基于CRISPR/Cas9技术构建原位敲入亨廷顿病(HD)小鼠模型

目的:探究CRISPR/Cas9技术在建立亨廷顿病(Huntington’s Disease,HD)原位敲入小鼠模型中的运用。方法:首先,设计gRNA靶点序列(Htt gRNA)并检测其体外Cas9酶切活性,选择活性较好的一对备用。其次,利用全基因合成具有150Q(150个CAG重复)的Donor序列。然后将Cas9 mRNA,Htt-L3 gRNA,Htt-R3 gRNA和Donor DNA混合均匀进行胚胎显微注射,再将胚胎移植到受体小鼠中备孕。待小鼠出生后,鉴定F0代及其子代F1,F2,F3代的基因型。结果:F0,F1,F2及F3代小鼠基因组上均出现150Q的准确敲入,且子代稳定遗传。结论:在不改变小鼠HD基因表达调控的基础上,仅改变其特定致病基因的长度,利用CRISPR/Cas9技术成功构建HD原位敲入小鼠模型,为进一步模拟人类HD缓慢且迟发的发病过程及后续临床治疗研究拓展了HD模型。