引物原位标记法产前诊断18号染色体数目异常

目的 探讨引物原位标记法 (PRINS)结合经腹脐血穿刺 ,应用于脐血中期细胞快速产前诊断 18号染色体数目异常的可行性。方法 B超监护下经腹采集胎儿脐血共 16例 ,外周血 3 4例 ,应用 18号染色体特异性引物 ,标记分裂中期细胞 18号染色体 ,PRINS结果与中期细胞染色体G带分析结果进行比较。结果 16例脐血中 ,PRINS检测 2例为 18三体 ,3 4例外周血中 ,1例为 18三体 ,与染色体核型分析一致。结论 PRINS是一种简便、快速、可靠的产前诊断染色体数目异常的临床检测方法 。

末端转移酶原位标记法检测细胞凋亡

建立一种用末端转移酶标记对凋亡的细胞进行原位检测的方法。方法：在末端转移酶催化下，将地高辛修饰的核苷酸掺入凋亡细胞中的ＤＮＡ断裂缺刻，再用显色法检测被标记的ＤＮＡ，从而检出凋亡细胞。结果：本实验建立了一种灵敏、特异、有效的凋亡检测方法。结论：末端转移酶介导的原位标记法是研究凋亡的一个非常有用的工具。

原位末端标记法检测喹乙醇诱导的鲤鱼肝细胞凋亡

方法:采用200 mg/kg饲料的喹乙醇拌料连续饲喂实验鱼,分别于染毒后的第7、14、20、25和30 d剖杀4尾鱼取肝脏用TdT介导的原位末端标记法检测其细胞凋亡。结果:在组织切片中观察到了含棕色或棕黑色颗粒的凋亡细胞。结论:喹乙醇可诱导鲤鱼肝脏细胞凋亡。且检出率随时间的延长而升高,对照组在整个实验过程中保持一个相对恒定很低的检出率。

原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡的研究

目的使用原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡,探讨其在钉螺研究上使用效果和前景。方法经苦楝叶浸提液处理的钉螺和对照钉螺去壳后连续冰冻切片,使用原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)和苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察其细胞凋亡。结果诱导组钉螺细胞凋亡发生在消化腺、足部表皮和足部肌肉纤维之间等部位,对照组凋亡则发生在消化腺和足部表皮部位,两组细胞凋亡值有显著差异(P<0.05);TUNEL法观察和HE染色观察钉螺细胞凋亡,两组凋亡值没有显著差异(P>0.05)。结论 TUNEL法可以运用于钉螺细胞凋亡原位检测。

不同制动时相兔骨骼肌萎缩与细胞凋亡的实验研究—原位缺口末端标记法(TUNEL)的观察检测

探讨制动后骨骼肌萎缩的发生机制与骨骼肌细胞凋亡的关系。按照 Sievanen法制备不同时相的制动实验组 ,2 4只实验兔随机分为 4组 ,每组 6只 ,实验侧用管形石膏固定 ,自身未固定侧做对照组。在制动后 3、7、14和 2 8d取材 ,应用末端转移酶介导的 U TP缺口末端标记法 (Td T— mediated d UTP nick end labeling,TUNEL )检测萎缩骨骼肌中有无凋亡的骨骼肌细胞 ,并与形态学的观察结果相对照。对各组的数据进行统计学处理。结果表明不同制动时相所致的萎缩骨骼肌中均可发现有程度不一的骨骼肌细胞发生凋亡 ,以 14 d组最为显著。不同时相凋亡的肌细胞在空间的分布上呈不一致性。制动所致萎缩的骨骼肌中有时可见呈假阳性 TU NEL染色 ,但与凋亡的肌细胞的表现是不同的。我们认为 (1)制动后骨骼肌萎缩有骨骼肌细胞凋亡的参与。 (2 )骨骼肌细胞凋亡的多少与制动时相密切相关 ,以制动后 14 d最为明显。 (3)凋亡的骨骼肌细胞在空间分布上随制动时相不同而不同 ,呈不一致性。 (4 )制动后骨骼肌萎缩的程度与肌细胞凋亡的程度密切相关。

原位末端标记检测实验性变态反应性神经炎胸腺细胞的凋亡

目的为了探讨地塞米松对实验性变态反应性神经炎（ＥＡＮ）小鼠胸腺细胞的影响。方法应用原位末端标记法和电镜检测ＥＡＮ小鼠胸腺细胞的凋亡。结果以上两种方法均发现地塞米松处理组胸腺细胞凋亡率明显高于自然病程组和正常对照组。结论地塞米松可明显增强ＥＡＮ小鼠胸腺细胞凋亡。

原位末端标记检测重症肌无力大鼠中枢损害时脑改变

目的 :探讨重症肌无力 (MG)中枢 (CNS)受损的可能机制 .方法 :将MG患者血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统 ,建立CNS受损的MG大鼠模型 .用原位末端标记 (TUNEL)的方法观察脑细胞凋亡具体情况及不同病程变化 ,并和用健康人血清提取的IgG注入大鼠侧脑室建立的对照组进行比较 .另一组不予任何处理作为空白对照 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型样症状 .TUNEL结果示 :实验组大鼠脑组织切片标记后棕蓝混合染色的阳性细胞 (因行苏木素复染 )于注射后 2wk出现且随时间逐渐增多 ,至 3wk后数目最多 .脑内多部位都有凋亡细胞出现 ,以皮层和海马区较明显 .与对照组比较差别明显 .结论 :经侧脑室注入到大鼠脑室系统的MG患者AChRab可以引起大鼠CNS功能障碍 ,神经细胞发生凋亡 ,凋亡细胞数目随大鼠症状的加重而增加 ,提示细胞凋亡在MG。

原位末端标记检测食管癌凋亡的临床病理学意义

目的:通过对食管癌组织中细胞凋亡的原位观察,评价其临床病理学意义.方法:采用原位末端标记法检测30例食管癌石腊组织切片.结果:在确诊的30例食管癌病人中,凋亡发生率为93.3%,凋亡指数为10.07±13.11,凋亡指数高低与肿瘤病理分级及淋巴结转移明显相关(P<0.01).结论:在食管癌组织中,细胞凋亡是一种自发现象,其发生情况各有不同,可作为评价预后及指导综合治疗的研究指标之一.

简单、快速、高效扩增和标记目的基因技术的研究

从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落 ,用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因 ,不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程 ,能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。

三种检测耳蜗毛细胞死亡模式方法的比较

目的评估三种检测耳蜗毛细胞死亡模式方法的优缺点。方法以噪声暴露诱导灰鼠耳蜗毛细胞死亡,采用DNA荧光染料碘化丙锭(Propidiumiodide,PI)染色法,原位末端标记法(TUNEL)和Caspase-3染色法标记毛细胞死亡模式,对比三种检测方法。结果PI染色法可将正常、凋亡、坏死和缺失的毛细胞区分开来,TUNEL法能初步鉴别毛细胞死亡模式,Caspase-3标记可定性凋亡和坏死的毛细胞。结论PI染色法快速、简便、可靠、经济,可用于定量检测凋亡和坏死的毛细胞。

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的评价四种检测细胞凋亡的方法。方法以蟾蜍素 (bufalin)诱导的白血病细胞株 HL 6 0细胞凋亡 ,选择流式细胞术 (FCM)、原位缺口末端标记法 (TU NEL )、DNA电泳和电镜 (EM)技术对比检测细胞凋亡。结果定性的 EM和 DNA电泳技术可靠 ,而 TUNEL和 FCM主要用于定量检测。结论 EM、TU NEL和

细胞凋亡的原位显示技术及应用

原位末端标记法是利用末端转移酶作为催化酶，在适当条件下将底物接合于ＤＮＡ双链钝端，再用免疫组化放大标记信号，然后ＤＡＢ显色，苏木素衬染。

采用原位末端标记法检测人植入前胚胎中的凋亡征象

目的建立原位末端标记法(TdT-mediated nick end labeling TUNEL)检测人植入前胚胎凋亡征象的方法,阐明凋亡与人类植入前胚胎发育的关系。方法取试管婴儿助孕技术后异常受精的三原核(3PN)胚胎,于2-10细胞期进行固定,采用TUNEL法检测3PN胚胎中的凋亡征象。结果在发育正常3PN胚胎中,未检测到凋亡征象;在20%有碎片的3PN胚胎中检测到TUNEL阳性信号。结论采用TUNEL法可以有效检测人植入前胚胎中的凋亡征象,植入前胚胎中的细胞碎片可能与凋亡有关。

紫杉醇诱导细胞凋亡的研究

目的探讨紫杉醇诱导细胞凋亡的效果。方法采用末端DNA片段原位标记法检测紫杉醇诱导细胞凋亡作用。结果正常SMC对照组偶见凋亡细胞,加入紫杉醇SMC,可见大量凋亡细胞。结论紫杉醇可诱导人脐动脉SMC的凋亡,其作用随药物剂量的增加而变强。

多沙唑嗪对前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC 3在裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法:建立前列腺癌细胞系PC 3的裸鼠体内移植瘤模型,将30只荷瘤裸鼠随机分为5组[A组(对照组),B组(多沙唑嗪3mg/kg),C组(多沙唑嗪10mg/kg),D组(多沙唑嗪30mg/kg),E组(多沙唑嗪100mg/kg) ]。接种肿瘤细胞1周后每天1次灌胃给药,每周测量肿瘤体积2次,给药2周后处死裸鼠,取肿瘤组织做免疫组织化学Ki67及细胞凋亡DNA原位标记法(TUNEL法)检测,并用免疫印迹法研究蛋白Smad 4及IκBα在各组肿瘤组织中的表达情况。结果:多沙唑嗪给药组肿瘤体积较对照组显著缩小,肿瘤的重量较对照组亦显著减轻,而不同剂量的多沙唑嗪给药组间肿瘤大小差异无统计学意义。免疫组织化学结果显示前列腺癌细胞Ki67的阳性率在A至E组依次为36. 5%±8. 5%, 37. 7% ±11. 3%, 40. 1% ±12. 7%, 37. 2% ±12. 3%, 39. 3% ±13. 1%,各组间差异无统计学意义(P>0.O5);而前列腺癌细胞的TUNEL阳性率在A至E组依次为9. 5% ±3. 5%, 24. 7% ±8. 3%, 25. 7%±9. 7%, 28. 2%±12. 1%, 27. 5%±11. 3%,各用药组明显高于对照组(P<0.O1);免疫印迹结果表明用药组蛋白Smad 4及IκBα的表达显著高于对照组。结论:α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙?

白藜芦醇对脑缺血再灌注后细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究白藜芦醇(Res)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响。方法 48只SD雄性大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 mg/kg,I/R﹢R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R﹢R2组)。缺血2 h再灌注24 h,TTC法测量脑梗死体积,原位末端标记(TUNEI)法检测脑细胞凋亡水平,免疫组化法及Western blot检测Caspase-3蛋白表达,结果与I/R组相比,Res能明显抑制缺血区脑组织Caspase-3蛋白的表达(P<0.01),减少凋亡细胞数(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01)。结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与Caspase-3表达下降有关。