植物基因表达的组织原位杂交和原位组织化学分析技术的改进

改良了组织原位杂交和原位酶组织化学分析的方法。主要改进有：原位杂交采用简化的ＦＡＡ固定程序，常规石蜡包埋，切片时采取液氮深冷冻；以随机引物法标记的ＤＮＡ代替转录标记的ＲＮＡ作探针，在保湿盒中进行杂交，而不用矿物油覆盖。组织化学分析中用含铁氰化钾的显色液进行ＧＵＳ染色后再包埋、切片的程序，代替先包埋、切片再显色的常规方法，可最大限度地保持酶活性的真实性。

5-HT受体亚型mRNAs在大鼠背根神经节和三叉神经节的表达—原位杂交组织化学法研究

应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞 ;两种神经节内上述受体亚型 m RNAs阳性细胞的百分比不同。 5 -HT3 受体亚型 m RNA阳性细胞的百分比最高 ,分别为 3 0 .4% (背根节 )和 3 2 .8% (三叉神经节 )。约 17.2 %和 14 .6 %的背根节和三叉神经节细胞分别呈 5 -HT2 A受体 m RNA阳性 ;而 5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞在此二节中的百分比分别为 14 .9%、2 4.7%和 11.2 %、9.8%。各受体亚型 m RNA阳性细胞均以中、小型节细胞为主。在各神经节内均未观察到 5 -HT2 B、5 -HT2 C、5 -HT5 和 5 -HT6 受体 m RNA的表达。上述结果提示 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。

EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。

原位杂交组织化学方法鉴定玉米根尖内源生长素对根冠特定基因正常表达的影响

系列浓度抗生长素(降固醇酸0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L)处理3-天龄玉米幼苗根尖(约1cm)1天,利用原位杂交组织化学方法鉴定根尖内源生长素对根冠特定基因(CloneC103)表达产生的影响。实验结果表明:正常情况下,CloneC103在4-天龄玉米幼苗初生根根尖中心根冠外周强烈表达;降固醇酸有效抑制CloneC103正常表达,随浓度增加其抑制作用加强,尤其是10μmol/L降固醇酸仅使CloneC103在初生根中心根冠最外层微弱表达。由此表明玉米根尖内源生长素影响根冠特定基因CloneC103的正常表达;CloneC103在根冠的表达位置推测该基因正常表达可能与中心根冠外周的平衡石有关。

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinicreceptor,M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibularnucleus)的表达。方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究。结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达;原位杂交组织化学也证实了M3mRNA在前庭神经核中的表达。结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型,但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究。

《中国组织化学与细胞化学杂志》征稿简约

《中国组织化学与细胞化学杂志》为双月刊,并全文入编《中国学术期刊（光盘版）》,理工A辑。为《中国期刊网》、《中国科学引文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国核心期刊（遴选）数据库》源期刊。美国《化学文摘（CA）》收录期刊。1.本刊主要登载组织化学与细胞化学、酶组织化学、免疫组织化学与细胞化学、病理与临床组织化学、超微结构细胞化学、放射自显影原位杂交组织化学、荧光组织化学、凝集素、图像分析。

实验性早期心肌缺血c-fos-mRNA原位杂交研究

用原位杂交和图像分析技术 ,观察大鼠实验性急性心肌缺血模型心肌细胞c fos mRNA的表达情况。结果显示 :正常心肌细胞表达少量c fos mRNA ;急性心肌缺血 15min ,心肌细胞表达c fos mRNA的阳性反应增强 ,心肌缺血后 30min ,c fos mRNA阳性反应达到最高峰 ,以后逐步下降。表明 :c fos mRNA的原位杂交检测可为一项灵敏的急性心肌缺血的死后诊断指标。

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布—免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。

钙结合蛋白S100A13在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:探索钙结合蛋白S100A13(S100 calcium binding protein A13,S100A13)在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法:收集广西医科大学第一附属医院34例HCC及相应癌旁组织、18例正常肝组织标本,商业购置197例肝癌及相应癌旁高密度组织芯片。应用原位RT-PCR技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13 mRNA的表达,使用免疫组织化学技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13蛋白的表达,并用Image-ProPlus软件分析免疫组织化学光密度值。结果:S100A13 mRNA在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为70.21%、51.06%和33.33%;S100A13 mRNA定位主要在胞核,多表达于核膜。S100A13蛋白在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为55.84%、38.96%及26.32%,HCC组织中的平均D值最高(0.038±0.051),其次是癌旁组织(0.022±0.034),正常肝组织(0.01±0.009)最低(P<0.05);S100A13蛋白主要表达于HCC细胞的胞质中,部分细胞核偶见表达,此外在癌旁次生胆小管中及部分炎细胞中也存在高表达。S100A13蛋白在HCC中的表达与患者的性别、年龄及病理分级无关。结论:HCC组织高表达S100A13蛋白,S100A13可能具有作为肝癌治疗靶点的潜力。

用原位杂交法显示大脑皮质内的生长抑素mRNA

用原位杂交组织化学法对大脑皮质内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＮＡ）的分布进行了研究。发现ＳＯＭｍＲＮＡ广泛分布于大脑皮质各层中的神经元胞体及近端树突内，尤以Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ层为主，ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元可分为浓染及淡染两种类型。结果表明ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元在大胞皮质的广泛分布可能在其复杂的功能活动中起神经调制物的作用。

脑红蛋白mRNA在大鼠脑内的定位

目的 了解脑红蛋白 (NGB)mRNA在大鼠脑内的定位。 方法 用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术观察了NGBmRNA在成年大鼠脑中的正常分布。 结果 NGBmRNA在成年大鼠脑中有非常广泛的表达 ,其分布区域包括大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、嗅球及小脑等。NGBmRNA阳性物质定位于神经元的细胞质。 结论 NGBmRNA在大鼠脑中有非常广泛的表达 。

神经特异性转录因子DAT1 mRNA在大鼠中枢神经系统的定位

目的 观察神经特异性转录因子 (DAT1)在大鼠中枢神经系统中的定位。 方法 原位杂交组织化学染色。 结果 在大鼠中枢神经系统中 ,DAT1mRNA阳性反应产物主要位于胞质和突起内 ,DAT1mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓。强阳性信号主要出现于嗅球、梨状皮质、纹状皮质、内嗅皮质、海马CA1区、齿状回、丘脑后外侧核、红核、被盖背侧核、延髓中央网状核、三叉神经运动核、舌下神经核、迷走神经核、楔束外核、疑核等部位 ;中等强度着色主要分布于大脑皮质Ⅱ～Ⅵ层、海马CA2区和CA3区、杏仁核、苍白球、内侧膝状体、外侧膝状体、视上核、未定带、弓状核、室旁核、黑质、中脑网状核、脑桥网状核、巨细胞网状核、外侧网状核、斜方体内侧核、前庭神经核、蜗神经背核、楔束核、中缝背核 ;在隔核、乳头体前核、上丘浅灰质层、下丘中央核、下丘外侧核、中央灰质、三叉神经中脑核、三叉脊束核、孤束核、下橄榄核、中央上核、小脑顶核、小脑间置核、小脑外侧核、脊髓灰质及丘脑的大部分核团可见弱的阳性细胞。 结论 DAT1广泛分布于大鼠中枢神经系统内 ,其分布与多巴胺能神经分布密切相关 ,提示该基因对大鼠中枢神经系统活动 ,尤其是多巴胺能神经递质活动具有重要的调节功能。

LMO3 mRNA在小鼠中枢神经系统的表达定位

目的 观察神经特异性转录因子LMO3mRNA在小鼠中枢神经系统中的定位。方法 原位杂交组织化学染色。结果LMO3mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓，在小鼠中枢神经系统中，LMO3mRNA阳性反应产物主要位于细胞质和突起内。强阳性信号主要出现于大脑皮质的Ⅱ一Ⅵ层、梨状皮质、内嗅皮质、海马的CA1区、齿状回、中脑的黑质致密部、红核、室旁核、巨细胞网状核、外侧网状核、三叉神经脑桥核、面神经核、三叉神经运动核、舌下神经核等部位；中等强度着色主要分布于扣带前皮质、嗅球、海马的CA2区、梨状内核、杏仁核等部位；海马的CA3区、尾壳核、苍白球、杏仁复合体、丘脑、三叉神经脊束核、疑核、中缝核团、小脑间置核及外侧核、浦肯野细胞可见弱的阳性细胞。结论LMO3基因在CNS的广泛分布提示它除了在多巴胺神经递质的活动中起作用外，还参与了机体的学习记忆、嗅觉的调节。

LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达

目的：研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达．方法：采用以SYBR Green Ⅰ为荧光染料的定量RT-PCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达．结果：FQRT-PCR结果表明，LMO3在出生前高表达，P7d后表达水平急剧下降，至成年都维持在一个较低的水平．LMO3 mRNA在小鼠胚胎期E10．5d即有表达，但仅限于整个脑泡组织内，胚体其他区域均为阴性；E11．5d脑区信号逐渐加强，无核团及脑区的特异性，胚体其他部分仍为阴性；E15．5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色；P7d LMO3阳性信号较出生前变弱，分布逐渐集中；P14～P60d LMO3mRNA表达范围较P7d逐渐缩小，但仍有广泛表达，阳性信号主要集中于不同核团，表达有强弱之分．结论：LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持有关．

大鼠三叉神经节及尾侧亚核内降钙素基因相关肽在面口部伤害性刺激时的动态变化

为了探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在面口部伤害性刺激条件下合成、运输和释放的规律，将福尔马林注入大鼠一侧口周皮下，分别于刺激后不同时间取材，用原位杂交和免疫组织化学方法观察ＣＧＲＰｍＲＮＡ及ＣＧＲＰ样阳性结构（ＣＧＲＰ－ＬＩ）在三叉神经节（ＴＧ）和三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内的动态变化。原位杂交结果显示：ＴＧ内表达ＣＧＲＰ的两种亚型α－ＣＧＲＰ和β－ＣＧＲＰｍＲＮＡｓ神经元的数量分别于福尔马林刺激后２ｈ和４ｈ有明显增加，８ｈ达到高峰，然后渐下降，至４８ｈ后恢复至正常。免疫组织化学结果显示：Ｖｃ浅层ＣＧＲＰ－ＬＩ的含量在刺激后１ｈ内明显减少，２ｈ后渐增，１２ｈ达到高峰，２４ｈ后趋向正常。ＴＧ内ＣＧＲＰ－ＬＩ神经元的数量在刺激后１ｈ内也明显减少，此后逐渐回升至正常并有轻度增加，但与正常间无明显差异。

脑红蛋白mRNA在大鼠眼球中的表达

目的了解脑红蛋白(Ngb)mRNA在大鼠视网膜中的定位。方法用地高辛标记的cRNA原位杂交组织化学技术观察成年Wistar大鼠视网膜中脑红蛋白mRNA的正常分布。结果NgbmRNA在成年大鼠视网膜中表达强烈,主要分布于外、内核层及神经节细胞的细胞质。结论NgbmRNA在大鼠的视网膜中高度表达,提示Ngb基因可能在维持视网膜中氧平衡状态时发挥重要作用。

组胺在豚鼠颈上神经节中的分布

目的 检测组胺在外周交感神经元中的分布。 方法 应用原位杂交组织化学技术检测组氨酸脱羧酶 (HDC)mRNA的表达 ,用荧光双标免疫组织化学技术观察组胺和酪氨酸羟化酶 (TH)在神经细胞中的共存。 结果 豚鼠颈上神经节中有较多的神经元呈HDC阳性 ,HDCmRNA阳性信号在大、小细胞的细胞浆内均有分布 ,在细胞核内未检测到阳性信号 ;组胺的阳性细胞和TH的阳性细胞在豚鼠颈上神经节中均有大量分布 ,在大型和小型神经元内均发现有双标阳性信号 ;6 羟多巴胺 (6 OHDA)化学损毁颈上神经节的交感神经细胞后阳性细胞大量减少。 结论 提示在颈上神经节细胞的胞浆内有组胺的合成 ,组胺与单胺类神经递质在外周交感神经元中共存。

实验性早期糖尿病大鼠视网膜水通道蛋白4及其mRNA的表达变化

目的:探讨实验性早期糖尿病鼠视网膜水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA的表达变化及其意义。方法:用链脲菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射的方法建立大鼠糖尿病模型,运用墨汁灌注实验检测视网膜微血管渗漏情况;用免疫荧光组织化学检测AQP4在视网膜内的分布和表达变化;用原位杂交和RT-PCR检测AQP4 mRNA在视网膜内的分布及表达变化。结果:与同龄正常对照组大鼠相比,早期糖尿病鼠视网膜未见明显血管渗漏现象,但存在部分细胞水肿、节细胞数目减少、感光细胞外节排列紊乱等病理改变;免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR结果显示,模型鼠视网膜内AQP4及其mR-NA的表达明显增强。结论:实验性早期糖尿病鼠视网膜,在微血管病变发生前,已存在细胞水肿等病理改变;AQP4及其mRNA的表达明显上调。AQP4表达上调可能是糖尿病早期视网膜水肿形成、视功能下降的重要原因。