原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染

目的:观察宫颈鳞状上皮病变过程中HPV6/11、HPV16/18的表达,探讨其测定的临床意义。方法:选择病理诊断为宫颈慢性炎症50例、鳞状上皮乳头状瘤样增生30例、尖锐湿疣30例、上皮内瘤变89例、鳞癌50例共249例石蜡包埋标本,应用原位核酸分子杂交技术对其进行HPV6/11,HPV16/18检测。结果:慢性炎症组HPV6/11阳性表达4%,HPV16/18阳性表达0%;乳头状瘤样增生组HPV6/11阳性表达10%,HPV16/18阳性表达3.3%;尖锐湿疣组HPV6/11阳性表达93.3%,HPV16/18阳性表达23.3%;CIN组中Ⅰ级HPV6/11阳性表达48.9%,HPV16/18阳性表达42.2%;Ⅱ级HPV6/11阳性表达39.1%,HPV16/18阳性表达69.6%;Ⅲ级HPV6/11阳性表达9.5%,HPV16/18阳性表达66.7%;鳞癌组HPV6/11阳性表达6%,HPV16/18阳性表达82%。结论:应用原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变细胞的HPV6/11、HPV16/18,为临床早期诊断、鉴别诊断及评估预后提供可靠的理论依据。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

电镜核酸分子原位杂交技术的探索

显微水平的核酸分子原位杂交技术已广泛地应用于基因在染色体上的定位,发育过程中的基因表达等方面,但电镜水平的原位杂交技术却仍在探索之中,主要因为剧烈的核酸分子杂交条件与样品精细结构的保存之间存在着矛盾,为此,我们分别在分级抽提的整装细胞,L-K_4包埋或Epon812包埋的超薄切片样品以及DGD包埋-去包埋样品中对进行电镜分子原位杂交研究的可行性和杂交条件进行了一些探索,目前在整装细胞样品中已取得初步的结果。

白细胞核酸分子原位杂交技术的建立

近年来,国内外不少学者利用斑点杂交和墨迹杂交法证实白细胞内存在HBV-DNA,用原位杂交技术研究白细胞内HBV-DNA存在状态尚未见报道。我们近二年来开展了此项研究,获得了初步结果。现报告如下: 材料慢性HBV感染经斑点杂交证实白细胞HBV-DNA阳性的患者。

原位分子杂交技术的几点体会

非同位素标记探针应用于原位分子杂交,虽取得了很大进展,但因其操作步骤较多,时间较长等因素,仍存在一些问题有待克服。以下介绍我们在实际操作中得到的一点初步体会。 1 减少或避免组织掉片的方法 除非蛋白性防脱片胶外,还需注意以下几点:(1)载玻片一定要干净。

用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位

目的 :用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位以及在虫体发育的不同时期mRNA含量的变化。方法 :以 6 6kDa抗原的cDNA克隆EgA31为模板制备RNA探针 ,与细粒棘球绦虫原头蚴、育囊和成虫虫体进行原位杂交实验。结果 :原位杂交实验显示EgA31mRNA主要位于原头蚴和成虫的皮层下某种细胞中 ,并在棘球蚴育囊的生发层中也存在这种细胞。在原头蚴向成虫的发育过程中虫体吸盘处细胞内EgA31mRNA含量显著增加。结论 :含EgA31mRNA的细胞很可能是皮层细胞 ;EgA31蛋白可能参与吸盘上肌纤维的收缩作用并与虫体的免疫逃避功能有关。

电镜原位分子杂交技术及其应用

将原位分子杂交技术应用于电镜水平 ,观察标记的特定DNA、mRNA和RHA在细胞和 或组织内的超微结构定位的方法 ,称为电镜原位分子杂交技术。本文综述了电镜原位分子杂交技术的建立及其分类 ,并详细介绍了非放射性电镜原位分子杂交技术的基本操作程序及注意事项 ,最后对电镜原位分子杂交技术的应用做了简要介绍。

原位分子杂交技术在肾组织出血热病毒RNA检测中的应用

流行性出血热病毒(HFV)在人体的复制状况及其致病机理,目前还不十分清楚。现代分子生物学技术的发展,为此项研究提供了新手段。近年发展起来的非同位素标记探针—地高辛(DIG)酶联免疫系统是一种比较新的技术,敏感性高,标记方便,已广泛应用于病毒研究领域。我们采用DIG标记的HFV cDNA探针。

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸检心肌组织12例及病区与非病区尸检正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号,即有肠道病毒RNA存在,阳性率为91.66%,对照组均为阴性。结论吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染,提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。

核酸杂交技术及其在分子病理学研究中的应用

核酸杂交技术最初是在1961年建立的。Hall等利用核酸能变性与复性的原理使核酸探针与靶序列在液相中杂交,然后通过平衡密度梯度离心分离到杂交体建立了核酸杂交技术。随后,于1962年Bautz等将糖苷化DNA吸附在硝化纤维素柱上,Bolton等将变性的单链DNA固定在琼脂中。

原位杂交分子组织化学技术及其在电镜技术中的应用

研究细胞或组织内特殊基因表达的调控机理，分析单细胞内蛋白质和mRNA的特殊基因表现很有必要。原位杂交对于发现mRNA是必不可缺少的方法，它不但可以分析特殊mRNA的表达，而且可以证实特殊蛋白质的合成部位。原位杂交取决于细胞或组织内靶核酸与核酸探针的碱基配对，且条件尽可能优化。作为核酸探针，人工合成的01igo-DNA颇受青睐，且在诸多方面优于克隆双链CDNA。应用01igo-DNA探针可在组织切片上清楚地将28srRNA定位于细胞核或细胞质部位。原位杂交28srRNA对于评价切片中可杂交的rRNA水平十分方便。随着计算机图象分析广泛应用和酶免疫组织化学技术半抗原探针的问世，非放射性比色测定染色法也在所进步，借助显微照相与图象分析仪可以定量检测各种染色密度，或借助于扫描电镜技术背散电子探针以显示特殊的mRNA的位置。原位杂交非放射法最佳优点是它的高分辨率。这使人们可以在细胞和亚细胞水平分析mRNA的分布。事实上，应用此法研究mR－NA不规则分布方面已有明显进步。如将actinmRNA定位于细胞质；乙酸胆碱脂酶的mRNA仅限于核周区，而此种酶被输送到特定的细胞膜部位；胃泌素mRNA仅限于人胃泌素细胞的核上区，而翻译了的胃泌素蛋白质则被输送到细胞的基底部；

化学发光技术在核酸分子杂交中的应用

化学发光的发现历史悠久,但把化学发光技术与核酸分子杂交结合起来,建立化学发光核酸分子杂交技术却是近几年的事。1983年Heller和Schneider首先将化学发光技术引入了核酸的分析,这是继建立发光免疫技术之后,化学发光技术应用的又一个新的领域。目前,有关这方面的报道还不多,本文试就化学发光核酸分子杂交技术及有关的应用作一简要的介绍。

肽核酸荧光原位杂交技术快速检测食品中的李斯特菌属及单增李斯特菌

目的建立利用肽核酸荧光原位杂交技术(PNA-FISH)快速检测食品中李斯特菌属及单增李斯特菌的方法。方法针对李斯特菌属、单增李斯特菌分别设计合成2份PNA探针lis-16S-1、lm-16S-2,并建立荧光原位杂交技术,优化杂交条件,对选取的13株李斯特菌和其他9株非李斯特菌进行检测,验证探针的特异性和灵敏度,并对118份食品样品用LB肉汤2次增菌培养后进行PNA-FISH检测。结果探针灵敏度和特异性均为100%,从118份食品中检出14株李斯特菌和8株单增李斯特菌,结果与API方法和VITEK方法鉴定结果一致。结论 PNA-FISH方法可靠易行,对从食品中检测致病性单增李斯特菌有较高的实用性。

核酸原位杂交技术在细胞病理学的应用

杂交的技术原理是核酸碱基互补,指DNA互补链,DNA与RNA或RNA互补链间发生杂交。原位杂交是互补碱基序列形成氢键的过程。构成稳定的复合体或杂交体。主要工具是标记的特定序列探针。目前应用的探针标记物多是非放射性核位素。探针种类主要有四类：双链DNA,单链DNA,反义RNA和自动化合成的寡核苷酸探针。它们各有其本身特点。

核酸分子杂交技术及其应用

核酸分子杂交是利用已知顺序的DNA作为控针来鉴定DNA或RNA的特殊顺序的技术。由于其特异性强,灵敏度高、定位准确等优点,目前已被广泛应用于分子生物学、生理学、遗传学、病毒学等基础学科的研究,现就其基本原理,主要步骤。