电镜原位分子杂交技术及其应用

将原位分子杂交技术应用于电镜水平 ,观察标记的特定DNA、mRNA和RHA在细胞和 或组织内的超微结构定位的方法 ,称为电镜原位分子杂交技术。本文综述了电镜原位分子杂交技术的建立及其分类 ,并详细介绍了非放射性电镜原位分子杂交技术的基本操作程序及注意事项 ,最后对电镜原位分子杂交技术的应用做了简要介绍。

原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染

目的:观察宫颈鳞状上皮病变过程中HPV6/11、HPV16/18的表达,探讨其测定的临床意义。方法:选择病理诊断为宫颈慢性炎症50例、鳞状上皮乳头状瘤样增生30例、尖锐湿疣30例、上皮内瘤变89例、鳞癌50例共249例石蜡包埋标本,应用原位核酸分子杂交技术对其进行HPV6/11,HPV16/18检测。结果:慢性炎症组HPV6/11阳性表达4%,HPV16/18阳性表达0%;乳头状瘤样增生组HPV6/11阳性表达10%,HPV16/18阳性表达3.3%;尖锐湿疣组HPV6/11阳性表达93.3%,HPV16/18阳性表达23.3%;CIN组中Ⅰ级HPV6/11阳性表达48.9%,HPV16/18阳性表达42.2%;Ⅱ级HPV6/11阳性表达39.1%,HPV16/18阳性表达69.6%;Ⅲ级HPV6/11阳性表达9.5%,HPV16/18阳性表达66.7%;鳞癌组HPV6/11阳性表达6%,HPV16/18阳性表达82%。结论:应用原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变细胞的HPV6/11、HPV16/18,为临床早期诊断、鉴别诊断及评估预后提供可靠的理论依据。

原位分子杂交中脱片问题浅析

核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段.原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达.但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败.原位分子杂交实验中,所有的操作均是针对载玻片上的目的组织进行的,因此,实验中的脱片就是常常困扰实验者的一个问题[1～3].在此,笔者根据自己的实际操作经验和资料研究,对脱片问题进行简单分析,以求对实验有所帮助.

流行性出血热病毒RNA原位分子杂交检测法的建立及应用

流行性出血热是一种严重危害人体健康的传染病,我国是其高流行区。以前对流行性出血热病毒(EHFV)的研究仅限于用免疫学方法检测定位病毒特异性抗原或抗体,应用原位分子杂交技术进行 EHFV RNA

生物素标记探针原位杂交法检测细胞中c－myc基因的表达

本文采用生物素标记的ｃ－ｍｙｃ基因作探针，通过细胞原位分子杂交技术，对人舌癌、膀胱癌和正常细胞中ｃ－ｍｙｃ基因的转录量进行了定性和半定量分析。结果表明与正常细胞相比，舌癌和膀胱癌细胞中ｃ－ｍｙｃ基因异常高度表达。

细胞原位杂交法检测肿瘤细胞中C-myc基因的表达

本文采用生物素标记的C-myc基因作探针,通过细胞原位分子杂交技术,对人舌癌、膀胱癌和正常细胞中C-myc基因的转录量进行了定性和半定量分析。结果表明与正常细胞相比,舌癌和膀胱癌细胞中C-myc基因异常高度表达。

鼻咽癌中EBV感染与某些基因产物表达的关系

目的 观察EB病毒RNA(Epstin Barrvirus ,EBV)、膜蛋白 (LMP 1)、c erbB 2、CyclinD1,bcl 2和p5 3蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,探讨其相互间关系及其在鼻咽癌发生发展中的作用。方法 采用原位分子杂交技术检测了 36例鼻咽癌组织中EBV编码的encodedsmallRNAs(EBERs)、用免疫组化技术检测LMP 1、CyclinD1、c erbB 2、bcl 2和 p5 3蛋白的表达。 结果 36例鼻咽癌组织中全部检出EBVRNAs ,阳性率为 10 0 % (36 /36 ) ,LMP14 4 .4 % (16 /36 ) ,CyclinD15 2 .8% (19/36 ) ,c erB 25 8.3% (2 1/36 ) ,bcl 2 4 4 .4 % (16 /36 ) ,p5 333.3% (12 /36 )。鼻咽癌组织中EB病毒感染与c erB 2、CyclinD1癌基因的表达、p5 3抑癌基因的失活之间有明显的关系。结论 鼻咽癌与EB病毒作为致瘤病毒激活癌基因蛋白的表达密切相关。鼻咽活检组织中有EBERs及LMP 1的检出 ,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。

乙型肝炎病毒DNA与IgA肾病发病的关系

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染与IgA肾病发病的关系。方法 :5 0例血清HBV标志或肾组织HBV抗原阳性的IgA肾病患者作为研究对象 ,应用原位分子杂交技术和Southerblot技术检测肾组织中HBVDNA。结果 :5 0例IgA肾病患者中 ,血清HBsAg阳性 17例 (34% ) ;肾组织HBAg阳性 4 8例 (96 % ) ,HBAg在肾小球中阳性率为 82 % (4 1/ 5 0 ) ,其中HBsAg为 5 8% (2 9/ 5 0 ) ,HBcAg为 4 2 % (2 1/ 5 0 ) ;除了肾小球 ,4 7例 (94 % )患者BsAg和HBcAg肾小管上皮细胞亦有阳性沉积 ,分别为 2 8例 (5 6 % )和 39例 (78% ) ;原位分子杂交证实 5 0例患者肾组织HBVDNA阳性率为 92 % (4 6 / 5 0 ) ,其中肾小管上皮细胞、肾小球细胞HBVDNA阳性率分别为 72 % (36 / 5 0 )和 82 % (4 1/ 5 0 )。Southernblot技术证实在 5 0例患者肾组织中 34例有整合型HBVDNA ,阳性率为 6 8%。结论 :HBV感染与IgA肾病的发病密切相关 。

视黄酸受体基因在人胚肾上腺及神经母细胞瘤中的表达

目的 探讨视黄酸受体基因在人胚肾上腺和神经母细胞瘤中表达的意义。方法 应用原位分子杂交的方法 ,检测人胚肾上腺发育过程中视黄酸受体基因表达的水平 ,以及不同分化程度的神经母细胞瘤视黄酸受体基因的表达 ,并对表达程度进行半定量分析。结果 在胎儿肾上腺神经母细胞中 ,RARαmRNA、RARγmR NA明显表达并逐渐增强 ,1 9周龄后则急剧下降。RARβmRNA、RXRαmRNA表达稍弱 ,在 1 9周龄前基本保持同一水平。RXRβmRNA在 1 9周龄前一直是微弱表达。RXRγmRNA表达呈明显下降趋势。在胎儿肾上腺嗜铬细胞以及胎儿区和最终区的细胞中 ,6个mRNA均为微弱表达或基本不表达。在神经母细胞瘤细胞中 ,RAR类mRNA以及RXRαmRNA、RXRβmRNA在分化不良组中均明显表达 ,在分化良好组中表达减弱。两组相比均有显著性差异 (P <0 .0 1 )。RXRγmRNA在神经母细胞瘤中不表达。结论 (1 )RARα、RARγ可能参与了神经母细胞分化的介导 ;(2 )视黄酸受体基因表达水平与神经母细胞瘤的分化程度呈负相关 ;(3)孕 2 0周之前的肾上腺发育延滞可能与神经母细胞瘤的发生有关。

原发性肺癌患者结核分枝杆菌的耐药性检测

目的研究原发性肺癌患者结核分枝杆菌(MTB)的感染类型及对药物耐受性分析。方法选取湖北医药学院附属东风医院2014年6月-2015年8月收治的原发性肺癌患者89例,提取患者肺组织标本,采用原位分子杂交技术对组织标本的MTB及其L-型MTB(MTB-L)进行检测,分析原发性肺癌患者感染类型,同时进行药敏试验,统计对各药物的耐药率。结果所有肺癌组织标本的MTB-L阳性检出率为38.2%,不同组织学分型肺癌的MTB-L阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。MTB-L对一线抗结核药物的耐药率为57.1%,对二线抗结核药物的耐药率为31.7%。多重耐药MTB的耐药率(36.5%)明显高于广泛耐药MTB(12.7%)(χ2=9.63,P=0.001)。结论原发性肺癌患者以MTB-L感染为主,MTB-L对异烟肼及二线抗结核药物存在较高耐药率,且多药联合使用可能会降低疗效,增加MTB-L的耐药率。本研究结果为临床合理选用抗菌药物,有效治疗提供科学指导。

TLR_4和HBD-2在鼻黏膜组织中的表达及意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)mRNA及人β防御素2(human beta-defensin-2,HBD-2)在鼻黏膜组织中的表达及意义。方法:采用核酸分子原位杂交技术和免疫组织化学技术分别检测慢性鼻、鼻窦炎患者鼻黏膜组织中TLR4 mRNA和HBD-2的表达。结果:TLR4 mRNA在病变组鼻黏膜组织中的表达明显强于对照组(P<0.05)。但在病变组中13例Ⅰ型和17例Ⅱ型慢性鼻、鼻窦炎患者的病变鼻黏膜组织中的表达差异无显著性;HBD-2在对照组未见表达,而在病变组均出现不同程度的表达,两组间的表达差异具有显著性(P<0.01),而且在Ⅱ型病变鼻黏膜组织中的表达明显强于Ⅰ型(P<0.05)。结论:TLR4可能参与了鼻黏膜天然免疫,HBD-2可能是炎症反应的重要产物之一。致炎因子通过TLR4对病原微生物进行识别,激活鼻黏膜上皮细胞,最终导致炎性细胞产生大量的HBD-2,这可能在鼻黏膜启动有效的炎性免疫反应过程中具有一定的作用。

运动医学

G804.5 9702611力竭性游泳对大鼠胰岛 A、B 细胞形态学变化的影响—免疫组化及原位分子杂交结果分析=Effect s of exhaustive swimming onmorphology of islet A and B cells in Mice[刊,中,A]/郑陆//中国运动医学杂志.-997.-16(2).-95-100图9参7(XH)免疫//胰岛素//细胞//力竭性运动采用免疫组化及原位分子杂交技术,本文研究了负重力竭性游泳对大鼠胰岛 A、B 细胞分泌功能的影响.主要结果发现:力竭状态下,大鼠胰岛 Ins-IR 细胞呈色反应强度增加,而 GIu-IR 细胞呈色反应强度降低,说明 B

hTERT mRNA在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)在结直肠癌(CRC)组织中的表达,分析hTERT与结直肠癌患者临床病理参数及预后的相关性。方法:运用原位分子杂交技术(ISH)检测210例患者结直肠癌组织及其正常组织中hTERT mRNA表达水平,分析在结直肠癌组织中hTERT表达与肿瘤病理特征及预后的关系。结果:在结直肠癌组织中,hTERT mRNA阳性表达率明显高于相对应的正常结直肠组织,两者差异有统计学意义(P<0.05);在≥60岁的结直肠癌患者中hTERT阳性表达率比<60岁的结直肠癌明显增高(P=0.028);在低分化腺癌和粘液癌中hTERT阳性表达率明显高于高中分化腺癌(P=0.029);hTERT的阳性表达与浸润深度、脉管受侵及肿瘤分期均成正相关(P=0.032,P=0.017,P=0.010)。结直肠癌患者中hTERT mRNA阴性组的生存期比阳性组长,差异具有统计学意义(P=0.009)。结论:hTERT在结直肠癌的发生、发展过程中起着重要作用,而且hTERT表达可能与结直肠癌的年龄、浸润、转移、分期等病理特征相关,它可能成为评价结直肠癌预后的一个重要指标。

环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义

目的:研究膀胱移行细胞癌(BTCC)中环氧化酶-2(COX-2)的表达及其与肿瘤分级、分期和复发的关系。方法:采用原位核酸分子杂交技术,对48例BTCC和10例正常膀胱黏膜中COX-2表达进行检测,结合临床资料分析COX-2在BTCC发生发展中的作用。结果:BTCC中COX-2mRNA表达高于正常组(P<0.001),并随肿瘤分级、分期增高而增高,低分化、浸润性的复发组COX-2mRNA表达高于高分化、浅表性的未复发组(P<0.05)。结论:COX-2mRNA的表达水平随BTCC分级分期增高上调,并与肿瘤复发有关,可作为判断BTCC生物学行为的有用指标,有助于我们更准确地判断膀胱癌的进展和预后。

腹主动脉瘤发病机理的实验研究 Ⅱ.基质金属蛋白酶-9在大鼠腹主动脉瘤模型中的动态表达

目的 :检测MMP 9在大鼠正常动脉及动脉瘤模型组织中的动态表达 ,以探讨其在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法 :Wistar大鼠 5 4只 ,随机均分为 1组正常对照组、4组灌注对照组和 4组实验组。实验组腹主动脉灌注弹力蛋白酶 (2 5U ml) 2ml,灌注对照组灌注生理盐水 2ml,分别于术前、术后即刻、2d、7d、14d测量腹主动脉直径 ,并采用免疫组织化学和分子原位杂交技术动态检测腹主动脉组织中MMP 9的表达。结果 :正常及灌注对照组腹主动脉组织中均未发现MMP 9,而实验组弹力蛋白酶灌注后2～ 14dMMP 9均有不同程度升高 ,第 7d达到高峰 ,第 14d有所回落。结论 :MMP 9分泌的增加可能与炎症反应有关 ,且为腹主动脉瘤形成中不可或缺的一步。

端粒酶mTERT基因在不同年龄SD鼠睾丸组织内的表达及其意义

目的 研究端粒酶mTERT基因在不同年龄SD鼠睾丸组织内的表达及其意义。方法 应用原位分子杂交技术 ,对 11个年龄组 (每组 5只 )健康雄性SD鼠睾丸组织中端粒酶mTERT基因进行检测和定位 ,并运用图像分析系统对mTERT表达水平进行研究。结果 端粒酶mTERT基因在SD鼠睾丸组织内的阳性表达率为 98% (5 4/ 5 5 ) ,其阳性信号表达于A、B型精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞的胞浆内 ,A型精原细胞的表达水平最高 ,与其他类型细胞相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;在间质细胞、支持细胞等非生殖细胞和精子中均无端粒酶mTERT基因的表达。结论 本研究提示端粒酶mTERT基因的表达与雄性生殖细胞的端粒酶活性表达一致 ,其能否成为雄性生殖调控的新的基因靶点尚待进一步研究。

四环素抑制实验性大鼠腹主动脉瘤形成的初步研究

目的 研究四环素对实验性大鼠腹主动脉瘤形成的作用。方法 建立大鼠腹主动脉瘤弹力蛋白酶灌注模型 ,随机分为实验组 (10只 )皮下注射四环素 (2 5mg/d) ,对照组 (10只 )皮下注射生理盐水。观察两组动脉瘤形成率和动脉壁组织学改变 ,并应用免疫组织化学和分子原位杂交技术检测基质金属蛋白酶 2和 9的表达。结果 灌注 2周后实验组大鼠腹主动脉瘤形成率 10 % ,对照组大鼠动脉瘤形成率为 10 0 % ,两组差异有显著意义 (P <0 0 5 )。实验组大鼠动脉壁组织MMP 2、MMP 9蛋白表达为弱阳性或阴性 ,对照组动脉瘤组织中两者表达明显增高。原位杂交检测结果表明两组mRNA表达强度无明显差异。结论 四环素能够降低基质金属蛋白酶 2和 9的表达 ,从而减低动脉壁组织弹力纤维的降解 。