原位末端标记法检测喹乙醇诱导的鲤鱼肝细胞凋亡

方法:采用200 mg/kg饲料的喹乙醇拌料连续饲喂实验鱼,分别于染毒后的第7、14、20、25和30 d剖杀4尾鱼取肝脏用TdT介导的原位末端标记法检测其细胞凋亡。结果:在组织切片中观察到了含棕色或棕黑色颗粒的凋亡细胞。结论:喹乙醇可诱导鲤鱼肝脏细胞凋亡。且检出率随时间的延长而升高,对照组在整个实验过程中保持一个相对恒定很低的检出率。

原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡的研究

目的使用原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡,探讨其在钉螺研究上使用效果和前景。方法经苦楝叶浸提液处理的钉螺和对照钉螺去壳后连续冰冻切片,使用原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)和苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察其细胞凋亡。结果诱导组钉螺细胞凋亡发生在消化腺、足部表皮和足部肌肉纤维之间等部位,对照组凋亡则发生在消化腺和足部表皮部位,两组细胞凋亡值有显著差异(P<0.05);TUNEL法观察和HE染色观察钉螺细胞凋亡,两组凋亡值没有显著差异(P>0.05)。结论 TUNEL法可以运用于钉螺细胞凋亡原位检测。

采用原位末端标记法检测人植入前胚胎中的凋亡征象

目的建立原位末端标记法(TdT-mediated nick end labeling TUNEL)检测人植入前胚胎凋亡征象的方法,阐明凋亡与人类植入前胚胎发育的关系。方法取试管婴儿助孕技术后异常受精的三原核(3PN)胚胎,于2-10细胞期进行固定,采用TUNEL法检测3PN胚胎中的凋亡征象。结果在发育正常3PN胚胎中,未检测到凋亡征象;在20%有碎片的3PN胚胎中检测到TUNEL阳性信号。结论采用TUNEL法可以有效检测人植入前胚胎中的凋亡征象,植入前胚胎中的细胞碎片可能与凋亡有关。

不同制动时相兔骨骼肌萎缩与细胞凋亡的实验研究—原位缺口末端标记法(TUNEL)的观察检测

探讨制动后骨骼肌萎缩的发生机制与骨骼肌细胞凋亡的关系。按照 Sievanen法制备不同时相的制动实验组 ,2 4只实验兔随机分为 4组 ,每组 6只 ,实验侧用管形石膏固定 ,自身未固定侧做对照组。在制动后 3、7、14和 2 8d取材 ,应用末端转移酶介导的 U TP缺口末端标记法 (Td T— mediated d UTP nick end labeling,TUNEL )检测萎缩骨骼肌中有无凋亡的骨骼肌细胞 ,并与形态学的观察结果相对照。对各组的数据进行统计学处理。结果表明不同制动时相所致的萎缩骨骼肌中均可发现有程度不一的骨骼肌细胞发生凋亡 ,以 14 d组最为显著。不同时相凋亡的肌细胞在空间的分布上呈不一致性。制动所致萎缩的骨骼肌中有时可见呈假阳性 TU NEL染色 ,但与凋亡的肌细胞的表现是不同的。我们认为 (1)制动后骨骼肌萎缩有骨骼肌细胞凋亡的参与。 (2 )骨骼肌细胞凋亡的多少与制动时相密切相关 ,以制动后 14 d最为明显。 (3)凋亡的骨骼肌细胞在空间分布上随制动时相不同而不同 ,呈不一致性。 (4 )制动后骨骼肌萎缩的程度与肌细胞凋亡的程度密切相关。

原位末端标记检测实验性变态反应性神经炎胸腺细胞的凋亡

目的为了探讨地塞米松对实验性变态反应性神经炎（ＥＡＮ）小鼠胸腺细胞的影响。方法应用原位末端标记法和电镜检测ＥＡＮ小鼠胸腺细胞的凋亡。结果以上两种方法均发现地塞米松处理组胸腺细胞凋亡率明显高于自然病程组和正常对照组。结论地塞米松可明显增强ＥＡＮ小鼠胸腺细胞凋亡。

原位末端标记检测重症肌无力大鼠中枢损害时脑改变

目的 :探讨重症肌无力 (MG)中枢 (CNS)受损的可能机制 .方法 :将MG患者血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统 ,建立CNS受损的MG大鼠模型 .用原位末端标记 (TUNEL)的方法观察脑细胞凋亡具体情况及不同病程变化 ,并和用健康人血清提取的IgG注入大鼠侧脑室建立的对照组进行比较 .另一组不予任何处理作为空白对照 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型样症状 .TUNEL结果示 :实验组大鼠脑组织切片标记后棕蓝混合染色的阳性细胞 (因行苏木素复染 )于注射后 2wk出现且随时间逐渐增多 ,至 3wk后数目最多 .脑内多部位都有凋亡细胞出现 ,以皮层和海马区较明显 .与对照组比较差别明显 .结论 :经侧脑室注入到大鼠脑室系统的MG患者AChRab可以引起大鼠CNS功能障碍 ,神经细胞发生凋亡 ,凋亡细胞数目随大鼠症状的加重而增加 ,提示细胞凋亡在MG。

原位末端标记检测食管癌凋亡的临床病理学意义

目的:通过对食管癌组织中细胞凋亡的原位观察,评价其临床病理学意义.方法:采用原位末端标记法检测30例食管癌石腊组织切片.结果:在确诊的30例食管癌病人中,凋亡发生率为93.3%,凋亡指数为10.07±13.11,凋亡指数高低与肿瘤病理分级及淋巴结转移明显相关(P<0.01).结论:在食管癌组织中,细胞凋亡是一种自发现象,其发生情况各有不同,可作为评价预后及指导综合治疗的研究指标之一.

三种检测耳蜗毛细胞死亡模式方法的比较

目的评估三种检测耳蜗毛细胞死亡模式方法的优缺点。方法以噪声暴露诱导灰鼠耳蜗毛细胞死亡,采用DNA荧光染料碘化丙锭(Propidiumiodide,PI)染色法,原位末端标记法(TUNEL)和Caspase-3染色法标记毛细胞死亡模式,对比三种检测方法。结果PI染色法可将正常、凋亡、坏死和缺失的毛细胞区分开来,TUNEL法能初步鉴别毛细胞死亡模式,Caspase-3标记可定性凋亡和坏死的毛细胞。结论PI染色法快速、简便、可靠、经济,可用于定量检测凋亡和坏死的毛细胞。

细胞凋亡的原位显示技术及应用

原位末端标记法是利用末端转移酶作为催化酶，在适当条件下将底物接合于ＤＮＡ双链钝端，再用免疫组化放大标记信号，然后ＤＡＢ显色，苏木素衬染。

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的评价四种检测细胞凋亡的方法。方法以蟾蜍素 (bufalin)诱导的白血病细胞株 HL 6 0细胞凋亡 ,选择流式细胞术 (FCM)、原位缺口末端标记法 (TU NEL )、DNA电泳和电镜 (EM)技术对比检测细胞凋亡。结果定性的 EM和 DNA电泳技术可靠 ,而 TUNEL和 FCM主要用于定量检测。结论 EM、TU NEL和

昆明山海棠提取物对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨昆明山海棠提取物 (THW 4 )对离体血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖及凋亡的影响。方法培养家兔主动脉平滑肌细胞 ,加入不同浓度的THW 4进行处理 ,用MTT法测定细胞生长曲线 ,以AnnexinV FITC/PI双标记、透射电镜、原位末端标记法检测细胞凋亡。结果THW 4可以明显抑制VSMC增殖 ,呈剂量和时间依赖性 ,作用 4 8h的半有效抑制浓度 (IC50 )为 15 .6 μg/L ;VSMC在含 10～ 10 0 μg/LTHW 4的培养液中孵育 5 6h ,可检测到细胞早期凋亡 ,且凋亡率随THW 4浓度增加而升高 ;延长孵育时间至 72h ,透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态学改变 ,原位末端标记法显示DNA片段化增多 ,有核碎裂、固缩等改变 ;细胞周期时相分布显示THW 4主要阻滞VSMC于G2 /M期。结论THW 4能有效抑制体外培养的VSMC增殖及诱导其凋亡 ,提示THW

白藜芦醇对脑缺血再灌注后细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究白藜芦醇(Res)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响。方法 48只SD雄性大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 mg/kg,I/R﹢R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R﹢R2组)。缺血2 h再灌注24 h,TTC法测量脑梗死体积,原位末端标记(TUNEI)法检测脑细胞凋亡水平,免疫组化法及Western blot检测Caspase-3蛋白表达,结果与I/R组相比,Res能明显抑制缺血区脑组织Caspase-3蛋白的表达(P<0.01),减少凋亡细胞数(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01)。结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与Caspase-3表达下降有关。

Survivin、Bcl-2在食管鳞癌中的表达及其与细胞凋亡关系的研究

目的探讨食管鳞癌中Survivin、Bcl-2蛋白的表达及其与细胞凋亡之间的关系。方法应用免疫组织化学S-P法检测39例食管鳞癌组织、23例不典型增生组织及39例正常食管黏膜组织中Survivin、Bcl-2表达情况,并用TUNEL法原位检测细胞凋亡情况。结果Survivin在癌组织中表达率为59.00%(23/39),癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中未见表达。Survivin的表达与肿瘤的淋巴转移关系密切,有淋巴转移组Survivin阳性率明显高于无淋巴转移组(P<0.05)。Bcl-2在癌组织、癌旁不典型增生组织中的表达率为69.20%(27/39)、21.7%(5/23),而正常食管黏膜组织中未见表达。Bcl-2的表达与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移有关,有淋巴转移组Bcl-2表达阳性率明显高于无淋巴转移组(P<0.05)。在食管鳞癌组织中Survivin与Bcl-2的表达显著相关(P<0.01)。凋亡指数(AI)在癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中分别为(4.48±0.69)、(12.67±2.20)和(30.13±4.21),组间比较差异有显著性(P<0.01)。Survivin阳性表达组及Bcl-2阳性表达组的AI明显低于其阴性表达组AI(P<0.01)。结论Survivin和Bcl-2阳性表达与食管鳞癌的生长及转移有关,两者可能通过共同抑制细胞凋亡,参与食管癌的发生发展。

补肾壮筋汤对兔早期实验性膝骨关节炎软骨细胞凋亡及增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨以补肝益肾为治疗手段的补肾壮筋汤对兔早期膝关节实验性OA的软骨细胞凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:40只青紫蓝兔随机分为4组,每组10只,分别为中药组、假模组、模型组、正常组,参照Hulth法造成早期骨关节炎模型。术后第4周开始,中药组、假模组口服补肾壮筋汤,模型组、正常组口服生理盐水。7周末取兔膝关节软骨,肉眼、光镜、透射电镜观察形态学变化,用原位末端标记法(TUNEL法),免疫组化法分别观察软骨细胞凋亡和PCNA的表达。结果:中药组的软骨细胞凋亡指数小于模型组(P<0.05);而中药组的PCNA表达要高于其他各组(P<0.05)。结论:补肾壮筋汤减少兔早期膝关节实验性OA软骨细胞的凋亡,促进软骨细胞的增殖,对早期OA有治疗作用。

四氯化碳诱导大鼠肾细胞凋亡的研究

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肾形态结构和肾细胞凋亡的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、2周CCl4组和6周CCl4组,每组5只。对照组背部皮下注射橄榄油(0.12 ml/100 g鼠重),CCl4组以0.3 ml/100 g鼠重背部皮下注射60%CCl4橄榄油。2周CCl4组和6周CCl4组大鼠分别于实验的第3周和7周的第1 d处死。肾石蜡切片苏木精-伊红染色,光镜观察肾组织形态学,免疫组织化学显示Caspase-3、Bax、TUNEL观察肾细胞凋亡。结果对照组肾小球和肾小管结构均正常。2周和6周CCl4组的肾小球结构正常,2周CCl4组病变较、6周CCl4组肾皮质近端小管管腔狭小,上皮细胞浊肿,空泡变性,微绒毛脱失。对照组和2周CCl4组Caspase-3、Bax免疫组织化学显色未见阳性细胞表达;而6周CCl4组则在近髓质处的皮质内,近端小管上皮细胞的胞质呈现棕黄色阳性反应。TUNEL显色2周CCl4组可见肾皮质内近端小管上皮细胞核和少量的肾小球细胞核呈阳性表达,而6周CCl4组在大量的远曲小管及少量近端小管的上皮细胞核呈阳性表达。结论CCl4诱导性肾损伤大鼠,2周时肾组织的近端小管上皮及少量肾小球毛细血管内皮细胞发生凋亡,而损伤6周时,肾皮质近端小管受损,上皮细胞变性;远曲小管上皮细胞发生凋亡。

芪红胶囊对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的影响

目的探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法将培养细胞分为4组:病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Annexin-Ⅴ/PI染色观察各组细胞凋亡发生情况;并通过流式细胞仪分析各组细胞的凋亡发生率;应用RT-PCR方法观察与凋亡相关细胞因子的表达改变。结果病毒感染对照组细胞经Hoechst33258染色发现病毒感染后的细胞核出现强亮度的蓝色荧光,可观察到凋亡细胞的典型变化;Annexin-Ⅴ/PI染色可见HeLa细胞膜呈强绿色荧光,细胞核显强红色荧光;通过流式细胞仪检测PI染色的细胞DNA,发现病毒感染组出现明显凋亡峰;芪红胶囊加病毒组凋亡发生率明显下降,正常对照组细胞未发生凋亡;同时芪红胶囊能够调节与凋亡相关细胞因子的表达。结论芪红胶囊能够抑制柯萨奇病毒引起的细胞凋亡。

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),于损伤后不同时点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达,神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组>A组(P<0.01)。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。

GDNF及HSV-GDNF对体外培养大鼠脊髓运动神经元受损后凋亡的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)及单纯疱疹病毒载体介导的 GDNF(HSV- GDNF)对体外培养的胎鼠脊髓运动神经元在划痕损伤后凋亡的影响。 方法 对培养 12 d神经元行划痕损伤 ,并将其分成 4组 (无血清对照组、血清组、HSV- GDNF组和 GDNF组 ) ,给予不同培养液 ,定期观察各组的运动神经元存活数。分别于划痕损伤第 4d和第 7d时对神经元作 TU NEL 染色 ,检测运动神经元凋亡数 ,并在图像分析仪上对凋亡神经元作平均光密度的色谱分析。 结果 各组内运动神经元存活数与培养时间成反比。从对照组、HSV- GDNF组到 GDNF组 ,运动神经元凋亡数和凋亡神经元的平均光密度均依次减少 ,但对照组和血清组、GDNF组和 HSV-GDNF组间的运动神经元凋亡数以及凋亡神经元平均光密度均无显著差异。 结论 GDNF和 HSV- GDNF能挽救生长发育过程中受损的脊髓运动神经元的凋亡 ,对体外培养的受损脊髓运动神经元具有一定的保护作用。