结果糖尿病组和糖尿病肾病组患者FPG、HbA1c、空腹胰岛素、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、肌酐、尿白蛋白排泄率、尿白蛋白/肌酐、TGF-β1水平高于正常对照组(P<0.05),HDL-C、SOD水平低于正常对照组(P<0.05)。糖尿病肾病组患者肌酐、尿白蛋白排泄率、尿白蛋白/肌酐、TGF-β1水平高于糖尿病组,SOD水平低于糖尿病组(P<0.05);糖尿病肾病组患者FPG、HbA1c、空腹胰岛素、HOMA-IR、TC、HDL-C、LDL-C、TG水平与糖尿病组比较差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组患者血清SFRP1水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病肾病组患者血清SFRP1水平高于糖尿病组和正常对照组(P<0.05)。糖尿病肾病患者血清SFRP1水平与FPG、HbA1c、空腹胰岛素、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、肌酐、尿白蛋白排泄率、尿白蛋白/肌酐、TGF-β1水平呈正相关(r=0.553、0.601、0.532、0.638、0.599、0.405、0.542、0.467、0.573、0.592、0.589,P<0.05),与HDL-C、SOD水平呈负相关(r=-0.581、-0.417,P<0.05)。结论早期糖尿病肾病患者血清SFRP1水平上调,其可能参与了2型糖尿病肾病的发生、发展过程。

尖锐湿疣组织中分泌性卷曲相关蛋白-1和wnt-1蛋白的表达与细胞凋亡指数检测

目的:检测尖锐湿疣(CA)组织中分泌性卷曲相关蛋白(sFRP)-1和wnt-1蛋白的表达水平和细胞凋亡指数,了解它们在CA发病中可能的作用。方法:采用免疫组化法检测sFRP-1、wnt-1蛋白的表达水平,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记(TUNEL)法检测,计算细胞凋亡指数。结果:CA组织中sFRP-1的表达显著弱于正常包皮组织,wnt-1的表达强于正常包皮组织;CA组织中细胞凋亡指数明显高于正常包皮组织。结论:在CA组织中sFRP-1和wnt-1蛋白表达异常以及细胞凋亡指数增高,提示sFRP-1/wnt-1通路可能参与CA的发病。

miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究

背景与目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。micro RNA-335(mi R-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨mi R-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK1)基因的表达,并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法:理论预测并通过荧光素酶基因报告验证mi R-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region,UTR)的特异性结合作用;real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测mi R-335对ROCK1表达的负性调控作用;Transwell小室法检测mi R-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果:Targetscan预测显示,mi R-335与ROCK1 3'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示,mi R-335 mimic和ROCK1 3'-UTR能够靶向结合;mi R-335在MG-63细胞中低表达,ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示,转染mi R-335 mimic或转染ROCK1 si RNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示,过表达mi R-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论:mi R-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达,抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。

分泌型卷曲相关蛋白1基因异常甲基化对食管鳞癌的影响

目的:研究分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因启动子区与食管鳞癌的相关性.方法:选取食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者22例为实验组,另同期选取食管良性病变者22例为对照组,提取术前外周血DNA,利用甲基化特异性PCR法(MSP)检测SFRP1基因启动子区域甲基化状态,并分析其与临床病理参数的相关性.结果:在22例食管鳞癌患者中其甲基化阳性例数为8例,甲基化阳性率为36.4%,在22例食管良性病变者中其甲基化阳性例数为2例,甲基化阳性率为9.1%(P<0.05).SFRP1基因甲基化与患者临床病理参数及癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)水平无相关性(P>0.05).结论:血清SFRP1基因启动子区异常甲基化可能参与食管鳞癌的发生,有望成为食管鳞癌临床诊断的新型辅助指标.

分泌型卷曲相关蛋白1在慢性牙周炎患者中的检验结果分析

目的通过分析分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在慢性牙周炎(CP)患者及正常健康者中的表达情况,研究SFRP1与CP的相关性。方法筛选30例CP患者作为研究组,并按照其附着丧失(CAL)的程度,将研究组患者分为轻、中、重3个等级,同时筛选12例健康者作为对照组。收集上述两组患者的龈沟液,通过酶联免疫吸附的方法检测龈沟液中的SFRP1含量,以分析SFRP1与CP的相关性。结果 1与对照组相比,研究组患者龈沟液的含量及SFRP1的浓度明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);2与对照组比较,中、重CP组的SFRP1浓度均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且在3种不同患病程度的患者中,SFRP1浓度的两两组间比较均有统计学意义(P<0.05);3研究组患者CAL的程度越高,其龈沟液中SFRP1的浓度越高,且与CAL呈明显的正相关性(r=0.958,P<0.05)。结论 SFRP1在CP患者中的表达量要远远高于健康者,且龈沟液中SFRP1的含量越高,说明CAL的程度越重,表明SFRP1参与了CP的发生过程。

肾透明细胞癌中分泌型卷曲相关蛋白1基因甲基化及其表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性的关系

目的探讨人肾透明细胞癌组织中分泌型卷曲相关蛋白1基因(SFRP 1)的甲基化状态及其mRNA表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T(MTHFR C677T)基因多态性的关系。方法采用PCR-RFLP技术分别检测38例手术切除的肾透明细胞癌区和外周正常肾脏组织标本MTHFR基因677(C→T)多态,并分别以Real-time PCR和和甲基化特异性PCR(MSP)技术检测SFRP 1基因的表达和甲基化状态。结果 SFRP 1基因失表达和/或低表达的肾透明细胞癌组织其启动子区处于高甲基化状态,MTHFR 677CC基因型的肾透明细胞癌组织SFRP 1甲基化升高且其表达降低,SFRP 1的甲基化及其表达与MTHFRC677T基因多态性有明显相关性。结论 MTHFR基因多态性通过影响SFRP 1基因的甲基化状态而调控其表达,可能在肾癌的发生、发展中具有重要作用。

分泌型卷曲相关蛋白1及β-连环蛋白在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的检测分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)及β-连环蛋白(β-catenin)在慢性牙周炎(CP)患者牙龈组织中的表达及相关性,探讨经典Wnt/β-catenin信号通路在牙周炎发生发展中的作用。方法选取CP患者28例(CP组),其中中度CP16例,重度CP12例,健康对照者12例(正常组),收集牙龈组织并记录探诊深度、出血指数及临床附着丧失水平。采用免疫组织化学技术检测SFRP1及β-catenin的表达,双评分法评价阳性染色强度,SPSS 19.0软件进行统计分析。结果正常组SFRP1及β-catenin的着色强度积分值分别为2.16±0.65、1.12±0.51,CP组为3.57±0.45、2.36±0.49,其中中度CP组为3.61±0.40、2.30±0.44,重度CP组为3.52±0.52、2.45±0.55。CP组中SFRP1及β-catenin的表达较正常组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。进一步比较,正常组与中度、重度CP组间差异均有统计学意义(P<0.01),但中度与重度CP组间差异无统计学意义(P>0.05)。SFRP1与β-catenin着色强度的相关系数r=0.657(P<0.01)。两者的表达均与牙周临床指数相关,其中SFRP1与探诊深度的相关性最明显(r=0.723,P<0.01);β-catenin与出血指数的相关性最强(r=0.697,P<0.01)。结论 SFRP1及β-catenin在CP患者牙龈组织中的表达升高且与牙周破坏相关,两者的异常表达可能促进牙周炎的发生发展。

分泌型卷曲相关蛋白-1在糖尿病肾病小鼠肾组织中的表达及意义

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白(sfrp)-1在糖尿病(DM)肾病(DN)小鼠肾组织中的表达变化,探讨sfrp-1在DN肾脏纤维化发病过程中的作用。方法雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、DM组。成模10 w末处死,生化方法测小鼠血糖、肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油、24 h尿蛋白;免疫组化检测两组肾组织β-连环蛋白(β-catenin)、sfrp-1蛋白的表达;Western印迹检测小鼠肾组织wnt4、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β、p-GSK3β、sfrp-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白(col-Ⅲ)等蛋白的表达变化;实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肾组织sfrp-1 mRNA表达。结果与正常对照组比较,DM组血糖和24 h尿蛋白、肌酐、三酰甘油、尿素氮均显著升高(P<0.05);免疫组化结果显示正常对照组肾皮质肾小管细胞胞质内几乎没有β-catenin蛋白表达,而DN组β-catenin蛋白在胞质内大量集聚,并出现核转移;sfrp-1蛋白在正常对照组肾皮质肾小管细胞胞质内可见棕黄色阳性表达,而DN组阳性表达减少;Western印迹显示,DM组肾组织wnt4、p-GSK3β、β-catenin、α-SMA、col-Ⅲ表达较正常对照组明显增多(P<0.05),而E-cadherin、sfrp-1表达显著减少(P<0.05);Realtime-PCR结果显示,与正常对照组比较,DM组肾组织sfrp-1 mRNA表达显著减少(P<0.05)。结论 sfrp-1在DN小鼠肾组织表达降低可能导致对wnt4/β-catenin信号通路的抑制作用减弱从而促进DN肾纤维化进程。

分泌型卷曲相关蛋白1在人毛乳头中的表达及其转录机制研究

目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊毛乳头部位的表达情况。采用按基因组序列设计的引物,通过PCR克隆人SFRP1启动子片段,将之插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建不同截短片段的重组质粒并瞬时转染毛乳头细胞,测定质粒在毛乳头细胞中的启动子活性,找到核心启动子区域,运用生物信息学方法预测其潜在的转录因子结合位点。结果:免疫组化结果显示AGA患者毛乳头中SFRP1表达量显著高于非AGA患者。经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人SFRP1启动子及其截短片段重组质粒,并确定其启动子活性区域位于-100~+50bp区域内,且可能含有E2F3、HIF1A::ARNT、FOXC1、SP1等转录因子结合位点。结论:SFRP1在AGA患者毛乳头中表达呈阳性,人SFRP1启动子荧光素酶报告质粒构建成功,其转录因子结合位点初步确定,为进一步的研究奠定基础。

FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1在口腔黏膜下纤维化患者中的表达

目的 探讨丝聚蛋白(filaggrin, FLG)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者中的表达。方法 选取OSF患者70例,依据病理学分为OSF早期组、中期组、晚期组,另选取同时段健康人群27例,作为正常组。对四组研究对象FLG、SFRP1、TGF-β1表达水平进行检测,使用免疫组化SP法检测FLG水平;使用酶联免疫吸附法检测SFRP1水平;使用地高辛标记TGF-β1 DNA探针检测TGF-β1表达水平。分析上述指标在OSF中的相关性。对分析中具有统计学意义的指标进行多指标Logistics回归分析。结果OSF早期组患者FLG水平高于正常组,OSF中期组患者FLG水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者FLG水平高于其他三组(P<0.05)。OSF早期组患者SFRP1表达高于正常组,OSF中期组患者SFRP1表达高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者SFRP1表达高于其他三组(P <0.05)。OSF早期组患者TGF-β1水平高于正常组,OSF中期组患者TGF-β1水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者TGF-β1水平高于其他三组(P<0.05)。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1之间呈正相关。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1水平与OSF严重程度具有相关性。结论 FLG、SFRP1、TGF-β1在OSF患者中均呈异常高表达,并且具有一定的相关性。对FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1指标进行检测,对OSF严重程度的临床诊断具有一定帮助。

Rho相关的卷曲蛋白激酶1参与β淀粉样蛋白介导的大鼠原代神经元损伤

目的·探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled coil protein kinase 1,ROCK1)是否参与了β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)引起大鼠海马神经元损伤的过程。方法·用Aβ40寡聚肽处理大鼠海马原代神经元,建立神经元损伤模型。利用免疫印迹法检测ROCK1蛋白表达水平,试剂盒检测ROCK1激酶活性,激光共聚焦显微镜检测荧光染料Fluo-8AM标记的细胞内钙离子负荷,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。加入ROCK1抑制剂Y-27632,观察其对Aβ40效应的影响。结果·10μmol/L Aβ40寡聚肽能引起神经元内钙超载,ROCK1蛋白表达增加和活性升高,以及细胞凋亡比例升高;而Y-27632能对抗Aβ40引起的这些效应。结论·ROCK1参与了Aβ40诱导的神经元内钙超载及神经毒性的产生,而ROCK1抑制剂能拮抗Aβ毒性效应。

分泌型卷曲相关蛋白1在心血管疾病中的研究进展

分泌型卷曲相关蛋白1(sFRP-1)基因实质为一种分泌型糖蛋白,主要与Wnt信号通路具有同源结构的卷曲蛋白受体竞争性结合,通过对Wnt信号通路的负调控,广泛介入到调控细胞增殖、分化、凋亡、癌变以及调节机体的生长发育、疾病等病理生理的复杂过程.抑制Wnt信号通路可以阻止心肌细胞缺血坏死面积的进一步扩大,延缓心肌重塑的过程,进而改善预后.作为Wnt信号通路的抑制因子,sFRP-1的作用不可忽视.相关实验研究结果表明,sFRP-1基因很有可能成为未来心血管疾病治疗的靶向基因.

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对高糖培养的NRK-52E细胞中分泌型卷曲相关蛋白1表达的影响

目的检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预肾小管上皮细胞(NRK-52E)后对分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)表达变化的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组(NC组)和糖尿病肾病组(DN组),DN组建模10周后检测相关生化指标、计算肾脏指数(KI);免疫组化法检测肾组织中Sfrp1的表达;将NRK-52E细胞分为正常糖组(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(HG,葡萄糖30 mmol/L)和高糖加5-Aza-CdR组(5-Aza-CdR组,80μmol/L),用Western blot检测Sfrp1、DNA甲基转移酶(Dnmt)3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白的表达;RT-qPCR检测Sfrp1 mRNA的表达;Pearson检验分析Sfrp1与Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ及col-Ⅳ的相关性。结果DN组大鼠KI、血糖(BG)、24 h尿蛋白(24 h UP)、肌酐水平均高于NC组。与NC组比,DN组肾组织中Sfrp1表达明显降低。与NG组比,HG组Sfrp1 mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05);与HG组相比,5-Aza-CdR组Sfrp1 mRNA和蛋白表达增多(P<0.05);Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05);Sfrp1与Dnmt3a(r=-0.937,P<0.05)、Dnmt3b(r=-0.965,P<0.05)、col-Ⅲ(r=-0.694,P<0.05)和col-Ⅳ(r=-0.888,P<0.05)均呈负相关。结论5-氮杂-2’-脱氧胞苷可能通过降低Dnmt3a和Dnmt3b表达,进而使Sfrp1表达升高。

miR-586通过SFRP1调控骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探究miR-586调控人骨肉瘤细胞U2OS的生物学行为的可能机制。方法通过比较骨肉瘤细胞系和人成骨细胞中miR-586的差异表达筛选目标细胞株,干扰miR-586表达后检测其对目标细胞株增殖、迁移、侵袭能力的影响;用双荧光素酶实验、实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot验证miR-586与SFRP1相关性,检测干预miR-586、SFRP1后对目标细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果相较于人成骨细胞hFOB1.19,骨肉瘤细胞系中U2OS细胞的miR-586表达量显著增加;调低miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力下降,SFRP1的mRNA及蛋白表达增加;过表达miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力上升,SFRP1的mRNA及蛋白表达下降;同时调低miR-586、SFRP1后,U2OS细胞侵袭及迁移能力较敲低miR-586组上升。结论在本研究中,miR-586/SFRP1轴调控骨肉瘤细胞U2OS的增殖与生物学行为,具有作为骨肉瘤的潜在诊断、治疗标志物的可能性。