改良三套管法建立大鼠左肺原位移植模型

背景:肺移植是治疗终末期肺部疾病的惟一方法。建立肺移植动物模型是肺移植基础研究的首要条件。目的:建立一种简便、稳定和有效的同种大鼠异体左肺原位移植模型。方法:50只雄性SD大鼠随机分为供体以及受体,采用改良三套管法进行大鼠左肺原位移植。首先完成供肺制备,并将供肺置于受体原左肺上方并保持供肺于4℃LPD液环境中。按照左肺动脉-左肺静脉-左肺支气管的顺序依次完成供肺与受体相应结构的吻合。然后依次开放左肺静脉-肺动脉,调整潮气量,离断受体原左肺。观察手术成功率、手术时间,5周后对受体行血气分析。结果与结论:手术成功率92%,手术时间为(55±3)min,术后存活均达5周。5周后阻断右肺门15min前、后左肺静脉取血,血气分析差异无显著性意义(P>0.05)。提示新改良的三套管法是一种简便稳定有效的大鼠原位左肺移植模型。

小鼠左肺原位移植模型的建立

目的通过显微外科技术建立小鼠原位肺移植模型,为肺移植研究提供动物模型。方法采用C57BL/6小鼠作为供、受体,行同基因小鼠原位左肺移植,使用Cuff套管法进行气管及血管吻合。术后7、14、21、28 d取移植肺及原肺,行HE染色,评价肺移植后效果。结果学习曲线后,共30例小鼠移植,手术成功率89%,小鼠成活率100%。供体手术时间:(35.2±9.81)min,受体手术时间:(24.6±7.42)min,冷缺血时间是:(46.6±8.92)min,热缺血时间是:(17.2±3.08)min。同基因移植物大体及病理无明显改变,病理显示与原肺无差别。结论本技术能够方便快捷建立小鼠肺移植模型,成功率高,可重复性强,符合原位肺移植临床生理,是研究肺移植发病机制和治疗的良好动物模型。

大鼠同种异体左肺原位移植模型的方法改进

目的建立一种更简单有效的大鼠左肺原位异体移植模型。方法持续供肺肺动脉低压灌注4℃的低钾右旋糖苷(LPD)液,采用连续外翻法褥式缝合吻合支气管膜部、肺静脉、肺动脉,快速建立大鼠左肺原位移植模型。结果60只SD大鼠接受左肺移植,平均吻合时间(36.2±9.6)min,手术成功率91.7%。术后抗免疫治疗,1周存活率为70.9%;2周存活率为50.9%;4周存活率为21.8%。术后肺动脉栓塞1例,死于术后第3天,余所有受体大鼠没有发现吻合口狭窄及栓塞。结论该新的模型对于研究肺移植供肺保护、缺血再灌注损伤以及急、慢性排斥反应等近远期的相关问题,具有简单可靠、存活时间长的优点。

大鼠单肺原位移植模型的建立及改良

目的:改进大鼠原位单肺移植模型建立的方法,建立稳定的动物模型。方法:将46只健康SD雄性大鼠随机配对,采用三袖套法进行肺动、静脉及支气管的吻合,建立大鼠肺移植模型。结果:手术成功20例,失败3例,其中肺静脉撕裂1例,吻合肺动脉失败1例,术后出血失败1例。供肺获取时间为(11.6±2.1)min,供肺套管时间为(13.6±2.4)min,动静脉和支气管套管吻合时间为(17.7±3.5)min。血气、胸片及病理检查证实成功建立大鼠单肺原位移植模型。结论:改良的建立大鼠单肺原位移植模型的方法能够更好的满足肺移植研究的需要。

大鼠自体左肺原位移植模型的建立

目的 建立大鼠自体左肺模拟原位移植模型 ,探讨缺血 -再灌注 (IR)对移植肺功能损伤的可能影响。方法 模拟临床肺移植建立大鼠自体左肺原位移植模型。分别于游离左肺门 (对照组 )、缺血 4小时 (缺血组 )和缺血 4小时再灌注 4小时 (IR组 )后测定动脉血氧分压 (Pa O2 )、动脉血二氧化碳分压 (Pa CO2 )、气道峰压 (Paw)及支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中蛋白含量和左肺含水量 ,并取左肺组织作病理学观察。 结果 所有动物术后均存活。 Pa O2 、Paw、BAL F蛋白含量及左肺含水量 ,IR组与对照组和缺血组之间比较差别均有显著性意义 (P<0 .0 1) ;3组间 Pa CO2 无明显差别 (P>0 .0 5 ) ;IR组病理改变最严重。 结论 该方法的建立为研究 IR对移植肺损伤机制提供了较为理想的动物模型。

阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠肺移植术后闭塞性细支气管炎的影响

目的本研究使用抗CD40L抗体(克隆号:MR1)阻断CD40-CD40L信号通路,利用小鼠原位左肺移植模型,对比其与传统免疫抑制剂环孢素/甲泼尼龙对小鼠术后移植物闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis,OB)的治疗效果,并进一步评估其对移植物术后损伤的影响及相应机制,为临床肺移植术后治疗方法提供新思路。方法构建小鼠原位左肺移植模型,以野生型Balb/c小鼠作为供体小鼠,野生型C57BL/6小鼠作为受体小鼠。移植术后10 d,牺牲小鼠,采用苏木精/伊红(hematoxylineosin,HE)染色、Masson染色以及中性粒细胞特异性染色(抗髓过氧化物酶),观察各组移植左肺的组织病理学改变,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测移植物中白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)mRNA的表达水平的变化。结果术后10 d,注射了环孢素/甲泼尼龙和抗CD40L抗体治疗的小鼠,移植左肺外观体积增大;病理结果显示抗CD40L抗体治疗组较环孢素/甲泼尼龙治疗组炎性细胞浸润和OB现象得到有效缓解(P<0.05),中性粒细胞浸润显著减少(P<0.01);抗CD40L抗体治疗组移植物中IL-17A mRNA表达水平,较环孢素/甲泼尼龙治疗组显著降低(P<0.01)。结论利用抗CD40L抗体阻断CD40-CD40L信号通路能够有效保护移植物细支气管上皮,缓解小鼠肺移植术后急性排斥和OB反应以及小气道损伤,且效果优于传统抑制剂环孢素/甲泼尼龙。

兔左肺原位移植模型的建立

随着临床肺移植的发展，需要对包括供肺保存、缺血一再灌注（VR）损伤等相关领域进行更广泛深入的研究。大鼠是目前在肺移植研究中广泛使用的实验动物。但相对于大鼠，家兔是手术操作接近临床实际且经济性较好的异体原位肺移植实验动物，在肺移植研究中有着广泛前景。为了便于对肺移植过程的IR损伤及其保护措施进行研究，我们在参考Yoshida等研究的基础上制作了本实验模型。

大鼠同种异体左肺原位移植模型的方法改进

目的 通过改进的三袖套管吻合技术建立大鼠左肺原位移植模型。方法 将 40只SD大鼠随机分为供受体两组 ,采用三袖套管技术完成肺动静脉和支气管的吻合。结果 在 2 0例手术中 ,供肺灌注到摘取需时 (8± 1)min ,供肺完成套管需时 (6± 2 )min ,供受体动静脉和支气管吻合需时 (11± 2 )min ,移植物总缺血时间 (3 6± 7)min ,手术平均时间 (5 9± 4)min ,手术成功率90 % (18/ 2 0 ) ,术后生存率 10 0 %。结论 采用改进的三袖套管吻合技术成功建立大鼠左肺原位移植模型 。

脂质体介导报告基因Lac-Z导入大鼠原位移植肺细胞的实验研究

目的 通过体外途径的脂质体介导将报告基因 (Lac -Z基因 )转入移植肺并表达 ,证明将外源基因转入移植肺进行基因治疗的可行性。方法 首先建立大鼠左肺原位移植模型和经肺静脉逆行灌注技术。然后将 18只SD大鼠随机分为转基因组、脂质体组和空白对照组 ,每组各 6只。转基因组经肺静脉将质粒载体DNA(PSV -β -gal) /脂质体Lipofectin R○ (DOTMA/DOPE )复合物灌注入移植肺 ;脂质体组和空白对照组则分别灌注脂质体和 0 9%生理盐水。手术 1d以后获取肺脏 ,冰冻切片 ,经X -gal组织化学染色检测Lac -Z基因的转染和表达情况。结果 转基因组 3例都检测到Lac -Z基因的表达。其表达位于气管上皮细胞和肺泡上皮细胞内 ,呈点片状兰斑。而脂质体组和空白对照组则均未检测到Lac -Z基因的表达。结论 以质粒表达载体PSV -β -gal/脂质体Lipofectin R○ 复合物的形式 ,经肺血管 (静脉逆行 )灌注方式 ,把外源基因转入移植肺是可行的。本实验为进一步开展大鼠肺移植术后缺血 -再灌注损伤。

大鼠原位左肺移植模型建立的学习曲线分析

目的分析大鼠原位左肺移植模型建立的学习曲线。方法将学习制作该模型的前80只大鼠分为四个阶段,每阶段各20只,对操作时间、手术成功率、术后存活率及并发症进行分析。结果各阶段操作时间逐渐减少,并发症发生率降低,手术成功率及术后存活率稳步上升,在第Ⅲ、Ⅳ阶段模型趋于稳定。结论经过耐心反复的连续训练,初学者能够熟练掌握大鼠原位左肺移植术实验研究方法。

改进三袖套管吻合技术在大鼠同种异体左肺原位移植实验中的应用

为改进三袖套管吻合技术,建立大鼠同种异体左肺原位移植模型.作者选用健康普通级SD大鼠,完成10例大鼠左肺原位移植.结果10例(包括空白对照組3例)大鼠肺移植中,除最初2例因手术配合欠侍,肺静脉套管时,肺静脉撕裂导致手术失败外,其余8例手术均取得成功,成功率为80%.受体手术时间为60～90(平均65.6)min,移植物总缺血时间为60～120(平均87.5)min.结果表明,模型的建立对于利用优良鼠品系,降低实验成本,为进一步开展肺移植的转基因研究等建立良好的基础.

抗CD3单抗诱导CD4+FoxP3+调节性T细胞分化并缓解小鼠肺移植急性排斥

目的建立小鼠原位左肺移植模型,探究抗CD3单抗缓解肺移植急性排斥损伤的作用机制,为其在临床肺移植的应用提供理论依据。方法选取SPF级野生型BALB/c和C57BL/6小鼠,构建原位左肺移植模型,设置同种同型对照组(C57BL/6→C57BL/6,6只)、同种异型对照组(BALB/c→C57BL/6,6只),同种异型单抗处理组(BALB/c→C57BL/6,4只)。术后第2~6天及第9天每日腹腔注射50g抗CD3单抗。采用苏木精-伊红、马松染色以及CD3/髓过氧化物酶(MPO)免疫组化染色,观察各组移植肺T淋巴细胞和中性粒细胞浸润分布情况,进行急性排斥病理评分;实时荧光定量RT-PCR检测移植肺组织转录因子FoxP3和细胞因子IL-17A、IFN-γ的mRNA表达水平;流式细胞术检测受体小鼠脾脏中FoxP3+调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞的比例。结果移植术后10天,同种同型组移植肺外观呈淡红色,柔软有弹性,病理学检测未见明显的炎症细胞浸润和组织损伤;同种异型对照组移植肺外观呈绛紫色,硬度增加;同种异型单抗处理组外观淡红柔软,与同种异型对照组比较,淋巴细胞、中性粒细胞浸润显著减少,急性排斥损伤病理评分降低。实时荧光定量RT-PCR结果显示,与同种同型组相比,同种异型组移植肺中IL-17A和IFN-γmRNA的表达水平升高;抗CD3单抗可降低移植肺中IL-17A与IFN-γmRNA表达水平,升高FoxP3mRNA表达水平。流式细胞术结果显示,与同种同型、同种异型对照组相比,单抗处理组小鼠脾脏中Treg占CD4+T细胞的比例显著升高。结论抗CD3单抗可诱导CD4+FoxP3+Treg的分化并缓解肺移植急性排斥损伤。