心肌细胞核兰尼碱受体在大鼠压力超负荷心肌肥厚发生中的作用

目的 探讨大鼠心肌细胞核上兰尼碱受体 (ryanodinereceptor,RyR)在心肌肥厚发生中的作用和意义 ,以及蛋白激酶A(PKA)、钙调素 (CaM)、佛波酯 (PMA)和核外 [Ca2 + ]对其影响。方法 制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型 ,差速离心和密度梯度离心提纯心肌细胞核 ,3 H放射配基受体分析心肌细胞核膜RyR的动力学特性。结果 腹主动脉缩窄术后 4周大鼠心肌显著肥厚 ,伴有明显的血流动力学异常 ,其细胞核RyR的最大结合 (Bmax)较对照组减少 5 7 8% (P <0 0 0 1) ,离解常数(Kd)较对照组降低 5 4 4 % (P <0 0 5 )。PKA使对照组细胞核RyR与3 H兰尼碱的结合增加 2 0 6 % (P<0 0 5 ) ,而对心肌肥厚组无显著作用 ;Ca2 + /CaM不影响其结合 ,而CaM抑制剂和内源性激活蛋白激酶C (PKC)则抑制其结合 (P <0 0 5 )。在核外 [Ca2 + ]为 10 -8～ 10 -4mol/L范围时 ,细胞核RyR与3 H兰尼碱的结合呈先升高后降低趋势 ,在核外 [Ca2 + ]为 10 -6mol/L时达最大结合。结论 心肌细胞核上存在受磷酸化调节的RyR ,压力超负荷心肌肥厚发生时 ,该受体密度下调而亲和力增加。

COX抑制剂对压力超负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的作用

目的 研究环氧化酶(COX)抑制剂阿司匹林、塞来昔布对压力超负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的影响及机制。方法 选取200±20g SPF级SD大鼠,通过腹主动脉缩窄法建立心肌肥厚大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、模型+阿司匹林组、模型+塞来昔布组。正常对照组和模型组以0.9%氯化钠溶液2ml/100g灌胃,阿司匹林组10mg/100g灌胃,塞来昔布组1.8mg/100g灌胃,分别灌胃至第8、10、12、14周取血浆和心肌组织。计算左心室质量指数,HE染色观察左心室心肌细胞形态,Masson染色观察左心室胶原纤维的变化,ELISA法检测血浆炎性因子TNF-α、IL-10的含量,免疫组化检测相关蛋白Notch1、Hey2的表达。结果 与正常对照组比较,模型组心肌细胞排列紊乱,胶原纤维增生,左心室质量指数、细胞短轴直径、血浆炎性细胞因子TNF-α、IL-10含量及Notch1和Hey2的蛋白含量显著升高,且随着时间的变化,模型组的各项检测指标逐渐增加。与模型组比较,阿司匹林组及塞来昔布组的心肌细胞排列稍显整齐,左心室质量指数、细胞短轴直径、胶原纤维、血浆炎性细胞因子TNF-α、IL-10含量显著下降,且随时间的延长,加药的两组上述指标整体趋势逐渐降低,Notch1和Hey2的蛋白表达量随时间变化先升高后下降。结论 环氧化酶抑制剂具有减轻压力超负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的作用,这可能与Notch1信号通路蛋白的调节及炎症因子含量降低相关。并且在短期内,阿司匹林发挥作用较早,长时间后,塞来昔布的作用逐渐显现,效果同阿司匹林相似。

压力超负荷性心肌肥厚发病机制的研究

目的:探讨α1、β受体阻断剂派唑嗪(Prazosin,Pra)、心得安(Propra-nolol,Pro)及钙离子拮抗剂尼群地平(Nitrendipine,Nit)在压力超负荷性心肌肥厚发病学中的意义。方法:采用Pra、Pro和Nit治疗大鼠腹主动脉缩窄所致左室肥厚(LVH)。结果:Pra和Nit能抑制早期肥厚心肌c-fosmRNA表达,6周后Pra组和Nit组较LVH组之BP,LVW/BW均显著下降,同时心脏舒张功能改善,Na+-K+ATPase活性增强;而Pro不能有效改善LVH。结论:Pra和Nit治疗成功预防了心肌肥厚的发生,而Pro不能。提示儿茶酚胺参与压力超负荷性心肌肥厚的形成,其效应不仅涉及后负荷的高低,也可通过α1肾上腺素能受体而不是β肾上腺素能受体对心肌产生直接性致肥大作用,同时钙离子可作为第二信使参与引起心肌细胞肥大的信息传递。

压力超负荷性心肌肥厚的血液动力学研究

研究由血液动力病理组织和分子生物学引起的压力超负荷性心肌肥厚的机制，并评价洛沙坦、福辛普利对它的作用。方法：对３０只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经肾动脉分叉上方２～４ｍｍ处分离腹主动脉，平行放置６号钝针头，结扎后拔出针头造成压力超负荷性心肌肥厚模型。术后４周各组经颈总动脉２Ｆ导管直接法测量动脉平均压（ＭＡＰ）和左室舒张末期压（ＬＶＥＤＰ）。结果：（１）血液动力学；与假手术组 ＭＡＰ、ＬＶＥＤＰ比较，术后第４周模型组 ＭＡＰ、ＬＶＥＤＰ显著升高（ｐ＜０．０５）；并与心肌肥厚程度相关（Ｐ＜０．０５）。洛沙坦、福辛普利可降低压力超负荷引起的大鼠ＭＡＰ、ＬＶＥＤＰ增高和ＨＷ／ＢＷ和ＬＶ／ ＢＷ增高（Ｐ＜０．００５）；（３）两者联合未发现进一步的协同效应。结论：洛沙坦、福辛普利能明显改善由腹主动脉狭窄引起的血液动力学改变，并与其减轻压力超负荷性心肌肥厚程度密切相关，两者联合治疗未见有明显协同作用。

环氧化酶抑制剂对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的作用及机制研究

目的探讨阿司匹林和塞来昔布对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法体内实验:AAC建立压力超负荷性心肌肥厚大鼠模型,阿司匹林和塞来昔布分别灌胃8、10和12周。测量动脉血压和左心室质量指数,超声心动图检测心脏结构和功能变化,免疫组化和qRT-PCR法检测Notch1和Hes1的表达水平。体外实验:机械牵张诱导H9c2心肌细胞肥大,Western blot法检测药物干预后Notch1和Hes1蛋白的表达以及siRNA-Notch1转染后ANP、Notch1和Hes1蛋白的表达水平。结果体内实验:给药后动脉血压和左心室质量指数较模型组降低;与模型组比较,给药10、12周后左心室射血分数、短轴缩短率升高,舒张和收缩末期的左心室内径、容积降低;给药后Notch1和Hes1蛋白和mRNA表达较模型组升高。体外实验:药物干预后Notch1和Hes1蛋白表达较MS组升高;siRNA-Notch1转染后ANP蛋白表达升高,Notch1和Hes1蛋白表达降低。结论阿司匹林和塞来昔布通过上调Notch1信号通路对大鼠压力超负荷性心肌肥厚发挥保护作用。

ECE-1基因启动子甲基化调控AKT/eNOS通路对心肌肥厚的影响

目的探讨压力超负荷心肌肥厚大鼠内皮素转换酶-1(ECE-1)基因启动子的甲基化状态及其调控蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(AKT/eNOS)信号通路促进心肌肥厚发病的机制。方法雄性SD大鼠30只随机分成空白组、假手术组、实验组,每组10只。实验组通过腹主动脉缩窄术构建压力超负荷心肌肥厚模型,假手术组分离动脉但不结扎,空白组不手术;第43天检测心重比、心脏超声、心肌形态学改变;RT-qPCR检测心房利钠肽(ANP)和脑利钠肽(BNP)含量;免疫组化法检测ECE-1在心肌组织中的表达;MSP法检测ECE-1基因甲基化状态;Western blot法检测ECE-1、p-AKT、p-eNOS等表达。结果与假手术组比,实验组心重比、左室舒末后壁厚度增加,左室射血分数、左室短轴收缩率减小,形态学观察到实验组心肌明显肥厚(P<0.01),ANP和BNP mRNA表达升高(P<0.01)。与假手术组比,实验组大鼠心肌组织中ECE-1在细胞质表达上调(P<0.01);存在ECE-1非甲基化大鼠的ECE-1蛋白表达上调,p-AKT和p-eNOS蛋白表达下调(P<0.01)。结论压力超负荷心肌肥厚大鼠ECE-1基因启动子的非甲基化可能导致ECE-1表达增加,p-AKT、p-eNOS水平下降,其可能通过抑制AKT/eNO途径促进心肌肥厚的发生。

肿瘤抑制因子PTEN与心肌肥大关系的研究

[摘要]目的：观察肿瘤抑制因子PTEN在心肌肥厚大鼠心肌组织以及在血管紧张素诱导的肥大心肌细胞中的表达，探讨PTEN在心肌肥大发生发展中的作用以及相关机制。方法：采用腹主动脉狭窄术制备压力超负荷心肌肥厚动物模型，及血管紧张素诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法、Westernblot及免疫组化等方法，分别检测各组PTEN mRNA和蛋白表达的变化，