EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。

免疫组织化学法双色银染原位杂交与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2基因状态的应用

目的:比较免疫组织化学法(IHC)、双色银染原位杂交(DISH)、荧光原位杂交技术(FISH)对乳腺癌HER-2基因状态的应用效果。方法:回顾性的选取2017年1月至2019年12月我院收治的180例乳腺癌患者作为研究对象,均为女性、单侧,取组织标本行IHC、DISH、FISH检查HER-2。结果:180例患者中各检测方式对HER-2基因的检查效果:IHC检查HER-2表达阴性118例、HER-2表达阳性49例,可疑阳性13例;DISH检查HER-2基因扩增56例、无扩增107例、不确定17例;FISH检查HER-2扩增54例、无扩增107例、不确定19例。各检测方式比较:DISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.788,一致性较好;FISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.784,一致性较好;DISH与FISH检查HER-2基因的Kappa值为0.939,一致性高。结论:IHC、DISH、FISH均可对乳腺癌患者的HER-2基因状态行评估,可以IHC作为筛查手段,若医疗资源许可应当结合DISH检查结果制定治疗方案。

免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变中的应用评价

目的:根据抗体阳性表达的不同部位(细胞核、细胞质和细胞膜)、染色顺序及匹配不同的显色系统,探讨免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变诊断中的最佳染色方法。方法:挑选良性淋巴上皮病(benign lymphoepithelial lesion,BLEL)、淋巴上皮癌(lymphoepithelial carcinoma,LEC)和黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤(extranodal marginal zone lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue,MALT淋巴瘤)各20例,分别进行AE1/AE3、Ki-67、CD20cy抗体的免疫组织化学单染和两两组合的双染检测。每个病例依据不同抗体的表达部位(细胞核、细胞质及细胞膜)、不同的抗体染色顺序和显色剂,分别采用3种双染方法检测,即①先Ki-67(DAB显色),再AE1/AE3或CD20cy(AEC显色);②先AE1/AE3或CD20cy(DAB显色),再Ki-67(AEC显色);③先Ki-67(AEC显色),再AE1/AE3或CD20cy(BCIP/NBT显色)。所得结果均与单染相比较,采用SPSS 17.0软件包对数据进行χ^2检验和配对t检验,分析染色强度和阳性比率有无差异。结果:所有双染方法中抗体定位均准确,但方法 1中各抗体染色强度(P=0.765)和阳性比率(P>0.05)均无显著差异,而方法 2和方法 3中抗体的阳性比率和染色强度均有不同程度下降(P<0.05)。结论:免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变中的最佳染色方法为先进行阳性定位于细胞核如Ki-67的染色,配合使用DAB显色剂,后进行阳性定位于细胞膜或细胞质如AE1/AE3或CD20cy的染色,配合使用AEC显色剂。

S-100/CKpan免疫组化双染技术在结直肠癌周围神经侵犯诊断中的应用

近年我国结直肠癌的发病率和病死率呈逐年上升趋势[1]。在结直肠癌的诊断中,周围神经侵犯与不良预后密切相关,是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素,也是相关病理结果中不可或缺的一环[2]。目前结直肠癌周围神经侵犯的诊断主要依赖病理医师对病理标本HE染色和相应免疫组化结果的判读。

原位杂交和免疫组化双标记技术

目的探讨原位杂交与免疫组化双标记的方法学。方法用地高辛 (Dig)标记的生长抑素 (SOM)cRNA探针和抗多肽 (VP)抗体 ,在同一冰冻切片上标记大鼠的脑垂体组织 (n =2 0 ) ,先作原位杂交 ,后作免疫组化。结果双标记阳性细胞定位于胞浆 ,呈蓝棕色。结论原位杂交与免疫组化双标记是一种在基因水平和蛋白质水平上来确定细胞特性的方法 ,由于其能够与形态学特点相结合 ,具有比其它实验方法更加优越的特性。

免疫组化与特染结合的双染法及应用

免疫组化与特染结合的双染法及应用侯景辉，程嘉骧，赵美卿免疫组化染色和特殊染色是病理诊断中重要辅助手段之一，每种方法有其特异性和适用性，通常这两种方法只能在不同切片上分别进行染色。现介绍Ⅷ因子免疫组化染色和肥大细胞特染相结合的双重染色方法如下。１材料和...

双探针显色原位杂交技术在乳腺癌HER2基因检测中的应用

目的:通过双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的状态,评估双探针显色原位杂交技术的临床应用价值。方法:选取存档蜡块82例,分别用免疫组化及双探针显色原位杂交两种方法对Her-2基因及蛋白进行检测,并采用四格表卡方检验、配对卡方检验及Kappa检验作相关统计学分析。结果:两种方法检测结果不存在显著性差异(P>0.05);就两种方法检测结果的一致性分析而言,两种方法所得出的检测结果存在较好的一致性(P<0.05)。结论:双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因扩增结果与免疫组化检测HER2蛋白过表达结果高度相似,可作为检测HER2基因状态的有效方法。

肾脏标本的原位杂交与免疫组织化学双标记技术

我们利用小鼠单侧输尿管梗阻(UU0)模型,采用地高辛标记的细胞黏附分子-1(ICAM-1)cDNA探计与单核巨噬细胞(ED-1)抗体在同一切片上观察了肾间质中ICAM-1 mRNA及ED-1抗原的表达,取得了满意的效果.

Y-box结合蛋白-1在胃癌组织中的表达及意义

目的研究Y-box结合蛋白-1(YB-1)在胃癌的不同发展阶段中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学和原位杂交方法检测正常胃组织、肠化生组织、早期胃癌和进展期胃癌组织中YB-1蛋白和mRNA的表达变化。结果在正常胃组织中YB-1蛋白和mRNA无表达;在肠化生组织中可见YB-1阳性染色于胃黏膜上皮细胞中,但表达较弱;在早期胃癌中YB-1表达于全层胃黏膜上皮细胞中,染色较肠化生组织重,而在进展期胃癌中其表达较在早期胃癌中下降。结论 YB-1的升高可能在胃癌的早期发生和发展中起作用。

鸡尾酒双染CD31/D2-40和CKpan在脉管癌栓病理诊断中的应用价值

脉管癌栓与肿瘤患者的术后辅助治疗及预后关系密切。近年多采用免疫组化CD31/D2-40标记血管、淋巴管内皮细胞,然而仅使用单项的免疫组化标记,仍无法确定脉管内细胞团是否有癌细胞,免疫组化鸡尾酒双染法是一种可以在组织中同时标记两类不同抗原的方法,可同时双染脉管内皮细胞和其内癌细胞[1-2]。本实验联合检测CD31/D2-40和上皮细胞标志物(CKpan),分别行HE染色、免疫组化单染CD31/D2-40、鸡尾酒双染CD31/D2-40/CKpan,分析鸡尾酒双染法在脉管癌栓病理诊断中的价值。

p16/Ki-67手工染色与全自动免疫组化仪染色效果对比

p16蛋白是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂,p16在细胞周期的阻滞期具有抑制细胞增殖的功能[1]。Ki-67表示细胞周期进展及增殖活跃[2]。两者同时表达在一个细胞周期则提示细胞周期失调。正常生理状态下,p16和Ki-67的表达相互制约,不会同时表达于一个细胞中。若p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测阳性,提示子宫颈上皮内病变2级(cervical intraepithelial neoplasias 2,CIN2)及以上病变[3-6]。

结合珠蛋白mRNA及其蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣皮损中结合珠蛋白的表达,探讨结合珠蛋白在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制中的作用。方法:采用原位杂交、免疫组织化学技术和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣患者皮损及20例正常包皮组织中结合珠蛋白mRNA及其蛋白的表达情况。结果:结合珠蛋白mRNA及其蛋白表达部位主要在表皮的基底层和棘细胞层。结合珠蛋白mRNA在尖锐湿疣皮损组和对照组中原位杂交染色灰度值分别为106.24±5.85和122.72±4.41,差异有统计学意义(P<0.05);结合珠蛋白在尖锐湿疣皮损组和对照组中免疫组化染色灰度值分别为120.24±1.83和128.72±2.41,差异有统计学意义(P<0.05);Western免疫印迹检测结果显示尖锐湿疣皮损组和对照组光密度值分别为0.53±0.11和0.24±0.06,尖锐湿疣皮损组表达较对照组明显升高(P<0.05)。结论:尖锐湿疣皮损表皮细胞中结合珠蛋白mRNA表达增强,合成结合珠蛋白水平升高。尖锐湿疣皮损中结合珠蛋白可能通过抑制朗格汉斯细胞的功能成熟和抑制角质形成细胞的免疫活性参与尖锐湿疣的局部免疫逃逸。

食管胃结合部癌表皮生长因子-2基因扩增及蛋白表达与临床病理的关系

目的探讨表皮生长因子-2(Her-2)在胃食管结合部癌中的蛋白表达和基因扩增情况及其与胃食管结合部癌患者的临床病理关系。方法采用免疫组织化学法(IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)检测80例手术切除的胃食管结合部癌组织中HER-2的蛋白表达和基因扩增情况,并分析与胃食管结合部癌的病理分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移的关系。结果应用FISH技术检测显示在胃食管结合部癌组织中Her-2的蛋白阳性表达率22.5%,应用IHC技术检测其在癌组织表达率为15%,Her-2基因扩增和蛋白阳性表达与胃食管结合部癌的分化程度和临床TNM分期有关(P<0.05),而与年龄、性别和浸润深度及淋巴结转移无相关性。结论 Her-2蛋白过表达和基因扩增是胃食管结合部癌患者的一个预后指标,与其发生发展有关,联合检测HER-2蛋白表达水平及基因扩增程度对于胃食管结合部癌的治疗和预后评估有一定指导意义。

胃食管结合部癌Her－2基因扩增及蛋白表达与临床病理关系

目的：通过检测表皮生长因子－2（ Her－2）在胃食管结合部癌中的蛋白表达和基因扩增情况，探讨其与胃食管结合部癌患者的临床病理关系。方法采用免疫组织化学法（ IHC）和荧光原位杂交技术（ FISH）检测80例手术切除的胃食管结合部癌组织中Her－2的蛋白表达和基因扩增情况，并分析与胃食管结合部癌的病理分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移的关系。结果应用FISH技术检测显示在胃食管结合部癌组织中Her－2的蛋白阳性表达率为22．5％，应用IHC技术检测其在癌组织表达率为15％，Her－2基因扩增和蛋白阳性表达与胃食管结合部癌的分化程度和临床TNM分期有关（ P＜0．05），而与年龄、性别和浸润深度及淋巴结转移无相关性。结论 Her－2蛋白过表达和基因扩增是胃食管结合部癌患者的一个预后指标，与其发生发展有关，联合检测Her－2蛋白表达水平及基因扩增程度对于胃食管结合部癌的治疗和预后评估有一定指导意义。

ErbB-3结合蛋白—ebp1对ACC-M细胞生长的影响

目的:探讨ErbB- 3结合蛋白—ebp1 对腺样囊性癌ACC M细胞生长增殖作用的影响。方法:通过免疫组化筛选到erbB 2/erbB -3双阳性的ACC M细胞系;转染pcDNA3.1 -ebp1 质粒至ACC M细胞,G418 筛选被转染的阳性细胞;RT- PCR检测转染后细胞中ebp1的转录水平;细胞生长曲线及3H- TdR摄入法观察转染前后细胞生长增殖能力的改变。结果:ACC- M细胞同时表达erbB 2/erbB 3;RT -PCR显示转染后细胞中ebp1转录水平明显升高;ACC- M- ebp1 细胞生长曲线平缓,生长减慢,3H- TdR摄入量明显减少,细胞增殖能力减弱。结论:ebp1在体外能显著抑制ACC- M肿瘤细胞增殖。

核心结合因子a1在小鼠矿化期牙胚中的表达

目的研究核心结合因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)蛋白及mRNA在小鼠矿化期牙胚的各细胞及不同组织中的表达定位,探讨其对牙齿发育的作用。方法取出生后第5-7天BALB/c小鼠,拉颈处死,分离解剖含下颌第一磨牙区下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,采用免疫组化和原位杂交方法检测Cbfa1蛋白和mRNA在矿化期牙胚中的表达及特点。结果 Cbfa1蛋白在前期牙本质和牙槽骨中表达;Cbfa1 mRNA表达较为广泛,不仅在前期牙本质和牙槽骨、成骨细胞中强阳性表达,还在多种软组织中表达,如牙囊细胞,牙髓细胞,中间层细胞,星网状层细胞中均可见Cbfa1 mRNA表达;但在成牙本质细胞、成釉细胞和牙本质中,Cbfa1 mRNA和蛋白均未见表达。结论 Cbfa1与矿化期牙胚的发育密切相关,对不同的组织细胞发挥特异性的调控作用。Cbfa1可能对早期牙槽骨和前期牙本质的形成及矿化启动具有重要作用,并参与调控牙囊细胞、牙髓细胞等的分化及星网状层细胞和中间层细胞等的相互作用,但是对此期的成牙本质细胞、成釉细胞及已经形成的牙本质,Cbfa1的作用可能不明显。