TLR9通路激活对原代肾小管上皮细胞转录组的影响

目的探讨Toll样受体9(TLR9)信号通路激活对肾小管细胞转录组的影响。方法提取并培养小鼠原代肾小管上皮细胞,在细胞融合度达80%时分为两组,分别加入10μL磷酸盐缓冲液(PBS,PBS对照组)和终浓度为5μmol/L的TLR9激活剂胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸(CpG-ODN,CpG-ODN处理组)。提取细胞RNA后在Illumina平台进行测序,使用差异基因分析软件DEGseq分析两组细胞中基因的差异表达情况,通过Goatools和KOBAS在线软件分析差异基因所参与的信号通路,应用Homer软件预测转录因子。结果与PBS对照组相比,CpG-ODN处理后有584个显著的差异表达基因,其中102个基因表达上调,482个表达下调。差异表达基因富集最显著的基因本体(GO)为β-干扰素响应、病毒响应或防御等炎症反应相关条目;京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)信号通路富集结果显示,富集系数最显著的信号通路包括2’-5’-寡腺苷酸合成酶活性、核糖核酸酶活性的调节、病毒生命周期的负调控、β-干扰素响应和对原生动物的防御反应等。转录因子预测结果显示,干扰素调节因子3(IRF3)是差异基因启动子序列上富集最显著的转录因子;IRF3是TLR9下游表达差异最显著的转录因子,转录因子21(TCF21)、锌指蛋白135(ZNF135)和阳性调节域4(PRDM4)等转录因子可能是TLR9信号通路的新候选靶标。结论CpG-ODN激活TLR9信号通路,原代肾小管上皮细胞能直接响应CpG-ODN的刺激并发生转录组学变化,为进一步探究TLR9信号通路在脓毒症相关性急性肾损伤中的分子机制研究提供了基础。

纤维网状细胞通过促进线粒体凋亡对脓毒症急性肾损伤改善作用的研究

目的探讨纤维网状细胞(FRC)通过促进线粒体凋亡对脓毒症急性肾损伤(AKI)的改善作用。方法取10~12周龄的C57BL/6雄性小鼠分别进行小鼠原代肾小管上皮细胞(TECs)及小鼠肠系膜脂肪组织来源的FRC的分离培养,采用流式细胞术鉴定FRC和原代TECs、免疫荧光检测TECs AQP1的表达、油红染色鉴定FRC的干细胞特性。将TECs分为NC组、LPS组与LPS-FRC组,采用流式细胞术检测3组TECs JC-1单体百分比、qRT-PCR检测炎症因子[白细胞介素(IL)-1和IL-6]mRNA表达水平、Western Blot检测自噬相关蛋白(Pink1、PARKIN)及氧化应激蛋白(HO-1)表达水平、CCK-8试剂盒检测TECs活力并进行比较。结果成功分离并鉴定FRC及小鼠原代TECs。LPS组IL-6、IL-1的mRNA表达水平和JC-1单体百分比均高于NC组及LPS-FRC组,LPS-FRC组IL-6、IL-1的mRNA表达水平均高于NC组(P<0.05)。LPS组OD值低于NC组,LPS-FRC组OD值高于LPS组(P<0.05)。和NC组比较,LPS组Pink 1、PARKIN、HO-1蛋白表达水平均增高;和LPS组相比,FRC-LPS组细胞Pink 1和PARKIN蛋白表达水平增加,HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论FRC可促进TECs的线粒体自噬,改善脓毒症AKI。