右美托咪定诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响

目的右美托咪定神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨右美托咪定对氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元细胞,随机分为溶剂对照a组(等渗盐水)、氯胺酮a组(氯胺酮终浓度为100μmol/L)、氯胺酮+右美托咪定组[(100μmol/L氯胺酮+浓度分别为0.001、0.01、0.1、1μmol/L的右美托咪定,分为0.001μmol/L亚组、0.01μmol/L亚组、0.1μmol/L亚组、1μmol/L亚组)],处理24 h后,用MTT法检测神经元存活率的变化。此外,再将神经元细胞随机分为溶剂对照b组(等渗盐水)、氯胺酮b组(氯胺酮终浓度为100μmol/L)、右美托咪定+氯胺酮组(0.1μmol/L右美托咪定+100μmol/L氯胺酮)、LY294002预处理组(100μmol/L氯胺酮+0.1μmol/L右美托咪定+10μmol/L的LY294002),处理24 h后,用Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,Western blot法测定神经元p Akt和cleavedcaspase-3蛋白水平。结果 0.001μmol/L亚组、0.01μmol/L亚组、0.1μmol/L亚组、1μmol/L亚组的神经元存活率分别为(56.4±7.21)%、(60.5±4.2)%、(69.6±6.1)%、(84.5±7.3)%、(81.5±6.2)%,其中0.1μmol/L亚组右美托咪定产生的保护作用最好(P<0.05)。LY294002预处理组、氯胺酮b组神经元凋亡率[(36.8±4.4)、(43.4±4.5)%]较溶剂对照b组、右美托咪定+氯胺酮组[(7.5±1.1)、(16.4±3.6)%]显著增加(P<0.01)。LY294002预处理组、氯胺酮b组的p Akt蛋白水平(0.26±0.02、0.15±0.01)较溶剂对照b组(0.61±0.05)、右美托咪定+氯胺酮组(0.50±0.04)显著降低(P<0.01)。LY294002预处理组、氯胺酮b组的cleaved-caspase-3蛋白水平(0.40±0.02、0.65±0.03)较溶剂对照b组(0.10±0.02)、右美托咪定+氯胺酮组(0.12±0.01)显著增加(P<0.01)。结论右美托咪定可对抗氯胺酮引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路有关。

用血清药理学方法观察“李氏5号方”对原代培养皮层神经细胞谷氨酸损伤的保护作用

运用血清药理学方法，取新生小鼠大脑皮层进行体外神经细胞培养，建立离体的神经细胞谷氨酸损伤模型，通过形态学观察、ＭＴＴ 自动微量法研究“李氏５ 号方”对原代培养皮层神经细胞谷氨酸损伤的影响。研究结果表明“李氏５ 号方”水煎剂（ 含挥发油成分） 虽能抑制原代培养皮层神经细胞损伤，但作用不显著，而“李氏５ 号方”含药血清则能不同程度地抑制谷氨酸介导的神经损伤，并呈剂量依赖性。提示“李氏５ 号方”

丙泊酚诱导大鼠原代培养皮层神经元凋亡

目的探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12h后,采用MTT法检测两组神经元存活率,Hoechst33258核染色法检测神经元的凋亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位,Western blot法检测神经元cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量。结果丙泊酚组皮层神经元存活率(54.4%±6.4%),明显低于对照组(99.8%±4.1%)(P<0.05);神经元凋亡率(46.5%±5.3%),明显高于对照组(7.2%±0.9%)(P<0.05),线粒体膜电位(59.6%±4.3%)明显低于对照组(99.9%±5.7%)(P<0.05);cyt-c蛋白含量(0.38±0.03),明显高于对照组(0.15±0.02)(P<0.05),cleaved-caspase-3蛋白含量(0.46±0.04)明显高于对照组(0.13±0.02)(P<0.05)。结论丙泊酚可诱导发育期原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与抑制线粒体膜电位,增加cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量有关。

17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响

目的 17β雌二醇的神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为3组:对照组(给予等体积20%脂肪乳),丙泊酚组(500μmol/L丙泊酚),丙泊酚+17β雌二醇组(500μmol/L丙泊酚,0.1μmol/L 17β雌二醇)。药物处理12 h后,在光镜下观察各组神经元的形态变化,MTT法检测神经元存活率的变化,流式细胞仪检测神经元的调亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位的变化。结果与对照组比较,丙泊酚组光镜下神经元数量明显减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂。与丙泊酚组神经元形态变化比较,丙泊酚+17β雌二醇组明显改善。丙泊酚组神经元存活率、线粒体膜电位[(52.3±5.2)%、(59.1±5.3)%]较对照组[(99.9±3.6)%、(99.6±5.8)%]、丙泊酚+17β雌二醇组[(90.1±7.2)%、(89.2±7.1)%]均显著下降(P<0.01)。丙泊酚组神经元凋亡率[(43.4±4.6)%]较对照组[(3.1±0.2)%]、丙泊酚+17β雌二醇组[(22.3±3.2)%]均显著增加(P<0.01)。结论 17β雌二醇可能通过抑制神经元线粒体膜电位的下降对丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡产生保护作用。

右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡

目的探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制。方法体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予500μmol/L丙泊酚和(或)不同浓度右美托咪定处理12h后,分为丙泊酚组、右美托咪定+丙泊酚组,对照组给予同溶剂的20%脂肪乳,用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,蛋白质印迹法(Western blotting)测定神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平。结果与对照组比较,丙泊酚组神经元存活率明显下降,神经元凋亡率明显增加,pCREB蛋白水平明显降低,Cyt-C蛋白水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与丙泊酚组比较,右美托咪定+丙泊酚组神经元存活率明显增加,神经元凋亡率明显下降,pCREB蛋白水平明显增加,Cyt-C蛋白水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与增加pCREB蛋白水平,降低Cyt-C蛋白水平有关。

右美托咪定对丙泊酚诱导的大鼠原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制

目的探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元，随机分为4组：溶剂对照组（给予等溶剂的20％脂肪乳），丙泊酚组（终浓度为500μmol／L），右美托咪定±丙泊酚组（终浓度分别为0．1μmol／L，500μmol／L）和LY294002预处理组（右美托咪定终浓度为0．1μmol／L，丙泊酚终浓度为500μmol／L，LY294002终浓度为10μmol／L）。上述药物处理12h后，用MTT法检测各组神经元存活率的变化，Hoechst33258核染色法检测神经元调亡，Westernblot法测定神经元pAkt和bcl-2蛋白水平。结果与溶剂对照组比较，丙泊酚组神经元存活率显著下降[（53．4±4．2）％vs（99．9±6．3）％；P〈0．01]，神经元凋亡率显著增加[（44．6±4．3）％vs（5．8±0．4）％；P〈0．01]，pAkt[（0．41±0．03）vs（0．86±0．07）]和bcl-2[2（0．15±0．02）vs（0．72±0．03）]蛋白水平显著降低（均P〈0．01）。与丙泊酚组比较，右美托咪定±丙泊酚组神经元存活率（86．4±5．3）％显著增加（P〈0．01），神经元凋亡率（23．1±3．5）％显著下降（P〈0．01），pAkt蛋白水平（0.8±0．03）和bcl-2蛋白水平（0．52±0．05）显著增加（P〈0．01）。P13K抑制剂LY294002抑制了右美托咪定的神经保护作用，与右美托咪定±丙泊酚组比较，LY294002预处理组神经元存活率（64．3±5．1）％显著下降（P〈0．01），神经元凋亡率（38．8±4．9）％显著增加（P〈0．01），pAkt蛋白水平（0．52±0．04）和bcl-2蛋白水平（0．31±0．02）显著降低（P〈0．01）。结论右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡，其机制可能与激活P13K—Akt—Bcl-2信号通路有关。

丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元BDNF和p75NTR水平的影响

目的探讨丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:溶剂对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理皮层神经元12 h后,用光学显微镜观察两组皮层神经元的形态学变化,MTT法检测神经元存活率的变化,Western blot法检测神经元脑源性神经营养因子(BDNF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)以及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白水平的变化。结果与溶剂对照组比较,丙泊酚组光镜下观察显示皮层神经元数量明显减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂。神经元存活率显著性下降(P<0.01),BDNF和Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),p75NTR蛋白水平显著性增加(P<0.01)。结论丙泊酚可引起发育期原代培养皮层神经元损伤,其机制可能与下调BDNF、Bcl-2和上调p75NTR蛋白水平有关。

经典型蛋白激酶Cγ及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺缺血损伤中的作用

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中的作用。方法利用cPKCγ基因敲除(cPKCγ-/-)小鼠和原代培养脑皮层神经元1hOGD/24h复糖复氧(R)模拟离体细胞缺血模型,给予14-3-3γ抑制剂R18干扰,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹(Westernblotting)和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,验证cPKCγ与14-3-3γ的相互作用及其对原代培养小鼠脑皮层神经元1hOGD/24hR缺血损伤的影响。结果Co-IP结果证明,14-3-3γ与cPKCγ在小鼠脑皮层中确实存在相互作用;1hOGD/24hR处理使原代培养野生型(cPKCγ+/+)小鼠脑皮层神经元内cPKCγ蛋白水平明显降低,而14-3-3γ蛋白水平显著增加(P<0.05,每组n=6);对于原代培养cPKCγ-/-小鼠脑皮层神经元,尽管14-3-3γ表达水平明显高于cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元,但1hOGD/24hR处理却使14-3-3γ表达水平显著降低(P<0.05,每组n=6),提示cPKCγ可影响神经元内14-3-3γ的表达水平。此外,MTT结果表明,14-3-3γ抑制剂R18(100μmol/L)可显著加重1hOGD/24hR处理原代培养cPKCγ-/-和cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元的缺血损伤(P<0.05,每组n=6)。结论cPKCγ与14-3-3γ在小鼠脑皮层神经元内存在相互作用并影响14-3-3γ的蛋白表达水平,cPKCγ和14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元缺血/低氧损伤中起保护作用。

氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡

目的探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7 d的大鼠皮层神经元,用MTT法检测不同浓度氯化锂(0.1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组:溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0.1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pG SK-3β)和裂解半胱天冬酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0.01),神经元凋亡率显著增加(P<0.01),pG SK-3β蛋白水平显著下降(P<0.01),cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P<0.01),神经元凋亡率显著下降(P<0.01),pG SK-3β蛋白水平显著增加(P<0.01),cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pG SK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。

17β雌二醇对丙泊酚诱导皮层神经元凋亡的影响

目的探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为三组:溶剂对照组(给予等溶剂20%脂肪乳),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),17β雌二醇+丙泊酚组(17β雌二醇终浓度为0.1μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L)。上述药物处理皮层神经元12 h后,用Hoechst 33258核染色法和TUNEL法检测皮层神经元调亡,Western-blot法测定神经元Bcl-2,Bax和cleaved caspase-3蛋白的水平。结果与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著性增加(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bax蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性降低(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,17β雌二醇+丙泊酚组神经元凋亡率显著性下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bax蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性增加(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性下降(P<0.01)。结论 17β雌二醇可通过影响Bc1-2和Bax蛋白水平抑制皮层神经元凋亡,产生保护作用。

不同浓度锂对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的通过研究不同浓度锂对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响,进一步探讨锂的神经元保护作用以及锂对脑发育的影响.方法建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术,通过加载0.625、1.250、2.500、5.000和10.000 mmol/L浓度的氯化锂,镜下观察神经元的生长和存活情况,测量神经元最长突起长度,通过噻唑蓝(MTT)还原法进一步观察细胞的生长活力.结果与对照组相比,氯化锂处理组的神经元胞体透亮,出芽快,神经元突起明显增长;且生长活力强于对照组,以5.000mmol/L浓度[(53.80±5.84)μm]的锂作用最强,差异有显著性(P＜0.01).结论锂可促进原代培养皮层神经元的生长和存活.

不同浓度醋酸铅对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的研究不同浓度铅对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响.方法建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术,通过不同浓度醋酸铅染毒,观察神经细胞的生长和存活情况.结果终浓度为10-8mol/L的醋酸铅即可抑制神经元突起生长,使细胞生长活力下降甚至死亡.随着醋酸铅的终浓度进一步加大,对神经元的损伤逐渐增强.结论铅能够抑制原代培养皮层神经元生长和存活.

氯胺酮对原代培养神经元神经甾体水平的影响

研究表明在中枢神经系统发育和成熟过程中,神经甾体水平下降或缺乏会引起神经发育的异常[1].本研究旨在观察氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡是否伴随神经甾体合成代谢的变化.