ADAM33在维吾尔族COPD患者原代肺成纤维细胞中的表达

目的 探讨维吾尔族慢性阻塞性肺疾病(C O PD)患者原代肺成纤维细胞中解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)是否存在高表达.方法 由新疆医科大学第一附属医院胸外科提供因肺癌进行手术切除的癌旁肺组织标本,采用贴壁法分离维吾尔族C O PD患者及维吾尔族正常肺成纤维细胞,进行体外培养,采用共聚焦显微镜进行鉴定.采用逆转录-聚合酶链反应、Western blot方法测定维吾尔族COPD患者及维吾尔族正常肺成纤维细胞中ADAM33的表达水平.结果 波形蛋白免疫荧光染色共聚焦显像结果提示:从肺组织块原代分离培养的细胞中99% 以上表达波形蛋白.维吾尔族COPD患者肺原代成纤维细胞中ADAM33 mRNA和蛋白相对表达量高于维吾尔族正常肺成纤维细胞(F值分别为9.994、15.106,P值均<0.05).结论 维吾尔族COPD患者原代肺成纤维细胞中ADAM33的表达水平高于维吾尔族正常肺成纤维细胞.

纳米二氧化硅诱导巨噬细胞焦亡对肺成纤维细胞的影响

目的探讨纳米二氧化硅(SiNPs)诱导巨噬细胞焦亡对原代肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响。方法构建SiNPs致巨噬细胞焦亡模型后,采用纳米高光谱定位巨噬细胞中SiNPs、光学显微镜观察巨噬细胞SiNPs暴露后形态、Western blot检测焦亡相关蛋白表达。通过胰酶和Ⅳ型胶原酶消化法提取小鼠原代肺成纤维细胞;以光学显微镜和免疫荧光技术表征并鉴定原代肺成纤维细胞;体外构建SiNPs诱导巨噬细胞焦亡与原代肺成纤维细胞共培养模型。以正常巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为MF组,焦亡巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为PF组,采用qRT-PCR、Western blot技术分别检测原代肺成纤维细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平和蛋白表达,免疫荧光、免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞标志物α-SMA蛋白表达。结果纳米高光谱、形态学观察和Western blot检测结果显示,SiNPs成功诱导J774A.1巨噬细胞发生焦亡,光学显微镜观察发现,与胰酶消化法相比,Ⅳ型胶原酶法提取小鼠原代肺成纤维细胞的纯度更高;免疫荧光结果提示Ⅳ型胶原酶法获得的成纤维细胞波形蛋白呈现典型的微丝结构,细胞骨架结构完整。qRT-PCR结果显示,PF组MMP2和MMP9 mRNA水平较MF组增加(P<0.05),Western blot结果显示,PF组MMP2和MMP9蛋白表达水平较MF组升高(P<0.05),免疫荧光结果显示,与MF组相比,PF组α-SMA红色荧光强度增加,免疫细胞化学染色为强阳性。结论SiNPs诱导巨噬细胞焦亡能够促进原代肺成纤维细胞MMP2和MMP9表达水平上调,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化。