骨髓增生异常综合征造血细胞bcl-2 VEGF抗原表达及原位凋亡的研究

目的:研究骨髓增生异常综合征(MDS)bcl-2、VEGF抗原表达及造血细胞原位凋亡之间的关系,探讨MDS发病机理。方法:对MDS患者骨髓活检标本光镜下观察骨髓增生程度、各系造血细胞形态异常情况、不成熟前体细胞异常定位(ALJP)等组织病理学改变,免疫组织化学染色观测bcl-2及VEGF抗原的表达,TUNEL法检测造血细胞原位凋亡结果:13例患者骨髓均有不同程度的异常造血,异常造血主要累及的细胞系列不尽相同,RA、RAEB两组患者异常造血未见明显区别;有6例患者检出ALIP现象,其中RA 3例(3/8,37.50%),RAEB 3例(3/5,60.00%);VEGF阳性者占9例(9/13,69.23%),其中RA 6例(6/8,75.00%),RAEB 3例(3/5,60.00%);bcl-2阳性者占7例,其中RA4例(4/8,50.00%),RAEB 3例(3/5,60.00%);TUNEL检测13例患者均为阳性,检出ALIP现象者,其造血细胞发生原位调亡明显,而bcl-2、VEGF与TUNEL结果之间未见明显关联。结论:MDS患者均存在不同程度的细胞凋亡异常,而TUNEL法提供了简便、实用、敏感、快速特异的检测MDS细胞原位凋亡的方法结果初步显示MDS患者ALlP现象明显者其细胞凋亡也明显,提示调控MDS患者细胞凋亡和恶性克隆增殖可能是两种完全不同的机制。

细胞毒化疗对急性白血病原位凋亡诱导作用的体内研究

目的：观察细胞毒化疗对急性白血病细胞原位凋亡的影响。方法：应用 DNA原位末端标记（ ISEL）方法，检测初发及经治的 31例急性白血病骨髓塑包切片内细胞原位凋亡数量及特征，以 10例缺铁性贫血为对照，并进行自身组间对照。结果：初治 AL凋亡减少，与对照组相比有显著差异（

原位细胞凋亡检测技术体会

目的 探讨TUNEL法检测细胞凋亡的最佳条件。方法 各取 2 0例大肠癌组织和鼠脑组织 ,分成A、B两组 ,A组按照宝灵曼公司推荐的条件操作 ,B组按照本实验室改进后的条件操作。结果 A组与B组细胞凋亡阳性率无区别 (P >0 .0 5 ) ,A组背景着色明显高于B组 (P <0 .0 1)。

寻常型天疱疮与大疱性类天疱疮皮损原位细胞凋亡研究

目的 :探讨角质形成细胞凋亡在寻常型天疱疮 (PV)和大疱性类天疱疮 (BP)皮损发生发展中的作用。方法 :采用原位细胞凋亡检测 (TUNEL)方法研究两病患者皮损角质形成细胞的凋亡情况。结果 :(1)性别、年龄、病程、疗后评分、住院天数、激素总量等对天疱疮的凋亡指数影响无统计学意义 (P均 >0 0 5 ) ;但天疱疮的疗前评分高者 ,凋亡指数较高 (P <0 0 1) ;(2 )性别、年龄、病程、疗前评分、疗后评分、住院天数、激素总量等全部分析因素对类天疱的凋亡指数影响均无统计学意义 (P均 >0 0 5 ) ;(3 )正常对照 8例表皮细胞凋亡指数均 <0 0 0 5 ,天疱疮与类天疱疮凋亡指数均明显高于对照组 (P均 <0 0 1) ;(4 )角质形成细胞凋亡发生部位 :PV ,疱内分离的及疱周围的棘层、基底层细胞 ;BP ,水疱上方及附近的棘层、基底层细胞。结论

113例前列腺癌AR与凋亡相关因子表达的研究

目的探讨113例人前列腺癌AR与凋亡相关因子表达的相关性。方法应用免疫组化标记AR及细胞凋亡相关因子bcl-2、Bax及Tunel标记等,结合光镜、电镜观察及图像分析等方法,研究不同AR表达与PCa凋亡的相互关系。结果AR(-)组较AR(+)组bcl-2阳性表达明显增强,Bax表达增强,bcl-2/Bax比值增高,前列腺癌AR(-)组细胞凋亡作用较AR(+)组明显增强。结论AR表达缺失促进了bcl-2和Bax的表达,Bax表达上调促进细胞凋亡的发生,而bcl-2有癌基因的作用,其表达上调则促进了的细胞增殖,导致前列腺癌凋亡及增殖作用均增强。

缺血性脑损伤中原代培养神经元凋亡的观察

目的 探讨原代培养的神经元在模拟缺血性脑损伤过程中细胞凋亡的发展规律和机制 ,并对不同的凋亡检测方法进行比较和评价。方法 对Wistar大鼠大脑皮质神经元进行原代培养 ,运用流式细胞仪 (FCM)、TUNEL等手段检测缺血性损伤各时间点的神经元凋亡以及Caspase 3在神经元中的表达。结果 流式细胞仪与TUNEL检测均显示 :在血清剥夺和缺氧后 0 5h、 6h神经元的凋亡率显著增高 ,Caspase 3表达阳性率亦随之增高。结论 血清和氧剥夺早期由于神经元内的保护性基因反应性上调 ,抑制Caspase 3的激活及凋亡的进展 ,随着损伤时间的延长 ,抑制凋亡基因向促凋亡基因转换 ,导致神经元进一步凋亡。

龟鹿二仙胶加味对慢性再障患者CD34^+凋亡的影响

目的观察龟鹿二仙胶治疗慢性再障(CAA)的临床疗效和作用机理。方法80例病例随机分为对照组40例,口服康力龙每次2mg,每日3次;治疗组40例,口服龟鹿二仙胶加味中药,每日1剂水煎分2次服。6个月后观察两组患者的临床疗效、骨髓CD34+细胞百分比及其原位凋亡情况。结果治疗组总有效率为87.5%;对照组为67.5%;治疗后两组骨髓CD34+细胞百分比均较前有所上升,凋亡率均较前降低;两组差异均有显著性意义(P<0.05)。结论龟鹿二仙胶加味对CAA患者骨髓造血干细胞有促进增长与抑制凋亡的调节作用。

Vit E和硒对急性肝损伤期肝星形细胞增殖和凋亡的影响

目的了解VitE和硒联合干预对急性肝损伤期肝星形细胞增殖和凋亡的影响。方法采用腹腔内注射50%CCl4制备大鼠急性肝损伤模型,在饲料中添加适量VitE(250mg/kg饲料)和硒(0.2mg/kg饲料)进行营养干预,分别在第1次和第3次注射CCl4后的6、24、48、72h处死大鼠,取其肝组织,用αSMA免疫组化方法检测激活的HSC细胞,用原位凋亡(TUNEL)技术和αSMA免疫组化双标染色检测HSC凋亡。结果注射CCl4后HSC激活,并在第1次注射后72h活化HSC数量达到高峰;在所观察的各时间点,随时间延长HSC凋亡数逐步增加;在同一时间点,抗氧化剂干预组HSC数量少于病理造模组。结论饲料中添加适量VitE和硒可抑制CCL4所致的急性期肝损伤时HSC的激活和(或)增殖,并促进激活的HSC凋亡。

吸烟对牙龈上皮细胞凋亡的影响

目的:观察不同程度吸烟患者的牙龈上皮棘层和基底层细胞凋亡的情况,评价吸烟对牙龈上皮细胞正常代谢和蛋白质分泌的影响。方法:选取47例具有不同吸烟史、无严重系统疾病且行牙冠延长术或智牙拔除术的患者为研究对象,男41例,女6例,年龄18～29岁(平均年龄21.4岁),根据吸烟史、日平均吸烟支数和总吸烟支数,将患者分为Ⅰ(轻)度(吸烟史<5a,或2≤日均支数<10且总支数约1.5万支以下)19例,Ⅱ(重)度(5a≤吸烟史,或10≤日均支数且总支数约1.5万支以上)28例。另取无吸烟史的10例患者作为对照组。采用原位末端标记(TdT-mediated-dUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测牙龈上皮棘层和基底层细胞的凋亡情况。采用Newman-Keuls法比较各吸烟组之间及其与对照组间的差异,取α=0.05水准。结果:吸烟者的牙龈上皮棘层和基底层细胞凋亡阳性的表达高于未吸烟者,且棘层(P<0.01)改变较基底层(P<0.05)明显。轻度吸烟组和重度吸烟组之间也存在显著性差异(P<0.05、P<0.01)。结论:吸烟对牙龈上皮棘层的凋亡具有明显的促进作用,从而干预上皮细胞的正常蛋白分泌和代谢。

子宫内膜异位症与细胞凋亡关系的研究

目的 从细胞凋亡水平和 p5 3基因表达的差异探讨子宫内膜异位症 (EM )的发病机理。方法 38例EM标本行HE染色、原位细胞凋亡标记实验 (TUNEL) ,p5 3mRNA的原位分子杂交实验。以正常子宫内膜作正常对照 ,经Dnase处理的子宫内膜为阳性对照 ,设空白阴性对照。结果 TUNEL实验结果 ,正常分泌期子宫内膜中细胞凋亡率为 2 4 2 9% ,EM的细胞凋亡率为 3 6 4%。p5 3在EM的表达为 7 43% ,而正常对照组为 2 8 5 1% ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 结论 EM的细胞凋亡水平和 p5 3的表达水平明显低于正常对照组。EM的发病可能与子宫内膜的细胞凋亡水平降低有关。

胎盘细胞凋亡与妊娠肝内胆汁瘀积症关系的研究

目的 :从胎盘细胞凋亡的表达差异探讨妊娠肝内胆汁瘀积症 (intrahepaticcholestasisofpregnancy ,ICP)围产儿死亡原因。方法 :2 9例妊娠肝内胆汁瘀积症胎盘和 5例正常胎盘 ,分别进行光镜检查、原位细胞凋亡标记实验和 p5 3基因mRNA原位细胞杂交实验。结果 :正常胎盘的细胞凋亡率为 9 11% ,ICP的细胞凋亡率为 2 8 47% ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;p5 3基因在ICP胎盘组织中未见阳性表达。结论 :妊娠肝内胆汁瘀积症胎盘组织的细胞凋亡水平明显高于正常胎盘组织 ,ICP围产儿死亡率高的原因可能与其胎盘组织的细胞凋亡水平增加有关 ;ICP胎盘组织的细胞凋亡可能是非 p5 3基因依赖的。

仙鹿活骨丸对激素性股骨头坏死细胞凋亡影响的实验研究

目的从微观结构变化考察仙鹿活骨丸对激素性股骨头坏死细胞凋亡影响,为临床应用提供参考。方法给大鼠臀肌注射醋酸强的松龙造成激素型股骨头坏死模型,通过原位细胞凋亡检测、光镜和电镜考察仙鹿活骨丸对激素性股骨头坏死细胞凋亡影响。结果原位细胞凋亡检测分析,发现模型大鼠给仙鹿活骨丸后细胞凋亡数量明显减少;光镜观察可以发现,仙鹿活骨丸可以减少空缺骨陷窝数,降低股骨头组织坏死程度。电镜观察可以发现,仙鹿活骨丸治疗后的骨细胞细胞核染色质和染色体相对均匀,线粒体、高尔基体、内质网等细胞器增多,而糖原溶解与脂肪空泡均较模型对照组减少,因而可提高成骨细胞骨形成的功能,有助于股骨头缺血性坏死修复过程。结论仙鹿活骨丸可以减少激素性股骨头坏死细胞凋亡,改善坏死部位的组织形态学,治疗股骨头坏死。

甲状腺癌中细胞凋亡指数的检测及其意义

目的检测细胞凋亡指数(Apoptosis Index,AI)在甲状腺癌中的表达,探讨细胞凋亡在甲状腺癌发生中的作用。方法应用原位细胞凋亡检测(TUNEL)试剂盒对36例甲状腺癌及6例结节性甲状腺肿组织进行AI的检测。结果结节性甲状腺肿的细胞AI平均值为12.39±2.21,甲状腺癌组织的细胞AI平均值为20.17±2.68,二者差异具有显著性(P<0.05)。AI与病人的年龄、病理分型、临床分期和淋巴结转移无关,P>0.05。结论甲状腺癌组织的AI平均值高于正常对照组,肿瘤细胞凋亡的失衡在甲状腺癌发生中起作用。

高温诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡及检测

目的 探讨热诱导 Bca CD885颊癌细胞凋亡的动力学改变及热杀伤肿瘤细胞的机理。方法 水浴加温诱导Bca CD885细胞产生凋亡。通过细胞形态观察、原位末端标记、DNA电泳及流式细胞术 DNA测定 ,从形态学、生物化学、分子生物学以及细胞学水平确定凋亡细胞特征。结果 Bca CD885细胞经 43°C40 min加热 ,呈现细胞凋亡形态改变 ,TUNEL标记见明显的凋亡小体 ,DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。同时细胞周期发生了明显的特异性改变 :G0 / G1 期百分比增加 ,S期百分比下降 ,G2 / M期百分比在加热后 3 h时也发生了明显的下降。 45°C 40 min加热则出现明显的坏死改变。结论 高温杀伤 Bca CD885细胞存在细胞坏死和细胞凋亡两种方式 ,治癌温度是通过诱导细胞凋亡发挥作用。高温诱导 Bca

射线诱导的细胞凋亡过程中端粒酶表达及其活性

利用原位端粒酶-凋亡双染色法检测A549细胞和L02细胞hTERT和凋亡双表达,端粒序列扩增检测(TRAP)方法检测群体细胞端粒酶活性,研究γ射线照射人肿瘤细胞和正常细胞后端粒酶的表达变化与凋亡发生的关系。结果表明,1-5Gy照射后24-72h,A549细胞和L02细胞内hTERT表达增强,端粒酶和凋亡双染色阳性细胞随照射剂量的提高而增多;在凋亡发生的过程中,群体细胞端粒酶活性呈剂量依赖性增强,提示放射线诱导人肿瘤和正常细胞凋亡可能不是通过直接抑制端粒酶活性的机制;而辐射诱导端粒酶活性增高可能是细胞修复辐射损伤的机制之一。

加味圣愈汤对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的:研究加味圣愈汤对脑外伤大鼠海马结构神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤后继发性脑损伤的作用机制。方法:采用改良的Feeney法建立脑外伤模型,将动物随机分为假手术组、脑外伤组、加味圣愈汤治疗组。72h处死后行尼氏染色,光镜下观察损伤侧海马细胞形态并计数,分别用凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学法观察海马神经细胞凋亡及凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达情况。结果:加味圣愈汤治疗组与脑外伤组比较,损伤侧海马神经细胞损害减轻,细胞数明显增加,神经细胞凋亡减少,caspase-3表达减少(P<0.01)。结论:加味圣愈汤治疗可减轻脑外伤后的继发性损伤,其机制可能与抑制caspase-3的表达,减少TBI后神经细胞的凋亡有关。

LPS导致小鼠多脏器损伤的形态学研究

ＬＰＳ导致小鼠多脏器损伤的形态学研究戴书静牛建昭魏育林＊（北京中医药大学组胚教研室）（＊中日友好医院临床研究所）ＬＰＳ（脂多糖）为内毒素的主要成分，可导致多脏器损伤，在内毒素休克中起重要作用。近年来，ＬＰＳ在凋亡诱导中的作用也多有报导。本实验观察了小...

二氢睾酮对前列腺癌LNcap和PC-3细胞株EGFR mRNA表达的影响

目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carc inom a,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据。方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性。结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低。低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降。结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性。AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控。