大鼠睾丸间质细胞分离和原代培养技术

大鼠睾丸间质细胞分离和原代培养技术徐国刚１吴晓芸２丁训诚２蒋学之１１．上海医科大学劳动卫生教研室（２０００３２）２．上海计划生育研究所生殖毒理监测中心睾丸间质细胞（Ｌｅｙｄｉｇｃｅｌ）的主要功能是合成和分泌雄性激素。通过分离和体外培养，不仅可以研究化...

神经母细胞瘤骨髓转移细胞体外原代培养技术的实验研究

目的 根据神经母细胞瘤 (neuroblastoma,NB)易发生早期骨髓转移的特点 ,建立NB骨髓转移细胞体外原代培养的实验技术。方法 对 2 7例伴骨髓转移的NB患者进行NB骨髓转移细胞体外原代培养 ,并与已建立的SMS KCNR和SH SY5Y细胞系进行比较 ,在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况及形态学特点 ,同时应用单克隆抗体F3系列检测原代培养的NB骨髓转移细胞。结果 在 2 7例NB骨髓转移细胞体外原代培养中 ,培养成功 9例 ,其细胞生长情况及形态学特点与SMS KCNR和SH SY5Y细胞系基本一致 ,单克隆抗体F3系列检测均阳性。结论 NB骨髓转移细胞体外原代培养技术的成功建立为NB体外诱导逆转及多药耐药等复杂机制研究提供更接近体内生物学性状的细胞来源。

人羊膜上皮细胞原代培养及肝细胞特异性蛋白的表达

目的完善人羊膜上皮细胞（AECs）的原代培养技术，检测肝细胞特异性蛋白在AECs中的表达。方法采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法分离获取AECs并进行愿代培养。分别向培养液中添加10、20、40ng／mL表皮生长因子（EGF）和10ng／mL的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况，从中选择最适宜AECs原代培养的细胞培养液。以培养液中未添加生长因子的原代培养细胞作为对照。将羊膜组织石蜡切片和AECs细胞爬片进行免疫组化染色，

人原代肝癌细胞培养方法现状及展望

人肝癌细胞的原代培养技术是肝癌细胞建系与体外药敏试验的关键,对肝癌的基础及临床研究意义重大,但目前国内外尚无系统的方法总结。本文就人原代肝癌细胞的取材、分离、纯化、鉴定、培养基的选择及培养模型进行了综述,尤其是对当前最常用的两种分离方法进行了详细介绍,并重点突出了培养模型在人肝癌细胞原代培养中潜在的重要性,同时也指出了人肝癌细胞原代培养普遍存在的问题,为从事肝癌研究的同行提供参考和借鉴。

人乳腺癌原代细胞组织块培养方法的改良及其鉴定

目的通过对人乳腺癌原代细胞组织块培养方法进行改良,建立一种快速高效可获得高纯度的人乳腺癌细胞原代培养方法,为乳腺癌深入研究提供实验基础。方法取经临床病理诊断确诊为乳腺导管原位癌患者的癌组织标本,所有样本随机分为改良组(全程正置培养瓶进行培养,原代细胞铺满瓶底50%左右,用延长酶消化时间差法一次性纯化原代细胞)和传统组(翻转培养瓶倒置孵箱1~2 h后,再正置培养瓶培养,原代细胞铺满瓶底80%~100%时,用反复酶消化时间差法纯化原代细胞)。在倒置显微镜下观察,比较两组原代细胞爬出时间、爬出数量和贴壁生长情况;细胞计数比较两组组织块培养7 d后获得贴壁细胞总数;免疫组化和流式细胞术鉴定、比较两组纯化后原代细胞的纯度;MTT法检测两组纯化培养48 h后贴壁细胞的活性。结果经改良组织块培养法2 d后,见大量细胞从组织块四周爬出,培养3 d后见爬出原代细胞贴壁生长,胞质展开,培养5 d后见细胞融合贴壁生长,铺满瓶底50%左右;而传统组织块培养法培养2 d后见少量细胞爬出,培养5 d才见少量细胞贴壁生长,培养10d后原代细胞方可铺满瓶底50%左右;人乳腺癌原代细胞培养7 d贴壁细胞总量,改良组为(9.88±0.20)×10^5个,传统组为(4.88±0.21)×10^5个;纯化后改良组细胞纯度为(99.13±0.06)%,传统组为(75.72±4.96)%;纯化培养48 h后贴壁原代细胞活性改良组为(0.86±0.03),传统组为(0.47±0.01),以上观察指标均明显高于传统组织块培养方法,有统计学意义(P<0.05)。获得的贴壁人乳腺癌原代细胞胞质展开,多呈扁平多边形,细胞体积较大,细胞核多位于细胞中央,相互衔接后呈典型的“铺路石”状,细胞结合紧密,生长分裂旺盛。结论本实验成功建立了一种高效快速获得高纯度的人原代乳腺癌细胞原代培养的方法,为进一步的实验研究奠定基础。

微血管内皮细胞的原代培养

本期“改良肺微血管内皮细胞原代培养技术及细胞鉴定”参考文献12：时全星，孙新，李娟，等．微血管内皮细胞的原代培养[J]．现代生物医学进展，2010，10（19）：3609—3612．本文利用大鼠肺组织的原代培养方法（组织块贴壁法）获得肺微血管内皮细胞（PMVECs）。作者通过改进组织块培养时间、培养液中血清的浓度以及培养瓶的材质等措施，经光镜和电镜扫描观察细胞形态、Ⅷ因子抗原检测进行细胞鉴定，PMVECs细胞生长速度和纯度都比较高，改良后的组织块培养方法简单、快捷、有效。

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血管组织工程种子细胞原代培养技术的改良 唐新华，黄玲，夏宁，等．