浅埋软岩隧道式锚碇稳定性原位模型试验研究

为了研究高拉拔荷载作用下浅埋软岩(泥岩)隧道式锚碇的稳定性(强度特性、变形规律及长期稳定性),以某在建的长江大桥隧道式锚碇工程为依托,开展了缩尺比例为1∶10的浅埋软岩(泥岩)隧道式锚碇原位模型试验(蠕变试验、极限破坏试验)。研究发现:浅埋软岩(泥岩)隧道式锚碇具有较高的承载能力,在设计荷载甚至在高于设计荷载几倍的荷载作用的情况下,其蠕变变形呈现出基本上趋于稳定的趋势,具有一定的长期稳定性。其破坏模式为锚塞体上方的岩体破裂成块体状,锚塞体下方沿与岩体接触面产生整体错动,破坏的下边界为锚塞体与岩体的接触带,锚塞体混凝土未发生破坏。此外,还探讨了在高拉拔荷载作用下,锚塞体地表围岩蠕变变形的空间分布规律以及锚塞体地表围岩、深部围岩各部位的变形规律。研究成果可为类似的工程提供参考和借鉴。

SCID小鼠宣威肺癌原位模型的构建及生物学特性研究

背景与目的宣威女性肺癌发病率居全国首位,亟待深入探讨其发病机制。本研究拟建立SCID小鼠原位宣威肺癌模型,为该病的深入研究提供实验平台。方法将宣威肺癌细胞XWLC-05分别以高低剂量接种于SCID小鼠肺原位,并与皮下移植瘤比较,观察成瘤率、成瘤特性、自发性转移及生存情况。结果原位移植高低剂量组的成瘤率分别为81%和83%,其中高剂量组接种后13天小鼠出现恶液质、对侧肺及胸腔的广泛粘连,无远处转移;低剂量组接种后25天小鼠出现恶液质及远处转移。皮下移植高低剂量组成瘤率分别为100%及94.5%,无远处转移。原位移植组组内及皮下与原位移植组组间的转移率存在统计学差异(P<0.05)。两组组内和组间的生存率比较有统计学差异(P<0.001)。结论成功建立了宣威肺癌的SCID小鼠原位动物模型,为该病的深入研究奠定了实验基础。

MG-63骨肉瘤原位模型的建立

目的建立裸鼠股骨骨肉瘤原位模型。方法体内连续传代筛选MG-63细胞系获得高成瘤率的细胞,MG-63细胞悬液或MG-63细胞皮下成瘤瘤组织块接种于裸鼠股骨下端。观察MG-63细胞在股骨骨肉瘤原位模型的成瘤特性,并比较两种成瘤方法的成瘤率,常规影像学检查以及肿瘤组织病理检查。结果两周内可见局部肿瘤形成。术后4周X线片可见股骨下段溶骨及成骨改变、肿瘤样骨形成。光镜下可见典型的骨肉瘤病理特征,成骨作用明显。细胞悬液法成瘤率70%,组织块法成瘤率100%,两种方法成瘤率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了裸鼠股骨下段原位肿瘤移植模型,为骨肉瘤的研究提供了更接近人体内环境的研究基础。

荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型的建立及VEGFsiRNA转染对肿瘤生长的影响

目的:建立模拟人的荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型,评价经VEGFsiRNA转染的人膀胱移行细胞癌T24细胞和未经转染的T24细胞在裸鼠膀胱内的成瘤状况。方法:采用细胞移植法分别将转染和未转染的T24细胞移植到裸鼠膀胱内后用核磁共振成像(MRI)定期检测,并在28d时处死动物称瘤重量,测定瘤体积,进行组织病理学和细胞学检查。结果:两组裸鼠膀胱内的总成瘤率为90%(36/40),转染组瘤细胞生长速度明显缓于未转染组。转染组和未转染组的重量和体积分别为:(1.1±0.3)g,(1.6±0.5)g;(805±172)mm3和(1389±294)mm3,两组比较差异具有显著性(P<0.05)。组织病理学和细胞学检查结果表明,转染组T24细胞恶性程度降低,浸润转移能力减弱,未转染组T24细胞恶性程度未发生改变,表现出极强的浸润转移倾向。结论:模拟人的荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型更接近人体膀胱肿瘤的向膀胱腔内生长过程,荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型可用于研究开发新型膀胱内抗肿瘤生物免疫制剂和抗癌化疗药物临床前期评价。

建立小鼠膀胱肿瘤原位模型的优化方法

目的探讨硝酸银、盐酸、胰酶和乙醇预处理构建鼠膀胱肿瘤的成瘤机制。方法 24G静脉留置针插入膀胱,PBS冲洗后,将小鼠随机分为5组,每组6只:(1)乙醇作用组:22%乙醇0.1 mL保留20 min;(2)胰酶作用组:0.2%胰酶保留30 min;(3)酸碱作用组:0.1 mmol/L HCl 0.1 mL作用15 s后,PBS冲洗,0.1 mmol/L NaOH0.1 mL作用5 s,排空膀胱;(4)硝酸银作用组:0.15 mol/L硝酸银保留10 s;(5)对照组:0.1 mL生理盐水。术后1和24h随机处死每组3只小鼠,摘取膀胱,HE染色观察膀胱黏膜病理变化;戊二醛固定,电镜下观察膀胱黏膜细胞微结构变化;甲苯胺蓝染色,观察膀胱黏膜固有层肥大细胞数目变化;过碘酸-希夫(PAS)染色,观察膀胱黏膜GAG层变化。40只小鼠应用上述前四组预处理因素处理膀胱后,建立膀胱癌原位模型,计算各组成瘤率。结果胰酶和乙醇处理1h后,局部上皮伞状细胞脱落,黏膜下层暴露;酸碱和硝酸银处理组大部黏膜完整性破坏,黏膜下层暴露较多,连续性中断;对照组和实验组间炎症细胞浸润均不表现出统计学差异。24 h后,胰酶和乙醇组可见局部轻度水肿并充血,黏膜完整性恢复较好,细胞间见紧密连接;而酸碱和硝酸银组上皮黏膜薄厚不均一,仍可见部分脱落黏膜。结论利用硝酸银和酸碱预处理膀胱可作为鼠膀胱肿瘤原位模型构建的首选方法。

鼠膀胱癌原位模型建立的研究进展

膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤。在世界范围内，膀胱癌发病率居恶性肿瘤第九位。膀胱癌动物模型能够较好地再现人膀胱癌疾病，是研究人类膀胱肿瘤的病因、病理、进展及筛选药物、评价治疗效果等的有效手段，具有非常重要的意义。理想的原位膀胱癌动物模型应具有以下特点：

H22昆明鼠肝癌原位模型的建立

目的:建立H22昆明鼠肝癌原位模型,探讨其基础和临床应用价值,为肝细胞癌的实验研究打下基础。方法:严格无菌及无瘤技术条件下开腹为100只雄性昆明鼠采用肝癌H22细胞株肝脏接种,建立小鼠肝癌原位模型。结果:100只昆明鼠中有95只造模成功,22只小鼠出现肝癌右叶转移。结论:H22昆明鼠肝癌原位模型成功率高,成本低,值得推广,是非常理想的研究肝癌的实验动物模型。

小鼠肺癌原位模型的建立

目的肺癌的发病率和病死率居高不下,而目前用于实验研究的肺癌动物模型存在较大的局限性,故本研究认为建立一个稳定、类似于人体肿瘤微环境的肺癌原位模型是深入研究肺癌的基础。方法直接将稳定表达虫萤光素酶的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶的混悬液注射于C57 BL/6小鼠左肺,无需打开胸腔只需将小鼠左胸部皮肤剪开约1 cm小口,定期利用小动物活体成像系统中的生物发光技术监测小鼠肿瘤形成及转移情况,并将小鼠处死后立即进行肺部组织活体取材,采用石蜡包埋、切片、HE染色做出病理学诊断。结果采用肺内注射的原位造模法成瘤率高,Lewis肺腺癌细胞数量只需0.5×105个即可成瘤,成功率达90%以上,且利用活体成像系统中的生物发光技术能监测到模型小鼠肿瘤可转移至对侧胸廓、对侧肺组织、双侧腋下及腹股沟淋巴结等。结论注射虫萤光素酶稳定表达的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶混悬液构建的肺癌原位模型所需细胞数量少,成瘤率高,无手术死亡风险,转移性好,监测方便,操作简单且可重复性高,为深入研究肺癌提供了良好模型。

人胃癌双标细胞系及鼠原位模型的高效构建

目的建立一种高效胃癌原位模型。方法采用慢病毒感染方法构建稳定表达荧光素酶及GFP的双标细胞系SGC-7901/FLUC/GFP。将细胞悬液注射入造模小鼠胃浆膜下层,建模后第3天通过生物发光成像观测建模情况。2周后处死小鼠,通过HE及冰冻切片观察移植瘤形态。结果 SGC-7901/FLUC/GFP双标细胞系构建成功,该稳定转染细胞系高表达荧光素酶及GFP,细胞数目与荧光及生物发光信号呈线性正相关(R2=0.9667,r2=0.9110),可用于肿瘤在体观测。手术后第3天通过生物发光实验证实模型构建成功,肿瘤位于胃区生长。2周后通过HE及冰冻切片可见异型肿瘤细胞生长,符合胃癌组织学特征。结论成功建立了简便、安全、高效的大规模胃癌原位模型,该方法便于普及,可为胃癌研究提供宝贵的研究平台和实验工具。

食管癌原位模型的建立

目的建立食管癌原位模型。方法将人食管癌原代肿瘤组织缝合于裸鼠食管表面,以完成食管癌原位模型的建立,并以该模型考察紫杉醇对食管癌的治疗情况。结果食管癌原位模型成功建立,成瘤率100%。紫杉醇的抑瘤率达73%。结论该模型可以良好模拟食管癌患者的进食困难等主要临床症状;紫杉醇对该模型具有显著抑制肿瘤生长作用。

荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型的建立

目的通过细胞移植法建立模拟人的膀胱原位癌荷瘤裸鼠模型,为临床膀胱癌的防治提供新的思路。方法将人膀胱移行细胞癌株T24原位移植到裸鼠膀胱内后定期用磁共振成像(MRI)检测,并进行解剖,组织病理学和免疫细胞学检查。结果裸鼠膀胱内的癌发生率为94.0%(47/50),组织病理学检查:Ⅰ级23例,Ⅱ级15例,Ⅲ级9例,免疫细胞学证实该模型具有人膀胱移行细胞癌株T24的特性。结论模拟人的荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型符合临床上膀胱肿瘤向膀胱内生长的过程,具有很强的实用性。

人胰腺癌原位模型移植技术的改进

目的改进人胰腺癌原位模型的移植技术。方法采用粘合法替代传统的缝合法，建立人胰腺癌原位模型，并进行了药效学验证。结果改进方法接种的肿瘤呈扩张性生长，浸润至周边组织，接种5周后肠系膜、胃、肾脏和卵巢等发生转移，药效学验证实验表明吉西他滨对该模型肿瘤的生长具有较强的抑制作用。结论改进的粘合法移植技术可以建立人胰腺癌原位模型。

裸鼠肺癌原位模型的建立及螺旋CT、近红外荧光成像评价

目的 利用A549细胞系建立原位肺癌的动物模型,并采用螺旋CT扫描和近红外荧光成像评价胸内肿物生长情况。方法 将A549细胞悬液（5×106 ml-1）接种于20只裸鼠胸腔内,分别于接种后第7天、14天、21天,连续3周对荷瘤裸鼠行螺旋CT检查,动态观察胸内肿瘤生长情况,主要观察裸鼠的生存时间、体重变化及胸腔内肿瘤浸润和转移情况,并对裸鼠进行解剖后行近红外荧光成像和病理切片检查。结果 本次A549细胞的造模成功率为90%,中位生存期为30.7（20~41）天。荷瘤裸鼠胸内肿瘤转移发生率100%。经螺旋CT扫描肿瘤显示率100%,CT上测得平均肿瘤直径随时间逐步递增,而近红外荧光成像对胸腔内肿瘤显示率为零。结论 A549细胞接种于裸鼠肺部所建立的肺癌原位模型简单,成功率高;采用螺旋CT扫描能动态直观评价裸鼠胸内肿物生长情况,近红外荧光成像对胸腔内肿瘤显示能力有限。

适用于微创消融治疗研究的小鼠胰腺癌原位模型建立方法及比较

目的探究应用肿瘤细胞原位注射和肿瘤组织块移植法建立小鼠胰腺癌原位模型的优缺点,为以精准消融治疗研究为目的的小鼠胰腺癌原位模型的建立提供技术参考。方法取20只6~8周龄的健康雄性C57BL/6小鼠,分为4组,每组5只:A组采用小鼠胰腺癌Panc02细胞悬液直接注射法;B组采用含基质胶的小鼠胰腺癌Panc02细胞悬液注射法;C组采用小鼠胰腺癌组织块移植法;D组采用小鼠肿瘤组织块水凝胶粘接法。术后观察各组小鼠胰腺癌的成瘤率、肿瘤大小、腹腔脏器粘连程度和肿瘤转移情况,分别采用HE染色法和免疫组织化学法检测肿瘤组织形态学变化以及Ki67和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达差异。结果A、B、C、D四组小鼠胰腺癌成瘤率分别为60%、80%、100%和100%。建模16 d后,A组小鼠肿瘤体积为(47.80±42.99)mm^(3),均质性差;B、C与D组小鼠肿瘤体积分别为(68.43±16.77)mm^(3)、(105.86±17.25)mm^(3)和(128.98±13.41)mm^(3),比A组明显增大(P<0.01),且均质性较好。A组小鼠腹腔重度粘连率为100%,B组重度粘连率为80%,C组与D组均未出现重度腹腔粘连。A组小鼠肿瘤转移率为100%,B组转移率为60%,C组与D组小鼠均未发现肿瘤转移。4组小鼠的肿瘤在组织学上无明显差异,且肿瘤组织中Ki67和α-SMA蛋白的相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用肿瘤组织块移植法及水凝胶粘接法建立小鼠胰腺癌原位模型的成瘤率高,转移少,腹腔粘连轻,且未改变肿瘤细胞的生物学特性,易于操作和普及,造模效果更好。

南溪长江大桥隧道锚原位模型试验及参数反演分析

针对南溪长江大桥南岸隧道锚围岩类别为Ⅳ类和Ⅴ类,其承载力和稳定性相对较低的特点,为了解锚塞体与不同地质条件的围岩相互作用的变形情况,开展了缩尺比例为1/30和1/20的锚塞体原位模型试验。试验成果表明,1/30锚塞体模型试验最高应力达到14.24 MPa,为设计应力的28倍,1/20锚塞体模型试验最高应力达到8.68 MPa,为设计应力的17倍。加载过程中两个模型的位移应力曲线基本保持线性,但卸载后残余变形较大。通过有限元方法对试验过程进行了反演,得到的岩体力学参数与试验结果接近,变形规律基本一致。

VX2兔肝癌原位模型与肝动脉介入放射性栓塞微球方法的建立及辐射防护策略

探讨建立VX2兔肝癌原位模型与肝动脉介入放射性栓塞微球方法,并进一步探讨涉及的关键操作事项。结果表明:(1)开腹植入兔VX2瘤块时应选取质嫩灰白色鱼肉样组织,可以提高成瘤率;(2)介入操作和放射性微球给药时,应采取屏蔽防护、时间防护、距离防护相结合的方式,降低人员受照剂量;(3)预先进行无放射性的试验模拟,提高实验人员熟练度,并分解各岗位操作成为流水线操作,可降低实验人员受照剂量。

金龙胶囊及其多糖、蛋白组分对人类脑胶质瘤小鼠原位模型的干预作用

目的复方中药金龙胶囊(JLC)提取物及其制备的粗多糖、粗蛋白的抗脑肿瘤效果及安全性评价。方法运用外科原位接种(surgical orthotopic implantation)技术,将肿瘤块种植到裸小鼠颅内,建立小鼠原位模型。用FluorVivo Model 100荧光成像仪对所有小鼠的脑肿瘤进行非侵袭性的实时成像观察。通过对空白对照组(无肿瘤且溶剂为溶媒)、阴性对照组(溶媒)、阳性对照组(替莫唑胺32 mg/kg)、JLC提取物低(750 mg/kg)、中(1200 mg/kg)、高剂量组(1500 mg/kg)及粗多糖(100 mg/kg)、粗蛋白组(100 mg/kg)的肿瘤抑制率进行比较,评价经灌胃给予金龙胶囊提取物对小鼠原位模型肿瘤生长的影响。结果给药25 d后,JLC低、中剂量组肿瘤抑制率均为34.63%,与阴性对照组相比差异无显著性;粗多糖组和粗蛋白组肿瘤抑制率分别为22.26%、29.01%,肿瘤重量分别为(0.178±0.048)g、(0.144±0.047)g,与阴性对照组相比差异无显著性;阳性对照组和高剂量组,抑制率分别为99.57%、61.90%,肿瘤重量分别为(0.001±0.001)g、(0.088±0.045)g,差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论本文研究结果表明,JLC粗多糖及粗蛋白有一定的脑胶质瘤抑制作用。肿瘤负荷和药物治疗可能为影响小鼠体重正常增长的因素;在现有剂量下,未发现明显的急性毒性反应(P>0.05)。

支架置入治疗小鼠原位结直肠癌模型所致结肠狭窄的实验研究

目的:探索小鼠原位结直肠癌(colorectal cancer,CRC)模型中结肠支架置入的方法与价值。方法:6~8周龄BALB/c雌性裸鼠20只,接受内窥镜引导下小鼠结肠黏膜下人结肠癌HCT-116细胞注射。结肠肿瘤形成后,选取肿瘤大小达到4级的15只小鼠作为实验模型,进行支架放置,观察支架置入后小鼠结肠肿瘤及肠腔变化。结果:利用小动物内窥镜行结肠黏膜注射肿瘤细胞建立小鼠结肠癌模型的技术成功率为100%,结肠腔内肿瘤形成率为95%。肿瘤大小达到4级需要12~16天(中位时间14天)。所有小鼠的支架置入技术成功率为100%。支架置入后结肠肠腔内肿瘤受压肠腔通畅,肿瘤呈现为1级,一周后肿瘤快速增殖沿支架网眼向肠腔内生长,导致肠腔再次狭窄。结论:通过小鼠原位CRC模型的支架置入可以完美地模拟人类CRC梗阻支架置入后再狭窄的过程,为研究肿瘤支架置入后肠腔再狭窄的机制奠定了基础。

新型肺靶向多西他赛脂质体在原位肺癌模型兔中的药动学研究

目的 研究新型肺靶向多西他赛脂质体(DTX-LP)在原位肺癌模型兔中的药动学行为。方法 采用超高效液相色谱-二级串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定DTX在兔血浆中的含量,并进行方法学考察。采用胸腔微创穿刺术制备原位肺癌模型兔,然后随机分为多西他赛注射液(DTX-IN)组和DTX-LP组,耳缘静脉注射给予相应药物,给药剂量均为1.0 mg/kg(以DTX计),然后于5、15、30、60、90、120、240、480 min时取血,测定血浆中DTX浓度。采用DAS 3.3软件进行拟合与分析,并计算药动学参数。结果本研究所用UPLC-MS/MS法的准确度、精密度良好,符合生物样品分析要求。与DTX-IN组比较,DTX-LP组的药-时曲线趋势较平缓,各时间点的血药浓度更低,c_(max)、t_(1/2)、AUC_(0→480 min)、AUC_(0→∞)均显著降低(P<0.05)。结论 DTX-LP在血浆中的暴露量较DTX-IN降低,提示其能快速地从体循环中分布到肺靶器官。

苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。