大鼠原位灌注模型研究靛玉红吸收机制

目的研究靛玉红在大鼠肠道的吸收动力学特征,并考察不同药物浓度和增溶方法对其吸收速率的影响。方法选用适当增溶剂提高靛玉红的溶解度,进行大鼠原位肠灌注实验。结果靛玉红吸收较差,在4～16mg.L-1内靛玉红的Ka值基本保持不变。各部位吸收速率依次为十二指肠≈回肠>结肠>空肠。尽管是否结扎胆管对吸收参数影响不大,但未结扎胆管时,小肠全肠段和十二指循环液的剩余药量-时间曲线波动较大,结扎胆管后波动明显减弱。结论在实验剂量范围内,靛玉红在大鼠肠道内的吸收呈现一级吸收动力学特征,其吸收机制为被动扩散,并可能存在肠肝循环。

大鼠胰腺原位灌注实验模型的建立及可行性研究

目的建立大鼠胰腺原位灌注实验模型,并对其用于胰岛β细胞功能研究的可行性进行验证。方法将10只健康SD大鼠随机分为观察组和对照组各5只,均用戊巴比妥钠行腹腔注射麻醉,按文献将胰腺与脾、胃和结肠等组织器官分离后建立原位灌注实验模型,观察组分别以低糖灌注液灌注10 min、依拉地平—高糖灌注液灌注25 min,对照组分别以低糖灌注液灌注10 min、高糖灌注液灌注25 min;用4℃预冷并加有20μl抑肽酶的eppen-dorf管收集两组门静脉插管的流出液,用放射免疫分析法检测胰岛素水平,计算胰岛素分泌率、基础胰岛素分泌率、葡萄糖刺激的胰岛素分泌率。结果①两组基础胰岛素分泌率无显著差异,均呈现低水平状态。②对照组在第1时相胰岛素分泌水平迅速升高,分泌高峰出现在第12分钟,随后迅速下降,并在一个较高水平稳定波动(即第2时相);观察组胰岛素分泌峰值及胰岛素第1、2时相分泌率均显著低于对照组(P均<0.01)。结论胰腺原位灌注模型较体外灌注模型更易于操作,且同样具备可定量、可重复、可动态观察等优点;此为胰岛β细胞功能的研究提供了一种有效实用的方法。

原位灌注模型考察蓬子菜活性成分的肠吸收

为考察影响蓬子菜中活性成分肠吸收的因素.采用大鼠原位灌注模型及HPLC测定方法,以活性成分DXG的肠吸收转化率(A%)、吸收速率常数(ka)、吸收半衰期(t1/2)为评价指标,考察吸收部位与pH值对DXG肠吸收的影响.结果表明ka从大到小为十二指肠>回肠>结肠>空肠;(A%)从大到小为十二指肠>回肠>结肠>空肠.循环液pH=6.0时DXG的ka和A%明显大于pH=4.0和pH=8.0.DXG在十二指肠吸收较好,pH值对肠吸收影响较小,DXG在大鼠肠道内的吸收并非单纯被动扩散.

供肝原位灌注、快速切取及修整技术在临床肝移植中的应用

目的 探讨具有临床应用价值的供肝快速切取及修整方法。方法 在 4例猪动物实验基础上 ,共进行 9例人原位灌注供肝快速切取。结果 成功获取可以利用的 9个肝脏 ,修整后行临床肝移植 9例。供肝热缺血时间平均为 4min ,冷缺血时间平均为 10h。 9例肝移植通血后 10min内有金黄色胆汁流出 ,肝移植术后短期无严重并发症发生。结论 原位灌注供肝快速切取的方法 ,可充分利用供体器官 ,缩短热缺血时间 ,提高移植器官的保存质量及功能。

原位灌注制作大唾液腺管道铸型标本

大唾液腺包括有，腮腺，下颌下腺和舌下腺。有作者离体插管灌注，成功制作唾液腺管道铸型。但改变了它们原位置和形外态。为了配合临床对唾液腺手术的课题研究。除显示唾液腺管道的构筑情况外，对腺体的位置和形态要求更高。为此我们对原有的技术方法进行了改进。制作的标本管道清晰完整，腺小叶分界明显达（图1～2）。为临床手术研究提供了形态学依据。现将具体操作方法介绍如下。

小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立

目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9月龄H-ras12V转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。

小型猪简易原位灌注自体肝移植模型的建立

经典肝移植大动物模型建立手术难度大，不易掌握，且术后存在吻合口并发症以及排斥反应的风险，影响模型的成功率及术后长期观察。针对上述问题，我们应用小型猪设计了简易自体肝移植模型，收到了良好的效果。

青黛配方分散片对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及大鼠原位灌注试验

目的:从药效和药物吸收两方面比较两种剂型的青黛,为将青黛开发成分散片形式的新型配方颗粒提供试验依据。方法:采用相同剂量青黛饮片和配方分散片药液进行预防给药,以腹腔注射四氯化碳建立小鼠急性肝损伤模型,检测各组动物血清中ALT和AST;建立大鼠原位灌注模型,灌注相同剂量药液,2h后检测大鼠胃和十二指肠中灌注液靛蓝、靛玉红浓度。结果:同等剂量下,两种剂型的青黛均能显著降低四氯化碳所致小鼠急性肝脏损伤模型动物ALT、AST,减轻病理性损伤,其中分散片剂型效果更佳。同时,青黛配方分散片在胃和十二指肠中的吸收率均高于原饮片。结论:青黛配方分散片使药物有效成分在水中溶出度大幅度增加,有利于其在体内的吸收,从而增强药物疗效。

腹腔镜下原位低温灌注技术在肾肿瘤部分切除术中的运用

目的探讨腹腔镜下原位低温灌注技术在肾肿瘤部分切除术中的运用,评估可行性及安全性。方法行腹腔镜肾肿瘤部分切术的患者26例,将26例患者随机分为实验组和对照组,每组各13例。实验组采用自制灌注设备,将两根管道从Trocar旁间隙导入体内,穿刺肾动脉进行灌注,将静脉回流液导出体外。对照组按照常规手术方式进行手术。比较两组患者平均手术时间、出血量、灌注时间和术前肌酐。结果 26例患者手术均获成功,实验组体重指数(BMI)为(24.5±3.1)kg/m^2,Radius Exophytic Nearness Anterior Location评分(RENAL)为(3.1±1.1)分,肿瘤直径(3.1±1.1)cm,平均手术时间(15.8±4.1)分钟,出血量(58±8)ml,灌注时间平均5.4秒,术前肌酐(58±11)mmol/L;对照组BMI为(26.0±2.4))kg/m2,RENAL评分(3.3±0.7)分,肿瘤直径(3.2±0.9)cm,平均手术时间(16.5±7.5)分钟,出血量(46±9)ml。两组病例肿瘤大小、手术时间及出血量比较,差异无统计学意义。实验组与对照组术后1周、1个月、3个月肌酐比较,差异有统计学意义(P<0.05),实验组所有病例术后早期肾功能评价优于对照组。所有肿瘤切缘均为阴性。结论采用腹腔镜下原位低温灌注技术,可以将肾脏热缺血变为肾脏冷缺血,为延长手术时间提供保障,同时能够更好的保护肾脏功能。

用原位结扎肠段灌注法研究有机锰在肉仔鸡小肠中的吸收特点

用原位结扎肠段灌注法研究肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠对有机锰和无机锰的吸收特点的差异。结果表明,在肉仔鸡原位结扎灌注肠段中,回肠是肉仔鸡小肠吸收锰的主要部位;螯合的有机锰在肉仔鸡小肠中的吸收率明显高于无机形态的锰;作为配体而言,蛋氨酸比甘氨酸更有利于促进锰的吸收。

原位胶原酶循环灌注法分离猪肝细胞

本文建立了原位胶原酶循环灌注分离猪肝细胞方法并与离体两步胶原酶灌注法进行了比较。猪门静脉和下腔静脉分剐插管,先用D-Hanks液灌注,再采用自制的循环灌流装置进行胶原酶循环原位灌注分离猪肝细胞,分离后的肝细胞以5×105/ml培养,观察分离和培养7d的肝细胞产量、活率、蛋白质合成功能、葡萄糖合成功能和LDH含量。同时测定离体组的上述指标。研究结果表明采用原位胶原酶循环灌注法每克肝组织分离获得的肝细胞总量为5.1×107,肝细胞活率98.6％,培养7d肝细胞活率89.5％。肝细胞的蛋白质合成功能在培养7d中保持稳定;葡萄糖合成功能从1d时1.05±0.15nmol/cell下降到3d时0.74±0.09nmol/cell;LDH含量在3d较高。原位胶原酶循环灌注法分离的猪肝细胞总量、活率高于离体法;蛋白质合成功能和葡萄糖合成功能强于离体法。因此,原位胶原酶循环灌注分离猪肝细胞方法可获得大量高活率和良好功能的猪肝细胞。

HPLC法测定原位肝脏隔离灌注猪血浆中丝裂霉素的浓度

目的 建立一种简单、快捷的反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定猪血浆中丝裂霉素C(MMC)浓度的方法。方法 用LC 6AHPLC仪 ,以 μBondapakC18column(5 μm ,3 9× 30 0mm)为分析柱 ;流动相为CH3 CN :H2 O(30∶70 ) ,柱温 2 5℃ ,检测波长36 5nm ,流速 0 5ml·min-1;血浆样品用乙酸乙酯分两次直接萃取。结果 线性范围为 0 1～ 8 0mg·L-1,r =0 9998,n =5 ;提取回收率为 (79 71± 2 97) % ;日内、日间变异均小于 10 % ;最低检测浓度为 0 0 5mg·L-1。结论 该法简便、快速、可靠、特异性强 ,适用于生物样品中MMC监测及药代动力学研究。

改良原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞

目的:建立改良原位胶原酶循环肝灌注猪肝细胞分离方法方法:猪门静脉插管,分别用D-Hanks液和胶原酶循环原位肝灌注分离猪肝细胞,分离后的肝细胞以5×108/L-1培养,观察分离和培养7d的肝细胞产量、活率和蛋白质、葡萄糖合成功能、G-6Pase活性、安定转化功能和LDH漏出量.结果:分离获得的肝细胞总量为5.2×107/g肝组织,肝细胞活率98.7%,培养7Dk保持稳定.安定转化功能在培养3d最强(安定浓度3d时为68±6pgcell-1);葡萄糖合成功能从1d时1.05±0.15nmolcell-1下降到3d时0.74±009nmolcell-1G-6-Pase活性从0d时1871±282zmolcell1下降到1d时1218±218zmolcell-1,然后维持在较低水平;LDH漏出量在3d较高.结论:改良原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞.

丹参对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致细胞免疫抑制和肝脏损害的防护作用(摘要)

目的:观察丹对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致细胞免疫抑制和肝脏损害的防护作用。方法:用大剂量5-氟脲嘧啶原位肝脏隔离灌注技术行犬区域性化疗,观察静脉全身给药组、原位肝脏隔离灌注对照组、原位肝脏隔离区域性化疗组及丹参组等不同组别对犬外周血细胞免疫的影响、肝细胞损害及丹参的保护作用。

原代鸭肝细胞的原位灌流分离法

目的：探索优化的原代鸭肝细胞分离方法，为鸭肝细胞在体外研究中的应用奠定基础。方法：分别采用胶原酶（Ⅰ型与Ⅳ型）经门静脉或胆总管原位灌流分离鸭肝细胞，观测肝细胞产量、存活率及其形态。结果：１．经门静脉原位灌流分离鸭肝细胞效果明显优于经胆总管灌流法；２．以右心室为灌流液流出道分离鸭肝细胞效果明显优于经下腔静脉流出道分离法：３．Ⅰ型胶原魂与Ⅳ型胶原酶灌流分离鸭肝细胞效果相当。结论：采用Ⅰ型或Ⅳ型胶原酶经门静脉－右心室原位灌流分离鸭肝细胞为一较好的方法，有利于鸭肝细胞为模型的体外研究工作的开展。

大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞的同步分离与培养

目的探索和建立同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞,并进一步鉴定和培养的方法。方法联合应用原位灌注、离体灌注、梯度密度离心和差速贴壁等分离方法,获取4种大鼠肝内原代细胞,采用形态学观察、免疫荧光染色和墨汁吞噬实验等方法对所分离的各种原代细胞进行纯度鉴定。结果通过原位灌注结合离体灌注、密度梯度离心结合差速贴壁等分离手段,成功实现了大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞的同步分离,且所得原代细胞得率、活力及纯度等指标均符合后续细胞实验要求。结论通过简易方法同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞是可行的。

大鼠原代肝细胞与枯否细胞同步分离的优化研究

目的优化分离培养高纯度的大鼠肝细胞与枯否细胞,为肝细胞与枯否细胞的共同培养提供实验细胞。方法 1原位胶原酶灌注法分离细胞;2 Percoll液不连续密度梯度离心法分离枯否细胞;3选择性贴壁纯化枯否细胞;4台盼蓝拒染法判定细胞活力,PAS染色法鉴定肝细胞,墨汁吞噬及CD68免疫染色法鉴定枯否细胞。结果通过改良的原位胶原酶灌注法,不连续密度梯度离心法以及选择性贴壁法等手段,成功实现了肝细胞与枯否细胞的同时分离,且所分离出的2种细胞的得率与纯度均达到后续实验所需细胞的要求。结论通过该创新方法同时分离肝细胞与枯否细胞是有效可行的。