原位组织工程技术修复骨与软骨损伤:应用及存在的问题

背景:原位组织工程技术较传统的组织工程技术有明显的优势,在促进组织再生和骨、软骨修复方面具有较好的效果。目的:综述原位组织工程技术在骨与软骨修复中的应用及存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中发表的相关文献,中文检索词为"原位组织工程技术,骨,软骨,骨缺损,软骨修复,组织工程",英文检索词为"in situ tissue engineering,bone,cartilage,bonedefects,cartilagerepair,tissueengineering",选择2000年1月至2018年11月收录的原位组织工程技术在骨和软骨损伤修复中应用的相关文章,包括综述、基础及临床研究。结果与结论:原位组织工程技术是在传统组织工程技术基础上发展起来的一种用于再生和修复的技术,应用于骨损伤修复取得了良好的成绩,其不依赖外源种子细胞,通过各种新型支架材料并利用其自身特有的结构和理化性质,募集受损部位周边的干细胞迁徙到损伤部位,完成骨损伤的原位修复。原位组织工程技术为软骨损伤修复提供了新的思路和方向,在软骨损伤修复中具有全新应用价值,其主要是利用植入的支架材料来诱导局部微环境,诱导周边细胞迁移到病损部位而发挥修复作用。

植物基因表达的组织原位杂交和原位组织化学分析技术的改进

改良了组织原位杂交和原位酶组织化学分析的方法。主要改进有：原位杂交采用简化的ＦＡＡ固定程序，常规石蜡包埋，切片时采取液氮深冷冻；以随机引物法标记的ＤＮＡ代替转录标记的ＲＮＡ作探针，在保湿盒中进行杂交，而不用矿物油覆盖。组织化学分析中用含铁氰化钾的显色液进行ＧＵＳ染色后再包埋、切片的程序，代替先包埋、切片再显色的常规方法，可最大限度地保持酶活性的真实性。

金属基复合材料基体中原位组织与性能研究

系统研究了颗粒和短纤维增强铝基复合材料中基体的原位组织与性能。发现邻近增强体的基体中，位错密度显著高于其它部位，时效析出相的弥散度也较高。近界面区基体的显微硬度值比其它部位高得多。用热膨胀系数差（ＤＣＴＥ）和位错镜像力理论对以上结果进行了讨论。

原位组织工程技术修复骨与软骨损伤的应用进展

随着生活节奏加快及社会老龄化的加重,骨与软骨损伤疾病的发病率不断上升。传统的治疗骨与软骨损伤的方法存在治疗时限长、效果差、费用高的缺点。为更好地治疗该病,学者们提出原位组织工程技术的概念。通过良好的支架材料和自身微环境的调节,在细胞因子的引导下,向损伤部位募集自体种子细胞(干细胞/祖细胞)来对损伤的骨与软骨进行修复,不再需要传统组织工程技术所需的外源性种子细胞,避免了外源性种子细胞体外长时间繁殖、植入体内可能产生的免疫排斥等缺点,大大缩短了治疗时间、降低治疗失败率,在治疗骨与软骨损伤方面取得了显著的效果。通过查阅文献,本文总结介绍原位组织工程技术在治疗骨与软骨损伤方面的原理及临床疗效,以供参考。

趋化因子在原位组织工程技术中的应用

趋化因子通过与其受体结合，募集血液循环中或局部组织中表达其相应受体的成体干细胞／前体细胞使其迁移到受损部位并调节细胞的增生和分化，从而促进组织再生。趋化因子在原位组织工程技术中的良好前景使得相关研究不断增多。本文对原位组织工程的研究现状、趋化因子在原位组织工程技术中的作用及其应用现状与前景进行了综述和分析。

原位组织工程技术在骨与软骨修复领域的应用进展

目的总结原位组织工程技术在骨与软骨缺损修复领域的应用以及研究进展。方法查阅国内外近年来有关原位组织工程技术在骨与软骨缺损修复方面的相关文献,并进行综合分析。结果原位组织工程技术在骨与软骨缺损修复方面展现了一定的修复效果,但其生物学机制研究尚不足。目前研究主要以动物实验为主,临床修复效果有待进一步研究。结论随着原位组织工程技术的发展,运用该方法构建的修复材料具有广阔应用前景,但其相关细胞因子的生物学机制尚需进一步研究。

大网膜内植入自体脾组织与原位脾组织的结构比较

目的 :为临床应用自体脾组织植入术提供实验研究资料。方法 :大鼠分为实验组和对照组 ,前者切取 1 /2脾脏去包膜后切成 1mm× 1mm× 1mm大小均匀组织块 ,植入大网膜囊袋内。饲养 6个月后取 2组脾组织制片 ,光镜和电镜定性观察组织结构变化 ,计算机图像分析系统比较血管、红髓、白髓及胶原纤维的面密度 ;免疫组化法结合计算机图像分析测定神经肽 (NPY)阳性神经纤维密度。结果 :神经和边缘窦内皮细胞结构恢复较好 ,血管 ,白髓的面密度值较对照组减少 ,红髓与对照组相当 ,胶原纤维面密度增加。结论 :大网膜内植入的自体脾组织通过再生能恢复脾脏的主要组织结构 ,但不能完全恢复正常。

组织器官三维构建及原位组织工程概念——组织工程连载之四

组织器官三维构建就是把种子细胞和支架材料结合而获得设计的组织或器官,属于组织工程的核心内容,也最能体现组织工程的技术水平,如血管、气管的构建。由于传统组织工程存在缺陷,Shimizu于1998年首先提出了原位组织工程的概念,它是运用组织工程学基本原理,通过各种方法诱导移植的外源性的种子细胞或内源性的缺损组织局部细胞发生迁移、增殖、分化形成新生组织修复缺损。原位组织工程最大的特点是不依赖体外的细胞培养装置——生物反应器。原位组织工程是传统离体组织工程的有益补充。离体组织工程仍具有广阔的发展前景。

智能化水凝胶在原位心肌组织工程的应用

原位心肌组织工程在近年取得了突飞猛进的发展,它是指利用生物材料携带细胞移植于心肌梗死及其周边部位防治心肌梗死后心力衰竭,为细胞治疗提供了基质,提高了细胞的存活率,现就生物材料可注射水凝胶在原位心肌组织工程的应用作一综述。

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。

原发性肝癌和癌旁组织中TTVDNA的原位杂交研究

目的:通过对肝癌组织、癌旁组织和肝炎组织中TTVDNA的分布情况分析,探讨TTV感染与原发性肝癌的发病关系。方法:选择符合全国诊断标准并感染乙型肝炎病毒的原发性肝癌病人的肝癌组织及癌旁组织和乙型肝炎肝组织切片各为87、87和39份。以地高辛标记物制备TTVDNA探针,原位杂交法检测组织切片中TTVDNA。结果:肝癌组织中浆型阳性率明显高于癌旁组织(P<0·05),但两者核型阳性率差异无统计学意义(P>0·05);肝炎组织中浆型和核型阳性率与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0·05,)。肝癌组织中浆型阳性率明显高于肝炎组织(P<0·01),相反,肝炎组织中核型阳性率明显高于肝癌组织(P<0·01);癌旁组织中浆型+核型阳性率与肝炎组织比较差异无统计学意义(P>0·05);肝癌组织和癌旁组织浆型+核型阳性率明显高于肝炎组织(P<0·01)。结论:有3种可能:①TTV感染与原发性肝癌发生存在一定关系,TTV感染肝细胞后在肝炎期主要分布于肝细胞核内,当肝细胞发生癌变后,TTV主要分布向肝细胞浆内转移;②浆型TTV感染可能与乙型肝炎病毒协同而易发生癌变;③TTV亦仅仅是乙型肝炎病毒的伴随病毒。

组织原位分析鼻咽癌细胞核DNA干系倍体及其异质性

组织原位分析鼻咽癌细胞核的DNA干系倍体及其异质性。收集42例鼻咽癌病例的归档蜡块,4μm、8μm连续组织学切片各一张。每个病例选取三个癌巢或肿瘤组织区域(共126个样本),使用TIGER细胞图像分析仪4μm组织切片测量鼻咽癌细胞核DNA的光密度等参数,8μm组织切片测量单个完整鼻咽癌细胞核的体积等参数,计算获得每个癌巢或肿瘤组织区域的以单个完整鼻咽癌细胞核的体积为单位的DNA含量(以体积积分光密度表述),以同一切片内正常鼻咽部上皮非基底细胞作为其内参照,计算其DNA干系倍体。结果显示:鼻咽癌细胞核的DNA干系倍体主要集中在1.76～3.00(DNA指数为0.88～1.50)之间,14个样本为DNA干系四倍体,仅2个样本为DNA干系亚二倍体;DNA干系倍体异质性率为66.67%。可得结论:(1)鼻咽癌DNA干系倍体主要在近二倍体与近四倍体之间;(2)鼻咽癌中存在DNA干系倍体异质性。

5-HT受体亚型mRNAs在大鼠背根神经节和三叉神经节的表达—原位杂交组织化学法研究

应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞 ;两种神经节内上述受体亚型 m RNAs阳性细胞的百分比不同。 5 -HT3 受体亚型 m RNA阳性细胞的百分比最高 ,分别为 3 0 .4% (背根节 )和 3 2 .8% (三叉神经节 )。约 17.2 %和 14 .6 %的背根节和三叉神经节细胞分别呈 5 -HT2 A受体 m RNA阳性 ;而 5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞在此二节中的百分比分别为 14 .9%、2 4.7%和 11.2 %、9.8%。各受体亚型 m RNA阳性细胞均以中、小型节细胞为主。在各神经节内均未观察到 5 -HT2 B、5 -HT2 C、5 -HT5 和 5 -HT6 受体 m RNA的表达。上述结果提示 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5

检测鼠痘组织原位杂交法的建立

目的 建立用组织原位杂交检测鼠痘的方法。方法 利用已知引物序列 ,以从感染鼠痘的陈旧组织中提取的病毒DNA做模板 ,在进行PCR扩增的同时用地高辛进行标记 ,将扩增的DNA片段作为探针用于组织原位杂交。结果 血清学检查确诊为鼠痘的标本中出现蓝紫色杂交阳性信号。阴性及特异性对照中未出现阳性信号。结论 组织原位杂交是一种适合基层病理检测单位的快速诊断方法。

EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。

人肝细胞癌DNA干系倍体异质性的组织原位分析

目的探讨人肝细胞癌DNA干系倍体异质性的临床意义。方法选取45例肝细胞癌患者的归档蜡块,分别制备4μm、10μm的连续组织学切片,利用细胞图像分析仪测量细胞核DNA干系倍体值及其形态学参数。在4μm切片上测量细胞核DNA的平均光密度,在10μm切片上测量单个完整细胞核的体积。经细胞图像分析仪计算获得以单个完整细胞核体积为单位的DNA总量,以同一切片内正常淋巴细胞作为内参照,计算其DNA干系倍体值和异质性率。统计学分析DNA干系倍体异质性率与组织学分级、瘤体大小、淋巴结转移以及AFP表达水平的关系。结果肝细胞癌DNA干系倍体异质性率与组织学分级、瘤体大小、AFP表达水平有关联,与淋巴结转移无关联。结论组织原位法分析肝癌DNA干系倍体异质性对肝细胞癌的诊断、恶性度判定及预测预后均具有重要的参考价值。

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinicreceptor,M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibularnucleus)的表达。方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究。结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达;原位杂交组织化学也证实了M3mRNA在前庭神经核中的表达。结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型,但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究。

原位杂交组织化学方法鉴定玉米根尖内源生长素对根冠特定基因正常表达的影响

系列浓度抗生长素(降固醇酸0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L)处理3-天龄玉米幼苗根尖(约1cm)1天,利用原位杂交组织化学方法鉴定根尖内源生长素对根冠特定基因(CloneC103)表达产生的影响。实验结果表明:正常情况下,CloneC103在4-天龄玉米幼苗初生根根尖中心根冠外周强烈表达;降固醇酸有效抑制CloneC103正常表达,随浓度增加其抑制作用加强,尤其是10μmol/L降固醇酸仅使CloneC103在初生根中心根冠最外层微弱表达。由此表明玉米根尖内源生长素影响根冠特定基因CloneC103的正常表达;CloneC103在根冠的表达位置推测该基因正常表达可能与中心根冠外周的平衡石有关。

人源性肿瘤组织原位异种移植模型的特征及研究策略

人源性肿瘤组织原位异种移植模型(PDOX模型)能够更好地保持原发肿瘤的基因特征,在组织学、转录组、多态性和拷贝数变异中具有高的保真度,保留了原发瘤的微血管、基质成分和相互作用,以及肿瘤转移的特点,从而更加准确地预测临床患者的疾病预后,可以筛选出最合适的个体化治疗方案,在临床转化应用研究中显示出良好的前景。但由于小鼠和人体微环境仍有差别,原位移植瘤的形态结构与原发瘤仍存在一定差别,且原位移植并不能确保肿瘤发生转移。因此,构建个体化PDOX模型就需要分析移植瘤的组织形态和相关基因的表达,建立异种移植模型的数据库,共享异种移植模型的信息与研究结果,促进PDOX模型的转化应用。本文总结了PDOX模型的主要特征,概述了其优势以及局限性,并对应用进行了展望。