副干酪乳酪杆菌N1115的巨噬细胞免疫活化产物促进原代海马神经细胞发育

目的初步探究副干酪乳酪杆菌N1115活菌介导免疫途径对体外培养的原代海马神经细胞发育的影响。方法以适宜浓度的副干酪乳酪杆菌N1115活菌悬液为实验组,以肽聚糖(PGN)、脂多糖(LPS)为阳性对照,以RPMI1640培养基为空白对照,分别与RAW264.7细胞共培养,获得共培养上清液及细胞总RNA,测定细胞因子的表达及分泌情况。各组上清液经离心后以适当的比例与原代海马神经细胞共培养,收集共培养上清液,提取细胞总RNA,测定神经细胞突触发育相关基因的表达情况;原代海马神经细胞免疫荧光染色后对突触前后膜相关蛋白——突触后膜致密蛋白95(PSD95)、突触生长蛋白(SYP)及神经细胞成熟标志物——微管相关蛋白2(MAP-2)、双皮质素(DCX)进行定量分析,对神经细胞的形态发育进行测量。结果与空白对照相比,N1115活菌干预RAW264.7细胞后,细胞免疫功能激活,白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA相对表达量分别提高7471%、926%,分泌量分别提高184.16 pg/mL、12320.76 pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);N1115活菌的激活能力强于PGN,但弱于LPS,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照相比,N1115活菌-RAW264.7细胞共培养上清液干预原代海马神经细胞后,10%上清干预组原代海马神经细胞活率提升19.25%,差异有统计学意义(P<0.05),突触前后膜SYP、PSD95 mRNA相对表达量分别提高137%、159%,差异有统计学意义(P<0.05)。N1115活菌上清干预组神经细胞的突起总长度(489.88μm)较空白对照组(381.51μm)增加,胞体面积(2092.22μm^(2))、轴突长度(184.78μm)、突起总长度、平均突起长度(108.38μm)、分支点(4.84个)较两阳性对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论副干酪乳酪杆菌N1115可激活巨噬细胞的免疫调节功能,从而促进神经细胞的形态发育以及突触功能。

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞Sorcin、RyR2mRNA基因表达的影响

目的研究β-淀粉样蛋白（Aβ）对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的影响。方法新生1-3天的Wistar大鼠，取其海马组织，原代培养8d后，用已老化过的Aβ25-35对海马神经细胞进行1μmol／L，10μmol／L和20μmol／L剂量的染毒，培养24和48h后分别观察海马神经细胞形态、和海马神经细胞内钙调节相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的基因表达水平。结果随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长，可发现随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长，海马细胞出现细胞凋亡的比例增加，其中Aβ25-35 20μmol／L染毒48h培养海马细胞中出现了大量早期凋亡细胞和少量中期凋亡细胞。实时定量PCR结果显示，10μLmol／LAβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后SorcinmRNA的相对表达量为（1．42±0．03）和（1．63±0．02），与对照组相比，表达增加（P〈0．05）；20μmol／L Aβ25-35在对原代细胞染毒24h和48h后SorcinmRNA的相对表达量（2．11±0．05）和（2．23±0．05），与对照组相比，表达增加（P〈0．05）；20μmol／L Aβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后RyR2mRNA的相对表达量为（1．64±0．03）和（1．95±0．03），表达显著高于对照组相（P〈0．05）。结论Aβ具有神经毒性，可抑制海马神经细胞的生长，可通过作用于钙调节相关蛋白的表达，诱发阿尔茨海默氏病（AD）的发生。