基于去甲肾上腺素诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的太子参药效部位研究

目的:研究太子参对去甲肾上腺素(NE)诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的活性部位。方法:采用系统溶剂分离制备提取太子参石油醚,乙酸乙酯,正丁醇及水层部位。取1～3 d的SD大鼠乳鼠制备原代培养心肌细胞,以1×105/mL的细胞密度接种于96孔培养板,以相当于生药0.1～0.25 g.mL-1的太子参不同提取部位作用于原代培养心肌细胞30 min后,以1μmol.L-1NE作用于心肌细胞24 h复制细胞损伤模型,MTT法分析不同提取部位太子参的保护作用。结果:正丁醇和水层提取部位对NE诱导原代培养心肌细胞损伤吸光度(A570)降低具有显著的提高作用;进一步分析提示0.1 g.mL-1和0.25 g.mL-1太子参25%乙醇洗脱正丁醇部位和多糖物质群对NE诱导心肌细胞A570的降低保护作用显著(与模型组比较,差异显著,P<0.01,P<0.05)。结论:初步的活性筛选发现太子参的正丁醇部位和水层部位对NE诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,进一步的活性追踪确定正丁醇部位经25%乙醇洗脱物质群及水层中的粗多糖为太子参防治NE诱导的心肌细胞损伤的主要活性物质群。

乐果对培养乳鼠心肌细胞的毒作用

【目的】 探讨乐果对培养乳鼠心肌细胞细胞收缩功能、乳酶脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸转氨酶 (AST)和细胞骨架的影响。【方法】 体外乳鼠心肌细胞细胞培养。【结果】 乐果可使心肌细胞收缩力减弱 ;13 2 μmol/L染毒 3h后心肌搏动频率明显降低 ,而 5 2 8μmol/L和 2 11 2 μmol/L染毒 1h后即降低 ;2 11 2 μmol/L染毒心肌细胞 ,LDH和AST漏出达最大值的时间分别为 1h和 3h ,而 13 2或 5 2 8μmol/L染毒分别为 3h和 8h。另外 ,乐果还可使心肌细胞骨架着色变浅 ,排列不规则。上述改变具有明显的剂量 效应和时程依赖性关系。【结论】 乐果对乳鼠心肌细胞有明显的毒作用 ,其机制可能涉及心肌细胞膜和线粒体膜通透性增加 ,刺激肌质网的钙泵系统摄取Ca2 +,引起细胞骨架构型改变 。

高功率脉冲微波和电磁脉冲辐照对心肌细胞膜电穿孔效应及机理的研究

电磁辐射可造成人体多器官系统的损伤。对其损伤的病理机制至今尚未完全阐明。心脏是电磁辐射损伤的敏感器官之一。本实验拟通过研究HPPM和EMP对心肌细胞的影响,探讨电磁辐射致伤的关键机制,解释脉冲电磁场致心肌细胞损伤的发展规律。本实验采用HPPM和EMP辐照原代培养心肌细胞的方法,用原子力显微镜、激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪和全自动生化检测仪等多种实验手段,检测辐照对细胞膜形态、结构和功能的影响。结果发现HPPM和EMP辐照后,心肌细胞搏动减慢,形态异常,活力下降,凋亡和坏死率明显增加。细胞膜出现数量不等、大小不一的电穿孔,细胞膜通透性丧失,结构破坏,细胞培养液中Na+、K+、Ca2+、Cl-、Mg2+、Ca2+和无机磷离子浓度显著升高(P<0.01),细胞内Ca2+浓度显著降低(P<0.01)。结果提示心肌细胞是电磁辐射损伤的敏感细胞,脉冲电磁场可致心肌细胞膜电穿孔,细胞形态、结构和功能均受到严重损伤。电穿孔效应是解释电磁辐射非热效应的关键机制之一。电穿孔导致的细胞膜通透性和膜结构改变存在一定发展规律。

基于密度梯度法分离纯化的改良培养新生小鼠心肌细胞方法研究

目的基于Percoll不连续密度梯度法分离纯化心肌细胞,建立一个快速稳定提取新生小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法在无菌状态下取C57BL/6乳鼠心室,用低浓度Ⅱ型胶原酶消化,通过调整温度、消化方式、离心时间及转速,采用Percoll密度梯度法分离纯化心肌细胞。观察不同时间心肌细胞形态;用0.4%台盼蓝染色检测细胞存活率及细胞数量;采用免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达情况,鉴定心肌细胞及其纯度。结果5次培养结果显示,心肌细胞的平均存活率为(93.12±0.75)%,纯度为(96.36±0.60)%,细胞生长状态良好,可以贴壁自发搏动。结论采用本方法能获得产量、存活率及纯度很高的新生小鼠原代心肌细胞,耗时较短,是一种理想的分离纯化原代心肌细胞的方法,可满足后续各种实验要求。

缺血再灌注对心肌细胞CX43表达的影响

目的检测缝隙连接通道蛋白43(Conexin43,CX43)在缺血再灌注中的心肌细胞基因表达和CX43通道蛋白变化情况,分析CX43变化的原因,判断CX43在心肌缺血再灌注中所起得作用。方法原代培养心肌细胞,建立缺血再灌注模型,分别于正常、缺氧30 min、再灌注1h、2 h、3 h、6 h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CX43mRNA表达、蛋白免役印迹法(Western blot)检测CX43蛋白的含量。结果未用药干预的心肌细胞缺氧30 min时CX43mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异(P＞0．05),再供氧1h、2 h、3 h、6 h则分别减少了39．16%、45．00%、46．67%、51．67%。和正常相比差异显著(P＜0．01)。其中再供氧1 h下降幅度最大。结论CX43在心肌细胞缺氧再灌注过程中mRNA表达与蛋白含量均是减低的,其中再供氧1 h下降幅度最大。

AngⅡ对心肌细胞Kv4.2钾通道蛋白表达的影响及机制

【目的】体外培养新生大鼠心肌细胞,观察AngⅡ在诱导细胞肥厚过程中对Kv4.2蛋白表达的影响,及钙离子在其细胞内信号传导通路中的作用。【方法】建立AngⅡ致心肌细胞肥大模型,用激光共聚焦显微镜检测AngⅡ对心肌细胞胞浆钙离子浓度的影响,用流式细胞仪检测AngⅡ在诱导心肌细胞肥厚过程中细胞Kv4.2表达的变化。【结果】AngⅡ明显增加细胞的蛋白总量,诱导心肌细胞肥大,AngⅡ能增加心肌细胞胞浆钙离子浓度,下调Kv4.2编码的通道蛋白的表达含量。【结论】AngⅡ在诱导心肌细胞肥大过程中,可能通过细胞内钙离子以外的信号通路下调Ito通道蛋白Kv4.2。

心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性研究

目的:初步探讨AngⅡ诱导心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性。方法:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大;通过免疫组织化学染色法检测模型中TNNI3K基因的蛋白表达情况。结果:经AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大,且实验组细胞中TNNI3K基因的蛋白表达增强。结论:TNNI3K基因参与了AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥厚机制。

三七总皂苷对去甲肾上腺素诱导的心肌肥大的影响

目的:研究三七总皂苷(PN S)对去甲肾上腺素(NE)诱导的新生大鼠心肌肥大的作用,并探讨其作用机制。方法:用NE诱导培养新生大鼠心肌细胞制作心肌肥大模型。经G iem sa染色后用图像分析仪测定细胞表面积,B rad ford法测细胞蛋白质含量,观察0.02、0.1、0.5 g.L-13个浓度的PN S对肥大心肌细胞的影响。结果:肥大组细胞表面积及蛋白质含量比对照组明显增加(P<0.01);PN S中、高剂量组与肥大组比较,细胞表面积及蛋白质含量均显著减少(P<0.01);低剂量PN S对细胞表面积及蛋白质含量无明显影响(P>0.05)。结论:PN S可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应。