亲和素-生物素间接偶联的压电DNA传感器研究

采用 33′ 二巯基硫代丙酸的金电极自组装技术 ,用乙基 3 (3 二甲氨基 )碳二亚胺盐酸盐 (EDC)和N 羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS)偶联剂将亲和素固定于金电极上 ,联于生物素标记的探针 ,制备成压电DNA传感器的检测电极 ,和杂交液中的待检葡萄球菌肠毒素B的ssDNA进行杂交 ,通过频率信号检测DNA杂交的量 ,达到检测的目的 .采用不同长度的基因片段进行了研究 ,制作的传感器一致性、特异性都较好 ;杂交后的电极 ,电极再生后 。

巯基自组装的压电DNA传感器技术研究

采用先将寡核苷酸分子标记上巯基基团 ,通过自组装技术将巯基修饰的寡核苷酸固定于金电极上 ,研制成的压电 DNA传感器一致性、特异性都较好 ,每次检测杂交后 ,经过电极的再生 ,传感器可以重复使用 3次 .用该传感器检测和传统的斑点杂交方法相比较 ,具有快速、灵敏、简便等优越性 .

链置换扩增压电DNA传感器检测铜绿假单胞菌的临床应用研究

目的 探讨链置换扩增 (SDA )压电 DNA传感器检测铜绿假单胞菌的临床应用。方法 应用 SDA压电DNA传感器芯片技术和特异性寡核苷酸探针 ,对临床标本 33份进行铜绿假单胞菌检测 ,并以荧光定量 PCR作参照 ,与常规培养进行对比分析。结果 在 33份临床标本中 ,SDA压电 DNA传感器检出 17份铜绿假单胞菌阳性 ,与荧光定量 PCR结果完全一致 ,而这两种方法与常规分离培养略有差异。结论 SDA压电 DNA传感器芯片技术能直接检测铜绿假单胞菌基因组 DNA,具有准确、快速、灵敏的优点。

压电DNA传感器检测模式对频率漂移的影响

利用分子自组装技术将DNA探针固定在石英金膜表面与生物素标记的靶DNA杂交,再结合经40 nm胶体金标记的亲核素,放大检测频率以提高检测灵敏度。靶DNA质量经胶体金放大后,QCM的频率降达到了86 Hz,其检出限可达10 fmol/L。在其检测过程中,分别考察了裸DNA晶片直接检测和晶片组装在底座中检测两种模式。前者由于杂交液扩散和溶液挥发,易造成频率检测不稳定和失真,后者由于避免了溶液扩散和挥发,能有效提高频率检测的稳定性和准确度。

用于液相检测的双参数压电DNA传感器研究

采用自组装技术,利用亲和素-生物素系统将25-mer的生物素标记的DNA探针固定于石英谐振器金电极上,与双参数压电传感器相结合,研制成了用于液相检测的压电DNA传感器。该传感器稳定性较好,3h频移在5Hz以内;液体的体积在一定范围内对双参数传感器未见明显影响;用双参数方法制作的传感器特异性等性能较好,为实现检测的自动化和生物的动力学测定打下了基础。

基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的研究

目的在已构建的压电压电石英晶体DNA传感器检测系统中引入HRP-DAB生物信号放大系统,提高传感器的检测灵敏度,并基于该系统建立一种表皮葡萄球菌快速检测方法。方法采用自组装技术在压电石英晶体DNA传感器上固定针对表皮葡萄球菌的寡核苷酸探针,将掺入生物素(biotin)-dUTP的表皮葡萄球菌靶DNA与之进行杂交反应,加入HRP-链亲和素(streptavidin)、DAB工作液,观察反应频率变化;对35份表皮葡萄球菌感染的临床标本进行检测,并与传统培养法进行比较。结果该压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的灵敏度为95.5%,特异度为84.6%,正确诊断指数为0.801,检出限为2×102CFU/ml,与血培养法差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列,有效的提高了压电石英晶体传感器检测的灵敏度,可用于临床病原菌感染的快速检测,具有较高的临床推广价值。

硅烷法固定ssDNA制作的压电式DNA传感器

利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传感器2h后,有较好响应;对不同长度DNA探针固化效果进行比较,169bp(即169个碱基)SEB探针固定和杂交效果较好;利用0.5mol/LNaOH进行电极洗脱,时间为45min,电极可以再生,且传感器可以重复使用3次;利用1.2mol/LNaOH和1.2mol/LHCl洗涤电极,该电极可多次再利用;固化好的电极于4℃条件下可以保存三周之久。