背景和目的:2016年美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)宣布不再使用NCI-60细胞系进行药物筛选,提示传统的肿瘤细胞系失去作为药物研发和基础研究工具的价值。NCI-60细胞“退休”原因是基于癌症细胞系和动物的实验结果...背景和目的:2016年美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)宣布不再使用NCI-60细胞系进行药物筛选,提示传统的肿瘤细胞系失去作为药物研发和基础研究工具的价值。NCI-60细胞“退休”原因是基于癌症细胞系和动物的实验结果没有在临床试验中获得对应的预期,导致绝大部分潜在药物临床试验失败。癌症细胞系失去价值归因于肿瘤细胞经过长期培养后,其增殖和转移等主要生物学行为和与之有关的关键蛋白质系统发生了根本改变,已不能代表患者的真实癌症特征。现阶段需要创立一种来源于患者新鲜癌症组织和具有清晰临床背景的新癌症模型。本研究旨在为药物研发和基础研究建立经济的患者来源的可以无限传代的乳腺癌原代细胞系。方法:乳腺癌组织在贵州医科大学附属医院乳腺外科收集。肿瘤组织样本收集得到贵州医科大学附属医院伦理委员会批准(伦理编号:2022伦理第313号),收集和使用肿瘤组织均遵守赫尔辛基宣言,患者的乳腺癌组织消化分离后在BCMI培养基中培养,待乳腺癌细胞增殖到一定数量时更换成DMEM培养基。乳腺癌细胞经短串联重复序列(short tandem repeat,STR)检测确定细胞特异性遗传学标志和来源。克隆形成实验和动物实验分析乳腺癌原代细胞系形成肿瘤的能力。结果:成功建立了6种乳腺癌原代细胞系。他们具有清晰的临床病理学特征,包括病理学标志性分子检测、临床诊断、治疗方案和结果以及确定的预后结果。STR检测确定了6种乳腺癌原代细胞系特异性遗传标志和确定了该细胞系的来源。克隆形成实验和动物移植实验说明乳腺癌原代细胞系增殖能力显著大于传统乳腺癌细胞系,二者在形成肿瘤能力方面存在明显的差异。结论:构建的6种乳腺癌原代细胞系为乳腺癌药物研发和基础研究提供了新的癌症模型。展开更多
目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,...目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,使用胰蛋白酶梯度消化法传代使肿瘤纯度达>95%。进一步分析已建立细胞系(命名为ZLC-001)的核型、短串联重复序列(short tandem repeats,STR)、细胞增殖、肿瘤标志物检测和成瘤性等生物学特征。肿瘤原代细胞三维立体培养法药敏检测技术(collagen gel droplet-embedded culture drug sensitivity test,CD-DST)用于评估ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼和伊马替尼的药物敏感性。结果成功建立来自低分化肺癌患者(女性,44岁,pStageⅣ)的原代细胞系ZLC-001。ZLC-001细胞可贴壁生长,并可稳定传代>30代。生物学特征分析中核型分析表明染色体数目主要分布在60~69。免疫组织化学结果显示,细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和乳腺癌相关蛋白1(breast cancer associated protein 1,BRAP1)为阳性,波形蛋白、Wnt-1和钙结合蛋白(calretinin,CR)个别阳性,Napsin A、MOC-31、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF1)和D2-40均为阴性。ZLC-001细胞在裸鼠中成瘤能力强。ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼和伊马替尼耐药,但对拉帕替尼中度敏感。结论成功建立来自中国患者的新型低分化肺癌细胞系。这种功能齐全的细胞系为开展肺癌生物学和药物反应研究提供理想的模型与工具。展开更多
文摘背景和目的:2016年美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)宣布不再使用NCI-60细胞系进行药物筛选,提示传统的肿瘤细胞系失去作为药物研发和基础研究工具的价值。NCI-60细胞“退休”原因是基于癌症细胞系和动物的实验结果没有在临床试验中获得对应的预期,导致绝大部分潜在药物临床试验失败。癌症细胞系失去价值归因于肿瘤细胞经过长期培养后,其增殖和转移等主要生物学行为和与之有关的关键蛋白质系统发生了根本改变,已不能代表患者的真实癌症特征。现阶段需要创立一种来源于患者新鲜癌症组织和具有清晰临床背景的新癌症模型。本研究旨在为药物研发和基础研究建立经济的患者来源的可以无限传代的乳腺癌原代细胞系。方法:乳腺癌组织在贵州医科大学附属医院乳腺外科收集。肿瘤组织样本收集得到贵州医科大学附属医院伦理委员会批准(伦理编号:2022伦理第313号),收集和使用肿瘤组织均遵守赫尔辛基宣言,患者的乳腺癌组织消化分离后在BCMI培养基中培养,待乳腺癌细胞增殖到一定数量时更换成DMEM培养基。乳腺癌细胞经短串联重复序列(short tandem repeat,STR)检测确定细胞特异性遗传学标志和来源。克隆形成实验和动物实验分析乳腺癌原代细胞系形成肿瘤的能力。结果:成功建立了6种乳腺癌原代细胞系。他们具有清晰的临床病理学特征,包括病理学标志性分子检测、临床诊断、治疗方案和结果以及确定的预后结果。STR检测确定了6种乳腺癌原代细胞系特异性遗传标志和确定了该细胞系的来源。克隆形成实验和动物移植实验说明乳腺癌原代细胞系增殖能力显著大于传统乳腺癌细胞系,二者在形成肿瘤能力方面存在明显的差异。结论:构建的6种乳腺癌原代细胞系为乳腺癌药物研发和基础研究提供了新的癌症模型。
文摘目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,使用胰蛋白酶梯度消化法传代使肿瘤纯度达>95%。进一步分析已建立细胞系(命名为ZLC-001)的核型、短串联重复序列(short tandem repeats,STR)、细胞增殖、肿瘤标志物检测和成瘤性等生物学特征。肿瘤原代细胞三维立体培养法药敏检测技术(collagen gel droplet-embedded culture drug sensitivity test,CD-DST)用于评估ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼和伊马替尼的药物敏感性。结果成功建立来自低分化肺癌患者(女性,44岁,pStageⅣ)的原代细胞系ZLC-001。ZLC-001细胞可贴壁生长,并可稳定传代>30代。生物学特征分析中核型分析表明染色体数目主要分布在60~69。免疫组织化学结果显示,细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和乳腺癌相关蛋白1(breast cancer associated protein 1,BRAP1)为阳性,波形蛋白、Wnt-1和钙结合蛋白(calretinin,CR)个别阳性,Napsin A、MOC-31、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF1)和D2-40均为阴性。ZLC-001细胞在裸鼠中成瘤能力强。ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼和伊马替尼耐药,但对拉帕替尼中度敏感。结论成功建立来自中国患者的新型低分化肺癌细胞系。这种功能齐全的细胞系为开展肺癌生物学和药物反应研究提供理想的模型与工具。