自体外周血单个核细胞对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖对其干预作用

目的观察、探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖AP11的干预作用。方法以手术切除肝癌组织为标本,胰酶短暂消化加吹打、单细胞悬液培养法原代培养肝癌细胞。通过倒置显微镜观察其形态学特征。于分离培养第2天,加芦荟多糖AP11、芦荟多糖AP11干预及未干预的PBMC于癌细胞中,倒置显微镜观察其对癌细胞形态的影响,MTT法观察其对癌细胞生长的影响。结果采用胰酶短暂消化加吹打分离、单细胞悬液原代培养的方法,可成功获取原代肝癌细胞;与空白对照组相比,芦荟多糖组癌细胞在形态上无明显差别,MTT实验结果表明其对癌细胞的生长无明显影响;与空白对照组相比,芦荟多糖AP11干预与未干预PBMC组癌细胞形态均有较大变化,MTT实验结果表明,其对癌细胞的生长有显著抑制作用。结论芦荟多糖AP11无直接体外抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性可能是通过与PBMC的相互作用,通过调节机体的免疫系统而达到的。

筛选介导化学合成siRNA转染原代肝癌细胞的最佳试剂

背景:理想的细胞转染试剂应具有高效安全的特点。目的:筛选能够高效介导化学合成siRNA转染原代肝癌细胞的最佳转染试剂。方法:应用Lipofectamine RNAiMAX,Lipofectamine2000和DharmaFECT1转染试剂介导FAM-siRNA和多药耐药基因MDR1siRNA转染原代肝癌细胞,分别于转染6和48h后应用流式细胞仪和实时荧光定量PCR检测转染效率,然后用MTT法检测3种转染试剂处理原代肝癌细胞24h后的细胞毒性。结果与结论:对于Lipofectamine RNAiMAX,Lipofectamine2000和DharmaFECT1转染试剂介导的FAM-siRNA和MDR1siRNA转染,流式细胞仪和实时荧光定量PCR仪检测出RNAiMAX转染效率最高(P<0.05),分别为70.3%和71.5%。MTT法检测结果表明RNAiMAX对原代肝癌细胞没有表现出细胞毒性。结果提示,由于RNAiMAX介导的FAM-siRNA和MDR1siRNA转染的效率最高,并且对细胞的毒性最小,所以RNAiMAX是最适合介导化学合成siRNA转染原代肝癌细胞的转染试剂。

葡萄糖对鼠原代肝癌细胞中载脂蛋白A5基因表达的影响

载脂蛋白A5（apoA5）是通过比较基因组学技术鉴定发现的，血浆含量仅为100—250μg/L，其与血浆甘油三酯（TG）代谢密切相关。我们应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）和Westernblot技术检测D．葡萄糖及其类似物对小鼠原代肝癌细胞中apoA5基因表达的影响，探讨apoA5基因表达是否受糖及相关代谢途径的调节。

地塞米松降低顺铂对肝癌原代细胞的毒性效果

分离2例经病理学确诊为原发性肝细胞性肝癌的原代细胞,悬于20%小牛血清的RPMI 1640培养液,置于37℃、5%CO2培养箱培养,并进行显微镜观察和细胞计数。再经不同浓度的顺铂+/-地塞米松处理,采用MTT法检测肝细胞癌原代细胞增殖状况,评价地塞米松对肝癌化疗效果的影响。在2例肝细胞癌的原代细胞培养中,地塞米松均有降低顺铂对肝细胞癌的原代细胞的坏死作用,增加了肝癌细胞的存活率。说明地塞米松对顺铂的细胞毒性有降低作用,可以缓解肝癌伴肝功能减低患者的化疗毒性作用。

TTF1-NP诱导人原代培养肝癌细胞凋亡的内质网应激作用研究

目的探讨TTF1-NP诱导人肝癌原代培养细胞凋亡的作用及机制。方法分离和培养人原代肝癌细胞,采用MTT法测定不同浓度(25,50,100,200,400μmol/L)TTF1-NP对人原代培养肝癌细胞的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Survivin、cleaved caspase3和内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相关蛋白GRP78、p-PERK和p-IRE1的表达情况。结果 TTF1-NP可明显抑制人原代培养肝癌细胞的增殖,且呈剂量依赖性。随TTF1-NP给药浓度的增加,凋亡率逐渐上升,ERS相关蛋白表达增多。结论 TTF1-NP可诱导人原代培养肝癌细胞凋亡,其作用机制与活化ERS反应有关。

载脂蛋白A5启动子片段荧光表达载体的构建及瞬时表达

载脂蛋白家族新成员载脂蛋白A5（apoA5），主要存在于VLDL、HDL及CM中，apoA5基因过表达和基因缺乏小鼠模型研究已为apoA5与TG浓度呈负相关提供直接证据[1]。我们通过基因工程方法构建含有apoA5启动子片段的荧光表达载体，瞬时转染人原代肝癌细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测apoA5基因表达。