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siRNA反向转染法提高原代癌相关纤维母细胞转染效率的研究 被引量:2
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作者 柴翠翠 单丽辉 +3 位作者 齐蕾 周秋锋 吴红梅 王立峰 《山东医药》 CAS 2012年第24期34-36,I0002,共4页
目的探讨提高原代癌相关纤维母细胞转染效率的方法,并优化实验条件。方法对比正反两种转染方法转染siRNA至原代癌相关纤维母细胞的转染效率,并分析两种转染试剂在转染原代细胞方面的不同。结果反向转染组转染siRNA至原代癌相关纤维母细... 目的探讨提高原代癌相关纤维母细胞转染效率的方法,并优化实验条件。方法对比正反两种转染方法转染siRNA至原代癌相关纤维母细胞的转染效率,并分析两种转染试剂在转染原代细胞方面的不同。结果反向转染组转染siRNA至原代癌相关纤维母细胞的转染效率高于正向转染组(P<0.05);两种转染试剂转染效率无统计学差异(P>0.05)。结论反向转染法可以显著提高原代癌相关纤维母细胞siRNA转染效率;两种转染试剂转染效率无明显差异。 展开更多
关键词 小干扰RNA 反向转染法 正向转染法 原代癌相关纤维母细胞
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口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究 被引量:7
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作者 吴国民 胡敏 +3 位作者 袁红艳 张茹慧 孙秀梅 周悦 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期687-689,共3页
目的:对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)及癌相关成纤维细胞(CAFs)进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法:取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数... 目的:对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)及癌相关成纤维细胞(CAFs)进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法:取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞(NFs)和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果:获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论:通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。 展开更多
关键词 鳞状细胞 相关纤维细胞 原代培养
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胃癌相关纤维母细胞中miRNAs的表达及对癌细胞迁移和侵袭的影响 被引量:10
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作者 闫玉 王瑞芬 +1 位作者 乔萌 王立峰 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期601-605,共5页
目的观察胃癌相关纤维母细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)中多种微小RNAs(microRNAs,miRNAs)的表达水平,并探讨CAFs中miRNA-214的表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法原代培养人胃黏膜正常纤维母细胞(normal fibroblasts... 目的观察胃癌相关纤维母细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)中多种微小RNAs(microRNAs,miRNAs)的表达水平,并探讨CAFs中miRNA-214的表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法原代培养人胃黏膜正常纤维母细胞(normal fibroblasts,NFs)和胃CAFs,采用RT-PCR检测NFs和CAFs中多种miRNAs表达水平;利用Transwell小室建立CAFs与胃癌细胞MGC-803相互作用的体外模型,分析CAFs中miRNA-214对MGC-803迁移和侵袭能力的影响。结果与NFs相比,18种miRNAs在CAFs中的表达均有差异。其中miRNA-214在NFs和CAFs中的表达差异最显著,且在CAFs中低表达。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,上调CAFs中miRNA-214的表达水平明显抑制胃癌细胞MGC-803迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论人胃癌微环境中CAFs和NFs的miRNAs表达差异有显著性,其中miRNA-214在CAFs中的表达明显降低;过表达CAFs中的miRNA-214可以显著降低胃癌细胞的迁移和侵袭能力,在胃癌进展中发挥抑制作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 相关纤维母细胞 miRNA-214 迁移 侵袭
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喉肿瘤相关成纤维细胞促进原代喉鳞状细胞癌细胞体外生长 被引量:1
4
作者 王媚 吴春萍 +2 位作者 曹晓娟 郑文伟 范国康 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期177-182,200,共7页
目的验证喉肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对原代培养的喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞的体外生长是否有促进作用。方法选取20例喉癌临床标本进行原代培养,将生长出的原代喉癌细... 目的验证喉肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对原代培养的喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞的体外生长是否有促进作用。方法选取20例喉癌临床标本进行原代培养,将生长出的原代喉癌细胞中的CAFs通过差速消化法去除后继续单独培养,相差显微镜观察喉癌细胞在传代培养过程中的形态学变化,流式细胞仪检测喉癌细胞在传代过程中凋亡细胞比例的变化,Western blot检测喉癌细胞在传代过程中凋亡蛋白Caspase 3表达水平的变化,以始终与CAFs共培养传代的喉癌细胞作为对照。结果与CAFs分离后喉癌原代细胞在体外传代培养过程中生长活性很快下降,多数在3代以内停止生长。相差显微镜观察到形态学上凋亡漂浮的喉癌细胞逐代增多,流式细胞仪检测到的凋亡细胞比例逐代增加,Western blot检测到的Caspase 3表达水平逐代增加;而始终与CAFs共培养生长的LSCC细胞在传代过程中生长活性却无明显下降(P<0.05)。结论喉肿瘤相关成纤维细胞对体外原代培养的LSCC细胞的生长具有明显的促进作用。 展开更多
关键词 肿瘤相关纤维细胞 喉鳞状细胞 原代培养 凋亡
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癌相关纤维母细胞对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响 被引量:2
5
作者 单丽辉 张思 +4 位作者 翟丽丽 齐蕾 柴翠翠 韩伟 王立峰 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2012年第2期97-101,共5页
目的 探讨癌相关纤维母细胞(CAFs)对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,为胃癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点.方法 (1)原代培养正常纤维母细胞(NFs)和CAFs,用CCK8实验和流式细胞仪检测间接共培养后,NFs和CAFs对MG... 目的 探讨癌相关纤维母细胞(CAFs)对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,为胃癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点.方法 (1)原代培养正常纤维母细胞(NFs)和CAFs,用CCK8实验和流式细胞仪检测间接共培养后,NFs和CAFs对MGC-803细胞增殖和凋亡能力的影响;(2)通过transwell共培养小室建立MGC-803与CAFs相互作用的体外模型,分析CAFs对MGC-803迁移和侵袭能力的影响.结果 (1)与NFs相比,CAFs在体外传代培养过程中,仍高表达波形蛋白(Vimentin)、纤维母细胞活化蛋白(FAP);(2)与NFs组相比,CAFs促进MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,但是抑制其凋亡.结论 CAFs在胃癌的生长、迁移和侵袭等过程中起着重要的作用,并且可能成为胃癌治疗的新靶点. 展开更多
关键词 相关纤维母细胞 肿瘤-间质相互作用 肿瘤微环境
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食管鳞癌相关成纤维细胞的原代培养及其促癌作用研究
6
作者 兰子君 郭静宜 +2 位作者 刘轲 孔金玉 高社干 《食管疾病》 2021年第3期161-165,共5页
目的原代培养食管鳞癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)及癌旁相关成纤维细胞(peri-tumor fibroblast,PTF),并对其生物学特性及促癌作用进行初步探讨。方法对比使用组织块贴壁法和组织解离法,原代培养并分离纯化CAFs与... 目的原代培养食管鳞癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)及癌旁相关成纤维细胞(peri-tumor fibroblast,PTF),并对其生物学特性及促癌作用进行初步探讨。方法对比使用组织块贴壁法和组织解离法,原代培养并分离纯化CAFs与PTFs,采用CCK-8绘制其生长曲线,免疫荧光法对其表面标志物进行鉴定;建立原代成纤维细胞与食管鳞癌细胞系KYSE150体外共培养模型,采用Transwell和划痕实验评估成纤维细胞对食管癌细胞侵袭、迁移的影响。结果组织解离法较组织块贴壁法培养成功率更高,细胞生长更快,而组织块贴壁法纯度优于组织解离法;CAFs与PTFs均为波形蛋白(Vimentin)阳性、细胞角蛋白(CK19)阴性细胞;与PTFs相比,CAFs增殖活性明显较高,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)高表达;在共培养模型中,CAFs对于食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭、迁移行为具有显著促进作用(P<0.05),而PTFs的促进作用不明显。结论通过组织块贴壁法和组织解离法成功分离培养CAFs和PTFs,CAFs特异表达α-SMA,能够显著促进食管鳞癌细胞系KYSE150的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 食管鳞 相关纤维细胞 原代培养 肿瘤微环境
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肿瘤相关成纤维细胞对胆囊癌细胞生长和侵袭的影响 被引量:4
7
作者 陈晨 慎浩鑫 +4 位作者 陶杰 宋虎伟 马丽 王林 耿智敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1149-1154,共6页
目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光... 目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光进行鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测CAFs对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测CAFs对癌细胞侵袭能力的影响。结果酶消化法及组织块法均可获得人胆囊癌CAFs,以酶消化法更为简便、高效;MTT及Transwell侵袭实验证实CAFs可促进胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05),差距具有统计学意义。结论通过酶消化法可较为简便地获得人胆囊癌CAFs,CAFs可显著增强胆囊癌细胞增殖、侵袭能力,表明其在胆囊癌发生、发展中起重要作用。 展开更多
关键词 胆囊 原代培养 肿瘤相关纤维细胞 增殖 侵袭
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癌相关纤维母细胞对卵巢癌细胞的侵袭和转移的作用
8
作者 单丽辉 胡兵 +1 位作者 袁碧英 杨志蓉 《诊断病理学杂志》 2022年第6期504-509,共6页
目的 探讨癌相关纤维母细胞(CAF)对卵巢癌细胞侵袭和转移作用,为卵巢癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点。方法 采用免疫组化方法检测60例卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维母细胞活化蛋白(FAP-α)、CD3... 目的 探讨癌相关纤维母细胞(CAF)对卵巢癌细胞侵袭和转移作用,为卵巢癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点。方法 采用免疫组化方法检测60例卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维母细胞活化蛋白(FAP-α)、CD34和D2-40的表达情况,其中α-SMA和FAP-α用来标记CAF,CD34标记微血管密度(MVD),D2-40标记淋巴管密度(LVD),分析α-SMA、FAP-α、CD34和D2-40表达改变与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果 正常卵巢组织中,α-SMA和FAP-α均为阴性表达,α-SMA、FAP-α表达于卵巢癌相关纤维母细胞质中,并且与分化程度、FIGO分期、侵袭深度、淋巴结转移、淋巴管密度增加和微血管密度增加相关(P<0.05),而与患者的年龄、组织学分型无关(P>0.05)。MVD与分化程度、FIGO分期、侵袭深度和淋巴结转移相关(P<0.05),而与年龄无关(P>0.05)。LVD与分化程度、FIGO分期、侵袭深度和淋巴结转移相关(P<0.05),而与年龄无关(P>0.05)。α-SMA和FAP-α表达与MVD和LVD正相关(P<0.05)。结论 CAF通过促进血管再生和淋巴管再生而促进卵巢癌细胞的侵袭和转移,未来可能成为卵巢癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 Α-SMA FAP-α 相关纤维母细胞 卵巢
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人口腔癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定 被引量:2
9
作者 周美玲 李传祝 +3 位作者 王琼 杨聪翀 潘璐 刘来奎 《口腔生物医学》 2016年第2期57-61,共5页
目的:分离培养及鉴定口腔癌相关成纤维细胞(CAFs),为探究CAFs可能在肿瘤微环境促进口腔癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用奠定基础。方法:用组织块培养法和酶消化法分离培养、纯化原代口腔癌相关成纤维细胞CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞(N... 目的:分离培养及鉴定口腔癌相关成纤维细胞(CAFs),为探究CAFs可能在肿瘤微环境促进口腔癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用奠定基础。方法:用组织块培养法和酶消化法分离培养、纯化原代口腔癌相关成纤维细胞CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞(NFs);细胞免疫荧光技术及免疫蛋白印迹法对口腔CAFs和NFs进行鉴定。结果:口腔CAFs和NFs分离培养成功,口腔CAFs呈长梭形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱;NFs呈多胞质突的扁平星状,无重叠生长现象,排列有一定方向性。上皮标志物细胞角蛋白18(CK18)免疫荧光染色在口腔CAFs和NFs均呈阴性,间质标志物波形蛋白(Vimentin)染色均呈阳性。α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),成纤维细胞激活蛋白(FAP)、血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α)在CAFs染色呈阳性,而在NFs中染色呈阴性。结蛋白(Desmin)在CAFs和NFs中染色均呈阳性。蛋白表达水平上,相对于NFs,CAFs中α-SMA、PDGFR-α蛋白表达呈升高趋势,FSP-1呈下降趋势,而FAP、Desmin在NFs和CAFs中表达无明显差异。结论:CAFs与NFs相比,在形态结构、生长方式、蛋白表达等方面均有明显差异。 展开更多
关键词 相关纤维细胞 原代细胞培养 鉴定
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喉癌相关成纤维细胞的分离培养与鉴定 被引量:2
10
作者 齐淑轶 邓莅霏 +1 位作者 彭汉伟 王乐 《实用癌症杂志》 2020年第6期875-878,共4页
目的对喉癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常喉成纤维细胞(NFs)进行分离、培养、纯化并鉴定、分析其生物学特性。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行喉CAFs和NFs的原代培养。选择第3代喉CAFs及NFs,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色光... 目的对喉癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常喉成纤维细胞(NFs)进行分离、培养、纯化并鉴定、分析其生物学特性。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行喉CAFs和NFs的原代培养。选择第3代喉CAFs及NFs,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色光镜下观察细胞形态,免疫荧光法、qRT-PCR法及Western-blot法分别测定喉CAFs和NFs的CK、Vimentin、FAP及α-SMA的表达。CCK-8法检测喉CAFs和NFs的增殖活性,并绘制生长曲线。结果与喉NFs相比,喉CAFs细胞不规则,排列紊乱,且增殖活性明显增强;免疫荧光染色、qRT-PCR及western-blot检测发现,喉CAFs和NFs中CK均呈阴性表达,Vimentin、α-SMA及FAP则均呈阳性表达。结论通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的喉CAFs以供进一步研究之用。 展开更多
关键词 相关纤维细胞 原代培养
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人肺腺癌中癌相关成纤维细胞的分离培养与初步分析
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作者 孙世杰 田雷 +2 位作者 李丹 刘先俊 卜友泉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期872-877,共6页
目的:分离鉴定人肺腺癌组织中的癌相关成纤维细胞(cancer-associataed fibroblasts,CAFs),分析CAFs对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响,为进一步探索CAFs在肺癌发生发展中的作用及机制奠定基础。方法:获取人肺腺癌患者手术样本,分离并培养... 目的:分离鉴定人肺腺癌组织中的癌相关成纤维细胞(cancer-associataed fibroblasts,CAFs),分析CAFs对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响,为进一步探索CAFs在肺癌发生发展中的作用及机制奠定基础。方法:获取人肺腺癌患者手术样本,分离并培养癌组织中的成纤维细胞。采用相差显微镜观察细胞形态,采用间接免疫荧光实验分析关键分子标志物的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,采用流式细胞仪分析细胞周期;采用Transwell实验分析细胞迁移能力。采用共培养和制备条件培养基方法分析CAFs对肺腺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响。采用qRT-PCR检测关键基因表达的变化。结果:从人肺腺癌新鲜组织中分离获得CAFs,其形态为长梭形,表达纤粘蛋白和波形蛋白等成纤维细胞标志物,不表达上皮细胞角蛋白8/18(CK8/18)等上皮细胞标志物。肺腺癌CAFs增殖活跃。肺腺癌CAFs能明显促进A549的增殖和迁移能力,并明显上调A549细胞中c-Myc、PIM1、SOCS3和CCND1基因的表达。结论:成功分离了人肺腺癌CAFs,其能明显促进肺癌细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 纤维细胞 相关纤维细胞 原代培养
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乳腺癌基质成纤维细胞分离培养的优化及对乳腺癌细胞作用的初步研究 被引量:2
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作者 吴潇然 《天津医科大学学报》 2017年第6期489-492,501,共5页
目的:分离培养乳腺癌基质成纤维细胞,初步探讨其生物学特性及对乳腺癌细胞增殖转移能力的影响。方法:取自临床手术新鲜标本,用Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶消化法获得原代乳腺癌成纤维细胞(CAFs)及与之配对的正常乳腺成纤维细胞(NFs);显微镜... 目的:分离培养乳腺癌基质成纤维细胞,初步探讨其生物学特性及对乳腺癌细胞增殖转移能力的影响。方法:取自临床手术新鲜标本,用Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶消化法获得原代乳腺癌成纤维细胞(CAFs)及与之配对的正常乳腺成纤维细胞(NFs);显微镜观察细胞形态;免疫印迹和免疫荧光实验检测上皮细胞、间质细胞和成纤维细胞标志物表达;胶原收缩实验比较细胞收缩能力;平板克隆形成和Transwell细胞体外迁移侵袭实验,观测CAFs和NFs对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:分离得到CAFs和NFs,2次传代后可获得纯化细胞;成纤维细胞中高表达Vimentin和α-SMA,低表达E-cadherin;CAFs胶原收缩能力较NFs更强;CAFs条件培养基处理后的乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力增强。结论:成功获得CAFs和NFs,且与NFs相比,CAFs活化程度更高,CAFs对乳腺癌细胞体外增殖和转移能力的促进作用更强。 展开更多
关键词 乳腺 相关纤维细胞 分离 原代培养 转移
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人结肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性 被引量:5
13
作者 乌新林 林凯金 +3 位作者 苏秀兰 侯明星 董培德 施琳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2201-2204,F0003,共5页
目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养;选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过... 目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养;选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量。结果结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达;与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强;ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137)μg/L和(1.499±0.151)μg/L(P〈0.01),TGF-β分另0为(331.203±12.203)ng/L和(315.391±12.998)ng/L(P〈0.01),VEGF分别为(17.216±0.632)ng/L和(14.887±0.661)ng/L(P〈0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192)坤g/L和(1.436±0.102)μg/L(P〈0.01)。结论通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs;两者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义,这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌发生发展作用的生物学基础。 展开更多
关键词 结肠 相关纤维细胞 原代培养 生物学特性
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肿瘤相关成纤维细胞促进原代胰腺癌细胞生长及人源性异种移植瘤模型体内成瘤
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作者 陈拥华 李程 +3 位作者 梁艳 周利 杨桢 刘续宝 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2020年第3期278-283,共6页
目的优化人原代胰腺导管癌(PDAC)细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的分离及培养方法,验证CAFs对原代PDAC细胞的体外生长以及其对高度免疫缺陷模型NOG小鼠体内成瘤的影响,以探索人源性异种移植瘤(PDX)模型构建的新方法。方法首先原代培养... 目的优化人原代胰腺导管癌(PDAC)细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的分离及培养方法,验证CAFs对原代PDAC细胞的体外生长以及其对高度免疫缺陷模型NOG小鼠体内成瘤的影响,以探索人源性异种移植瘤(PDX)模型构建的新方法。方法首先原代培养手术切除的PDAC组织。以原代PDAC细胞单独培养为对照,观察CAFs和原代PDAC细胞共培养对PDAC细胞传代生长活性的影响。最后在NOG小鼠肩胛部注射混合培养的原代PDAC细胞和CAFs,观察PDX模型建模情况。结果原代PDAC细胞在体外单独培养传代少,均在5代及以内停止生长;与CAFs共培养可促进原代PDAC细胞生长活性,可稳定传至10代以上。NOG小鼠体内注射混合细胞(原代PDAC细胞+CAFs)建模2~3周即可形成肿瘤,而注射CAFs无肿瘤形成。混合细胞法建模有13例(92.9%)成瘤,单一细胞法有9例(64.3%)成瘤,可能因为样本量少,二者成瘤率比较差异无统计学意义(P=0.167);并且肿瘤细胞注射后2、4、6、8周时混合细胞法建模的肿瘤体积均明显大于对应观察时间点单一细胞法建模的肿瘤体积(P<0.01)。结论CAFs对原代PDAC细胞生长传代具有促进作用,原代PDAC细胞与CAFs共培养法可显著提高PDAC原代培养稳定传代,原代PDAC细胞与CAFs混合培养的细胞注射可提高NOG小鼠PDX建模成功率。 展开更多
关键词 肿瘤相关纤维细胞 胰腺 原代培养 人源性异种移植瘤模型
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人肺癌相关成纤维细胞的原代培养及其放射激活初探 被引量:2
15
作者 董熠 李营歌 +2 位作者 姚颐 郑忠亮 宋启斌 《肿瘤学杂志》 CAS 2018年第11期1071-1075,共5页
[目的]探讨在体外培养条件下,不同剂量的X线照射对人肺癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)表型的影响。[方法]用经组织块贴壁法从手术标本中提取人肺癌CAFs并原代培养。使用0Gy、4Gy、8Gy、12Gy、16Gy的不同剂量X线... [目的]探讨在体外培养条件下,不同剂量的X线照射对人肺癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)表型的影响。[方法]用经组织块贴壁法从手术标本中提取人肺癌CAFs并原代培养。使用0Gy、4Gy、8Gy、12Gy、16Gy的不同剂量X线照射CAFs,通过Western blot、qRT-PCR检测其平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、平足蛋白(podoplanin,PDPN)的蛋白和RNA水平;使用CCK8、划痕实验及流式细胞术检测细胞增殖和迁移及凋亡情况。[结果]与其他组比较,8Gy照射组的人肺CAFs中α-SMA、Vimentin、FAP、PDPN在蛋白和RNA水平表达更高。划痕实验提示8Gy照射组在48h首先愈合。CCK8研究提示该组细胞增殖活性明显高于其他照射组;流式细胞术显示照射后该组细胞凋亡率为37%,与0Gy组(36%)接近,明显低于其他照射剂量组。[结论]经过一定剂量的X线照射后,人肺CAFs可表达更高水平的标志蛋白、同时表现出更强的生长和迁移能力,而该表型变化在8Gy照射组最为显著,为将来深入探讨CAFs的放射激活机制奠定基础。 展开更多
关键词 相关纤维细胞 原代培养 放射 活化
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α-SMA和MMP-9在乳腺癌中的表达及意义 被引量:10
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作者 王瑞芬 黄坊 +2 位作者 孙和国 孙静 王立峰 《诊断病理学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期91-93,96,共4页
目的检测乳腺癌组织中α-SMA和MMP-9的表达情况,探讨其与乳腺癌侵袭转移的关系。方法应用免疫组化通用型二步法检测58例乳腺癌中α-SMA和MMP-9的表达,并分析两者的相关性,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果①10例正常乳腺组织中,... 目的检测乳腺癌组织中α-SMA和MMP-9的表达情况,探讨其与乳腺癌侵袭转移的关系。方法应用免疫组化通用型二步法检测58例乳腺癌中α-SMA和MMP-9的表达,并分析两者的相关性,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果①10例正常乳腺组织中,间质纤维母细胞α-SMA(-);58例乳腺导管原位癌、导管原位癌微灶浸润和浸润性导管癌间质纤维母细胞α-SMA表达呈不同程度上调;浸润性导管癌间质纤维母细胞α-SMA表达与肿瘤大小和组织学分级无关(P>0.05),而与淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05)。②正常乳腺组织MMP-9阳性率为20%(2/10),而乳腺浸润性导管癌中阳性率为70.7%(29/41),明显高于正常组织(P<0.01);MMP-9阳性表达与淋巴结转移、临床分期和肿瘤大小有关(P<0.05),而与乳腺癌组织学分级无关(P>0.05)。③α-SMA在乳腺浸润性导管癌相关纤维母细胞中的表达与癌细胞MMP-9的表达呈正相关(P<0.01)。结论α-SMA阳性的乳腺癌相关纤维母细胞可能参与了MMP-9降解基底膜和细胞外基质的过程,与乳腺癌侵袭转移密切相关。 展开更多
关键词 乳腺 间质 相关纤维母细胞 Α-SMA MMP-9
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食管癌变进程中HGF、c-met、VEGF蛋白的表达变化及意义 被引量:6
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作者 徐志彬 冯军波 +3 位作者 袁丽 郑秀丽 王士杰 吴明利 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第1期9-11,共3页
目的研究从正常食管→食管癌前病变→早期食管癌→进展期食管癌过程中,处于不同病变阶段上皮或间质中HGF、c-met及VEGF蛋白的表达变化及意义。方法免疫组化法检测HGF、c-met及VEGF蛋白在正常食管组织20份、低级别上皮内瘤变组织30份、... 目的研究从正常食管→食管癌前病变→早期食管癌→进展期食管癌过程中,处于不同病变阶段上皮或间质中HGF、c-met及VEGF蛋白的表达变化及意义。方法免疫组化法检测HGF、c-met及VEGF蛋白在正常食管组织20份、低级别上皮内瘤变组织30份、高级别上皮内瘤变组织50份、早期癌组织25份、进展期癌组织25份中的表达。抗体CD34标记血管内皮细胞,测算微血管密度。结果正常食管低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、早期癌变、早期癌、进展期癌上皮组织中,HGF蛋白阳性表达率依次为0(0/20)、3%(1/30)、26%(13/50)、36%(9/25)、60%(15/25);在间质中的阳性表达率依次为0(0/20)、0%(0/30)、30%(15/50)、52%(13/25)、76%(19/25);在食管病变上皮中c-met蛋白阳性表达率依次为0(0/20)、10%(3/30)、30%(15/50)、36%(9/25)、56%(14/25);在间质中VEGF蛋白阳性表达率依次为0(0/20)、3%(1/30)、26%(13/50)、36%(9/25)、52%(13/25);MVD值分别为12.33±1.68、15.72±1.97、20.91±2.20、26.42±1.96、30.01±2.35。5种组织中,HGF、c-met、VEGF蛋白的表达及MVD值差异有统计学意义(P均<0.01)。结论随食管癌变进展,食管上皮组织中HGF、cmet及间质中VEGF蛋白表达均明显升高,HGF/c-met蛋白通路可刺激间质成纤维细胞分泌VEGF蛋白,促进间质微血管形成,加速癌的进展。 展开更多
关键词 食管肿瘤 相关纤维母细胞 细胞生长因子 C-MET 血管内皮生长因子
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MMP-2、VEGF在食管癌变过程中的作用研究 被引量:5
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作者 徐志彬 袁丽 +2 位作者 郑秀丽 王士杰 吴明利 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第26期40-44,共5页
目的研究活化的间质成纤维细胞表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在正常食管、食管癌前病变、早期食管癌、进展期食管癌发展过程中的作用。方法免疫组织化学法检测MMP-2和VEGF蛋白在正常食管20例,低级别上皮内... 目的研究活化的间质成纤维细胞表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在正常食管、食管癌前病变、早期食管癌、进展期食管癌发展过程中的作用。方法免疫组织化学法检测MMP-2和VEGF蛋白在正常食管20例,低级别上皮内瘤变30例,高级别上皮内瘤变50例,早期癌25癌,进展期癌25例中的表达。抗体CD34标记血管内皮细胞,检测微血管密度。结果随食管癌变进展,MMP-2蛋白在食管间质中的表达阳性率依次为0%(0/20)、0%(0/30)、28%(14/50)、40%(10/25)和60%(15/25)。VEGF蛋白在间质成纤维细胞中的表达阳性率依次为0%(0/20)、3%(1/30)、26%(13/50)、36%(9/25)和52%(13/25),MMP-2和VEGF蛋白在5组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着食管癌变进展,间质成纤维细胞发生活化,分泌表达的MMP-2逐渐增多,从而降解基底膜,促进癌的下侵;过度表达的VEGF蛋白促进间质微血管的形成,加速癌的进展和转移。 展开更多
关键词 相关纤维母细胞 基质金属蛋白酶 前病变
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前列腺癌相关成纤维细胞的分离培养与鉴定 被引量:2
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作者 于胜强 王科 +3 位作者 杨典东 王健涛 李光磊 高振利 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期602-603,共2页
目的 分离培养前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)及正常成纤维细胞(NPF),探讨两者生物学差异.方法 用Percoll技术分离培养CAF及NPF细胞,用免疫荧光法检测上皮细胞标志物(Pan-CK),成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和平滑肌细胞标... 目的 分离培养前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)及正常成纤维细胞(NPF),探讨两者生物学差异.方法 用Percoll技术分离培养CAF及NPF细胞,用免疫荧光法检测上皮细胞标志物(Pan-CK),成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和平滑肌细胞标志物平滑肌肌动蛋白(SMA);用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长能力;用软琼脂糖实验检测两种细胞诱导良性细胞BPH-1恶变.结果 CAF与NPF细胞形态相似,均高表达Vimentin,不表达Pan-CK,CAF细胞高表达SMA.CAF细胞生长速度快于NPF细胞,第4天吸光度值分别为0.98 ±0.07、0.74±0.04,P<0.05;第6天吸光度值分别为2.06±0.13、1.59±0.14(P <0.05),且能诱导BPH-1恶性变.结论 CAF细胞高表达SMA,增殖能力强,能促进前列腺良性细胞恶性变. 展开更多
关键词 前列腺 相关纤维细胞 原代培养
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癌相关肌纤维母细胞与乳腺癌基因表型的关系
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作者 王浩 曹海玲 +3 位作者 康如 关伟南 韩靖 黄小英 《临床医学》 CAS 2015年第7期42-43,F0004,共3页
目的观察不同基因表型乳腺癌肿瘤间质中癌相关肌纤维母细胞的表达情况并探讨其意义。方法选取不同基因表型乳腺癌各10例进行免疫组化检测CD34、SMA的表达情况。结果 CD34在各种基因表型的乳腺癌间质中均不表达,而SMA在各种基因表型的乳... 目的观察不同基因表型乳腺癌肿瘤间质中癌相关肌纤维母细胞的表达情况并探讨其意义。方法选取不同基因表型乳腺癌各10例进行免疫组化检测CD34、SMA的表达情况。结果 CD34在各种基因表型的乳腺癌间质中均不表达,而SMA在各种基因表型的乳腺癌间质中均稳定表达,且表达强度比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论癌相关肌纤维母细胞在各种基因表型的乳腺癌间质中较一致存在,可以作为乳腺癌公共治疗靶点进行深入研究。 展开更多
关键词 乳腺 基因表型 相关纤维母细胞 CD34 SMA 免疫组化
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