原代骨髓基质细胞层对逆转录病毒载体介导的造血干/祖细胞基因转导的支持效应

为探讨建立原代骨髓基质细胞层的方法并观察基质接触对造血干 /祖细胞 (HSC/HPC)基因转移的影响 ,采用Ficoll Hypaque分离成人骨髓单个核细胞 (MNC) ,用基质细胞培养液培养 ,传代 4次以建立原代骨髓基质细胞层。将经细胞因子预刺激的造血干 /祖细胞接种到经辐照处理的基质细胞层上 ,进行逆转录病毒介导的多药耐药基因 (mdr1 )转导 ,以半固体集落培养和聚合酶链反应法 (PCR)检测长春新碱 (VCR)抗性集落数和mdr1基因扩增片段以测定转导效率。结果表明 :原代骨髓基质细胞培养传代 4 - 6周形成混合贴壁细胞层 ,主要由成纤维细胞组成。集落法和PCR法检测显示基质接触能提高骨髓造血干 /祖细胞基因转导效率 2 .1 - 3 .3倍 ,对逆转录病毒介导的造血干 /祖细胞基因转导具有明显的支持效应。结论 :基质细胞接触联合细胞因子作用可提高逆转录病毒介导的造血干